Method Article

A عكسية ، غير الغازية طريقة لقياس مقاومة مجرى الهواء وأخذ عينات السوائل غسل القصبات في الفئران

DOI:

10.3791/1720

⸱

April 13th, 2010

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Medicine, Baylor College of Medicine (BCM), 2Millenium Premier Group, 3Department of Immunology, Baylor College of Medicine (BCM)

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

القياسات المتكررة لفسيولوجيا الجهاز التنفسي القوارض وأخذ العينات من الخلايا الهوائية الملتهبة مرغوب فيها ، ولكن عموما ليست مجدية. نحن هنا تصف طريقة لتكرار intubating شفويا الفئران التي تسمح القياسات المتكررة لhyperreactivity الهوائية وأخذ العينات من الخلايا الهوائية الملتهبة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

hyperreactivity الهوائية (AHR) القياسات وأخذ العينات الشعبى غسل السائل (BAL) ضرورية لنماذج تجريبية الربو ، ولكن إجراءات المتكررة للحصول على مثل هذه القياسات في نفس الحيوان هي عموما ليست مجدية. هنا ، علينا أن نظهر للحصول على البروتوكولات من الفئران القياسات المتكررة لAHR والقصبات عينات السائل غسيل. وقد تم الطعن الفئران الأنف سبع مرات على مدى 14 يوما مع حساسية قوية صورية أو المعالجة. قبل التحدي الأولي ، وفي غضون 24 ساعة بعد كل تحد الأنف ، تم تخدير الحيوانات نفسها ، intubated شفويا والتهوية ميكانيكيا. وتم تحديد AHR ، المقررة بمقارنة منحنيات الاستجابة للجرعة مقاومة الجهاز التنفسي (RRS) الناجم عن زيادة جرعات في الوريد من كلوريد (ACH) أستيل بين الشام وحساسية تحدى الحيوانات. بعد ذلك ، وعبر التنبيب نفسه ، كان lavaged الرئة اليسرى بحيث يمكن أن يؤديها تعداد الفرق من الخلايا الهوائية. هذه الدراسات تكشف أن القياسات المتكررة لAHR BAL وجمع السوائل ممكن من الحيوانات نفسها ، ويتم تحقيق ذلك فرط الاستجابة القصوى مجرى الهواء وكثرة اليوزينيات مجرى الهواء في غضون 7-10 أيام من بدء التحدي حساسية. هذه التقنية الجديدة يقلل بشكل ملحوظ من عدد من الفئران اللازمة لإجراء التجارب الطولية وينطبق على مختلف أنواع القوارض ، ونماذج الأمراض والصكوك الهوائية الفيزيولوجيا.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

حساسية التحدي :

  1. C57BL / 6 الفئران ، 4-8 أسابيع من العمر ، يتم تخدير في غرفة محكمة الإغلاق شبكي تطهير isoflurane مع 3.2 ٪ في خليط بخار الأكسجين لمدة 10 دقائق لتحقيق التخدير العام العميق.
  2. تدار حساسية الأنف التحديات (45μL OVA (22.5 ميكروغرام) و7μL ألف الرزية (7 ميكروغرام) ، في برنامج تلفزيوني) ، كل يوم ثلاثاء والخميس والأحد ، على ما مجموعه سبعة طلبات متتالية.

التخدير :

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

دراسة الربو وانسداد مجرى الهواء ومختلف الأمراض الأخرى ، يشكل حقل نشط ، وتوسيع البحوث الطبية الحيوية. عنصرا هاما من عناصر المتعلقة بالربو البحوث التجريبية هي القدرة على قياس التغيرات في حجم مجرى الهواء تحت ظروف مختلفة. تضييق مجرى الهواء المفرط في الاستجابة لتحدي استفزازية ، وهي ميزة الكنسي من الربو وأمراض الرئة ذات الصلة ، وخاصية من مجرى التنفس يسمى فرط الاستجابة ، هو العنصر الرئيسي في الهجمات هامة سريريا مما يؤدي إلى ضيق في التنفس وأعراض أخرى ، بما في ذلك الموت.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشكر الدكتور جورج Mintzer لاقتراح إجراء التنبيب فموي رغامي الالياف البصرية. بدعم من المنح U19AI070973 ، R01AI057696 ، K02HL75243 وR01HL082487 من المعاهد الوطنية للصحة.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

وكان مجرى القياس الفسيولوجي البرنامج (Rescomp) مخصص أعدت (رئيس المجموعة للألفية ؛ 415-519-4371).
وتم تحليل البيانات باستخدام محطة عمل كمبيوتر يعمل بنظام التشغيل ويندوز إكس بي ومجهزة وحدة المعالجة المركزية بنتيوم الثالث (إنتل ، وشركة سانتا كلارا ، كاليفورنيا) والتناظرية 17 - pin لتحويل الاشارات الرقمية (صكوك الوطنية ، # PC - LPM16).
وكان من محطة صغيرة فسيولوجيا الحيوان الهوائية المخصصة تجميعها (الألفية رئيس الفريق) باستخدام محولات الضغط المتاحة تجاريا (الجزء # TRD5700 وTRD4510) ، وحدات preamp (الجزء # MAX2270) ، هيكل (الجزء # MAX1320 ، وكل من شركة Buxco يلمينغتون ، نورث كارولاينا ) والمخصصة مخطاط التحجم الحيوانات الصغيرة.
0.5mm الخارجية القطر الصفحات الألياف البصرية ، وصلة لمصدر الضوء (كول بالمر المنور ، سلسلة 41722)
منفسة (جهاز ماوس مروحة هارفارد ، # 687)
10 ملم وإبر 27ga دينار بحريني (العلوم البيولوجية ، والقط. رقم 309602)
حرارة المصباح
1 مل حقنة دينار بحريني (العلوم البيولوجية ، والقط. رقم 305109)
4 المشابك (المهر المشبك ربيع 3200)
0.5 ملم سلك خارجي لدليل التنبيب
عدادة الكريات
شرائح مجهرية Superfrost / الجمع (فيشر القط. رقم 12-550-15)
Shandon تصفية بطاقات (الحرارية القط. رقم 5991022)
الفرق الشريحة الخلية وصمة عار (فيشر القط. رقم 122911)
مجهر ضوئي (لايكا)
Cytospin 3 (Shandon)
20 GA ، 1.25 بوصة ProtectIV القسطرة الوريدية (سميث الطبية)
الألياف الضوئية 0.5 مم البوليمر (ادموند البصريات # NT02 - 532).

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hamelmann, E. Noninvasive measurement of airway responsiveness in allergic mice using barometric plethysmography. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156, 766-775 (1997).
  2. Adler, A., Cieslewicz, G., Irvin, C. G.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Airway Resistance MeasurementsBronchoalveolar LavageOral Intubation MiceMechanical VentilationAcetylcholine ChallengeRespiratory System ResistanceTail Vein InjectionFiber Optic ThreadTracheal CannulaBAL Fluid Collection

Related Articles