العديد من الأنسجة النباتية ، بما في ذلك اللحاء والخشب من الصنوبر loblolly ( صنوبر taeda L.) ، تحتوي على مستويات عالية من السكريات والفينولات التي تتداخل مع تنقية الحمض النووي الريبي. يناقش هذا العرض التقديمي تقنيات حصاد الميداني نمت الأنسجة وعزل الحمض النووي الريبي ذات نوعية كافية لميكروأرس الجينومية والتحليلات الأخرى.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
طريقة محسنة لعزل الحمض النووي الريبي من الصنوبر Loblolly ( P. taeda L.) والأنواع الأخرى الصنوبرية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الأنسجة المعزولة من الأنواع الصنوبرية ، وبخاصة أولئك الذين ينتمون إلى عائلة Pinaceae ، مثل الصنوبر loblolly (
البروتوكول
الجزء 1 : حصاد شجرة
بعد اختيار الأشجار وقطعها ، فإنه من المهم أن تعمل بدقة وبأسرع وقت ممكن. كما هو حصاد كل نوع من أنواع الأنسجة المختلفة ، ينبغي وضعها على الفور في السفن الخاصة النيتروجين السائل لتفادي أي تلوث المواد عبر العينة. هذا البروتوكول هو عزل الحمض النووي الريبي للتحجيم.
- قطع البراغي في أطوال حوالي متر و0،5-،75 برصيد بالمنشار النباح في اثنين أو ثلاثة من الأماكن التالية المحور الطولي للالترباس.
- باستخدام إزم....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يمكن الحصول على نوعية عالية من الحمض النووي الريبي الأنواع الصنوبرية يكون مهمة صعبة نظرا لمستويات عالية من مركبات الفينول والسكاريد موجودة في الأنسجة الخشبية. بدءا من البروتوكول التي وضعتها تشانغ وآخرون. (1) ، وجدنا أن استخراج أكثر صرامة وتنظيف خطوات تؤدي إلى العزلة ثابت من الحمض النووي الريبي مجموع جدا عالية الجودة من مختلف الخشبية والأنسجة غير الخشبية عينات من مجموعة واسعة من الأنواع الصنوبرية. وقد أثبت هذا الفيديو ليس فقط لدينا العزل RNA تعديل البروتوكول ، ولكن أيضا على الخطوات.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
نود أن نشكر الأشخاص الذين التالي دون مساعدة مجموعة من الأنسجة الصنوبر لن يكون ممكنا : الدكتور جو نيرن ، Bryman مات ، مايكل بوردو ، Bagal Ujwal ، جين Huizhe ، وأماندا بوفييه.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| محلول عازل لعزل الحمض النووي الريبوزي (RNA) | 2% CTAB (بروميد هيكساديسيل تريميثيل الأمونيوم)، 2% PVP (بولي فينيل بيروليدون؛ الوزن الجزيئي 30-40,000)، 100 ملي مولار Tris-HCl (الرقم الهيدروجيني 8.0)، 25 ملي مولار EDTA، 2.0 مولار NaCl، 0.5 جم/لتر سبيرميدين | ||
| كلوروفورم | Fisher Scientific | C298-4 | |
| فينول، عالي النقاء | Invitrogen | 15509-037 | |
| 10M LiCl | مُحضّر باستخدام مياه معالجة بـ DEPC | ||
| محلول SSTE المنظم | 1 مولار NaCl، 0.5% SDS، 10 ملي مولار Tris-HCl (الرقم الهيدروجيني 8.0)، 1 ملي مولار EDTA (الرقم الهيدروجيني 8.0) | ||
| خلات الصوديوم (NaOAc) بتركيز 3 مولار ورقم هيدروجيني 4.8 | أُعدَّ باستخدام ماء معالج بـ DEPC | ||
| فينول-كلوروفورم (الرقم الهيدروجيني 8.0) | ١٢٠ ملليلتر من الفينول، و١٦٠ ملليلتر من الكلوروفورم، تم معايرتهما بعدة تغييرات من محلول Tris-Cl بتركيز ٠.٥ مولار ورقم هيدروجيني pH ٨.٠ | ||
| أنابيب تيفلون عالية السرعة من Oak Ridge | Thermo Fisher Scientific, Inc. | #05-562-16B | |
| أنابيب عالية السرعة من البولي بروبيلين سعة 50 مل | Thermo Fisher Scientific, Inc. | #05-562-10K | |
| أنابيب BD Falcon مخروطية الشكل، معقمة، ذات سدادة، سعة 50 مل، مخصصة للاستخدام مرة واحدة | VWR international | #21008-939 | |
| جل Phase Lock Heavy، 2 مل | Thermo Fisher Scientific, Inc. | #2302830 | |
| أنابيب طرد مركزي دقيقة خالية من RNase من Ambion، سعة 2 مل | Ambion | #AM12425 |
المراجع
- Chang, S., Puryear, J., Cairney, J. A simple and efficient method for extracting RNA from pine trees. Plant Molecular Biology Reporter. 11 (2), 113-116 (1993).
- Lorenz, W. W., Yu, Y. S., Siműes, M., Dean, J. F. D. Processing the Loblolly Pine PtGen2 cDNA Microar....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
