Method Article

تنقية م. magneticum سلالة AMB - 1 بروتين المرتبطين Magnetosome MamAΔ41

DOI:

10.3791/1844

⸱

March 25th, 2010

 , 
1Department of Life Sciences and National Institute for Biotechnology in the Negev, Ben-Gurion University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ماما هي فريدة من نوعها Magnetosome البروتينات المرتبطة بها والتي كانت معروضة على المشاركة في تنشيط magnetosome. هنا نقدم بروتوكول تنقية ماما الحذف متحولة (MamAΔ41) من م. magneticum AMB - 1.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

البكتيريا Magnetotactic تضم مجموعة متنوعة من الكائنات المجهرية المائية التي تكون قادرة على توجيه نفسها على امتداد الحقول المغنطيسية. ويعتقد أن هذا السلوك للمساعدة في بحثهم عن بيئات مناسبة

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. الاستنساخ والتعبير عن الجينات ماما في E. القولونية

وقد تتضخم متحولة mamAΔ41 الجينات باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) من الحمض النووي الجينومي للmagneticum Magnetospirillum AMB - 1 ، مع الاشعال : 5' - GCATTACGCATATGGACGACATCCGCCAGGTG - 3 "و 5' - GCGCGGCAGCCATA - 3 - TGGCATACG. شظايا من الحمض النووي في تضخيمها ، تم استحداث لموقع NcoI في ATG كودون بدء واستعيض عن رامزة إنهاء مع موقع ScoI. وهضمها شظايا مع NcoI وSACI والمستنسخة في مواقع كل من pET52b (+) ، مما أدى إلى AMB1 - pET52bMamAΔ41. في هذا البناء ، وتنصهر فيها....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تنقية البروتين هو خطوة رئيسية في أي البروتينات الحيوية أو الدراسات البنيوية. لأن كل من البروتين هي فريدة من نوعها مع سلوكها ، ويحتاج المرء لتحديد خصائصه وتعديلها وفقا لذلك تنقية. وينبغي تحليل البروتين الهدف كخطوة أولى نحو تنقية استخدام أدوات المعلوماتية الحيوية. يتم استخدامها لحساب الهدف ISO - الكهربائية نقطة ، وتقييم حاجتها إلى تخفيض / المؤكسدة البيئة وحاجتها لأيونات الخاصة / يغاندس. هناك العديد من التعديلات الهامة التي تعكس بروتوكول لدينا تفرد الهدف. وتشمل هذه التعديلات العازلة .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نعترف الدكتور أمير أهاروني لدعمه وجينو دافيدوف ، Grimberg نعوم وتشن غوتمان للحصول على المشورة وتعليقاتهم.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
معداتالصحافة الفرنسيةثيرمو فيشر العلمي ، Inc.FA-078A
معدات خلايا الضغطثيرمو فيشر العلمية، Inc.FA-032
معدات الطرد المركزي الفائقSorvall ، Thermo ScientificDiscovery 90SE
معداتالروتةBeckman Coulter Inc.الفائقة Ti60
؛ جهاز كمبيوتر زجاجة + غطاء فحص 26.3 ملمعداتBeckman Coulter Inc.BC-355618
قطر 2.5 سم ، معدات أعمدة الكروماتوغرافيا الزجاجية Econo-ColumnBio-Rad737-2521
Ni-NTA معدات راتنجNovagen ، EMD MilliporeM0063428
معداتمقياس الطيفAmershamUltraspec 2100 pro
معدات كوفيت الكوارتزHellma104-QS
كروماتوغرافيا سائلة سريعة الأداء- جهاز تنقية AKTA 10معداتGE Healthcare28-4062-64
عمود التبادل الأيوني &# 8211; MonoQ 4.6 / 100 PEEquipmentGE Healthcare10025543
استبعاد الحجم عمود معبأ مسبقا-HiLoad 26/60 Superdex 200EquipmentGE Healthcare17-1071-01
Centricon - Vivaspin15 &# 8211; 10,000 MWCOEquipmentSartorius AGVS1501
معدات الطرد المركزي للطاولةThermo Fisher Scientific، Inc.IEC CL30R
MALDI-TOFEQUIPMENTBruker CorporationReflex IV
Tris-HCl (hydrotymethyl) كاشف أمينوميثانBioLab20092391
كاشفكلوريد الصوديومFRUTROM235553470
كاشف إيميدازولAlfa Aesar288-32-4
مثبطات البروتياز الخالية من EDTA كاشفسيجما ألدريتشP-8849
Dnase I (Deoxyribonuclease I)كاشفSigma-AldrichDN-25
كاشفالثرومبين البقريفيشر ScientificBP25432
كاشفجلايسينBioLab07132391
سوديم كبريتات دوديسيل (SDS)كاشفBioLab19822391
بيتا ميركابت&# 8211; كاشفسيجما ألدريتشM-3148
كاشف InstantBlueExpedeon1SB01L
PageRuler كاشف سلم البروتين الملونمسبقا FermentasSM0671
أنابيب الطرد المركزي ربط الضوئي الكوكتيل الثانول

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Faivre, D., Schuler, D. Magnetotactic Bacteria and Magnetosomes. Chem Rev. 108, 4875-4898 (2008).
  2. D'Andrea, L. D., Regan, L. TPR proteins: the versatile helix. Trends Biochem Sci. 28, 655-662 (2003).
  3. Young, J. C., Barral, J. M., Hartl, U. lrich, F,

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

MamA PurificationAffinity ChromatographyIon Exchange ChromatographySize Exclusion ChromatographyRecombinant ProteinMagnetosome ProteinTPR DomainProtein HomogeneitySDS Page AnalysisFPLC System

Related Articles