Method Article

تحليل للوضع النمط الظاهري المورفولوجية كدالة للتركيز البروتين في الخميرة الناشيء.

DOI:

10.3791/1863

⸱

March 24th, 2010

 ,  , 
1Department of Biological Sciences and Purdue Center for Cancer Research, Purdue University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

حذف الجينات والبروتينات overexpression طرق مشتركة لدراسة وظائف للبروتينات. في هذه المقالة ، نحن تصف بروتوكولا لتحليل تطور النمط الظاهري كدالة للتركيز البروتين في السكان وحيدة الخلية في مستويات السكيراء الجعوية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

حذف الجينات والبروتينات overexpression طرق مشتركة لدراسة وظائف للبروتينات. في هذه المقالة ، نحن تصف بروتوكولا لتحليل تطور النمط الظاهري كدالة للتركيز البروتين في السكان وحيدة الخلية في مستويات

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ألف خلية ثقافة والحث البروتين

هذا المقطع يصف الظروف ثقافة الخلية ، الخلية دورة التزامن مع Nocodazole ، تليها تحريض من بروتين تعبير مروج regulatable في خلايا الخميرة.

  1. الخميرة النوع البري سلالة W303 (leu2 - 3 ، 112 trp1 - 1 can1 - 100 ura3 - 1 ade2 - 1 his3 - 11 ، 15) وتحولت مع نسخة عالية (2μ) DNA البلازميد الذي يحتوي على الجينات لدينا اهتمام (ENTH2) تحت السيطرة من مروج ميثيونين - repressible (MET25). 2mm وميثيونين يكفي لقمع نشاط المروج ، في حين أن وسائل ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا البروتوكول وصف كيفية رصد تطور النمط الظاهري المورفولوجية (خلية الخميرة غير قادر على الخضوع لانقسام الخلايا السليمة) على overexpression البروتين. عندما تفعل هذا الإجراء أنه من المهم أن نتذكر أن حصاد خلايا الخميرة التي التكوير في سرعة الطرد المركزي على النحو الموصى به أسرع بسرعة قد يؤدي إلى تلف الخلايا ونتائج غامضة. وينبغي أن يضاف الميثيلين الأزرق والأبيض Calcofluor العيش الخلايا فقط قبل التصوير لأنها سامة. ويمكن أيضا هذا الإجراء أن تتكيف بسهولة لاحظ الظواهر في ظل ظروف القمع الب.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشكر بريان جي الراكون وكلوديا حنا باء للمناقشات مفيدة والدعم. وقد أيد هذا المشروع من خلال البدء الأموال من إقلاع. العلوم البيولوجية ، جامعة بوردو لر كلاوديو أغيلار والجمعية الأميركية للسرطان المؤسسية منحة بحثية لر كلاوديو أغيلار من خلال مركز السرطان بوردو.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
كاشفNocodazoleSigma-AldrichM1404
الميثيلين الأزرق 1٪ (وزن / حجم)كاشفVWR الدوليVW6276-0
كاشف كالكوفلور الأبيضسيجما ألدريتشF3543
كاشفالفازلينVWR الدوليVW3339-2

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Rönicke, V., Graulich, W., Mumberg, D., Müller, R., Funk, M. Use of conditional promoters for expression of heterologous proteins in Saccharomyces cerevisiae. Methods Enzymol. 283, 313-322 (1997).
  2. Gietz, R. D., Woods, R. A.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Protein ConcentrationMorphological PhenotypeBudding YeastWestern BlottingMicroscopy AnalysisTime Lapse VideoSeptin MislocalizationCell Division DefectMethionine Repressible PromoterAgrose Bed Preparation

Related Articles