يتم زرع الجينات الحيوانية القبعات overexpressing منتج (ق) إلى الجهة تطوير القيطم المورق أجنة من أجل تحديد ما إذا كان يتم تحديد الأنسجة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تحديد الأنسجة باستخدام زرع رسملة الحيوان (ACT) في الفحص القيطم المورق
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
العديد من البروتينات تلعب دورا مزدوجا في التطور الجنيني. يمكن لتلك التي تنظم تقرير مصير الخلية في الأنسجة محددة تؤثر أيضا على تطوير أكبر منطقة جنين. هذا ما يجعل تحديد دورها في نسيج خاص يجعل من الصعب تحليلها. على سبيل المثال ،
البروتوكول
الجزء الأول مجموعة المتابعة للالفحص ACT
- توج توليد الحمض النووي الريبي للحقن كما اقترح من قبل الشركة المصنعة ، وذلك باستخدام الفينول منها : طريقة تنقية كلوروفورم (مثل mMessage mMachine كيت ؛ النظم البيولوجية التطبيقية / Ambion ، أوستن ، تكساس). ويستخدم الحمض النووي الريبي الترميز بروتين فلوري باعتبارها المذنبة. نحن تدوين بروتين فلوري إما أصفر (YFP) أو mCherry 5 [كدنا] ، الذي هو في تعبير pCS2 ناقلات +.
- سحب أنابيب الزجاج البورسليكات الشعرية لتشكيل الزجاج نصائح مدبب باستخدام مجتذب m....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في هذا الفيديو ، لقد أثبتنا لدينا نسخة من التقنيات التي يستخدمها علماء البيولوجيا الكلاسيكية القيطم ، ونحن ترتيبها لخلق غطاء زرع فحص الحيوانات. في درجة حرارة الغرفة ، والأجنة القيطم تتطور بسرعة كبيرة من خلال المراحل 9 و 15. عن طريق وضعها في 14 درجة مئوية وتباطأ ، ووضع الجنين إلى أسفل ويمكن تنفيذ العديد من عمليات زرع في تجربة واحدة. إذا كان ذلك ضروريا لنمو الأجنة في المراحل القديمة (> 42 / 43) ، ثم نوصي باستخدام حيوانات معدلة وراثيا فينوس YFP ، لأن حقن بروتين ف.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من البحوث للوقاية من العمى (جوائز التطوير الوظيفي لMEZ وASV ومنحة غير مقيد إلى قسم العيون) ، ومؤسسة ماتيلدا E. زيغلر (MEZ وASV) والمعهد الوطني للعيون / المعاهد الوطنية للصحة (MEZ والمنح وR01EY015748 R01EY017964).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| طقم mMessage mMachine SP6 | Applied Biosystems | AM1340 | |
| أنابيب شعرية من البوروسيليكات (1.0mm OD x 0.5mm ID) | FHC, Inc. | 27-30-1 | |
| جهاز سحب الماصات الدقيقة Sutter | Sutter Instrument Co. | P-97 | |
| كبريتات الجنتاميسين [50 mg/ml] | Fisher Scientific | BW17-528Z | |
| طقم Sylgard/elastomer 1.1lb | Fisher Scientific | NC9644388 | |
| أطباق بتري من البوليسترين 60 x 15 mm | USA Scientific, Inc. | 8609-0160 | |
| موجهة الغدد التناسلية المشيمية البشرية | Intervet Inc. | 22219 | |
| أنظمة الحقن المجهري Pico-Injector | Harvard Apparatus | 650003 | |
| حضانة Torrey Pines Scientific ECHOtherm | Fisher Scientific | 11-680-21 | |
| ماصة نقل | Krackeler Scientific, Inc. | 6290-20635A | |
| ملاقط Dumostar #5 | Fisher Scientific | 11295-10 |
المراجع
- Smith, W. C., Harland, R. M. Expression cloning of noggin, a new dorsalizing factor localized to the Spemann organizer in Xenopus embryos. Cell. 70, 829-840 (1992).
- Lamb, T. M. Neural induction by the secreted polypeptide noggin. Science. 262
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
استكشف المزيد من المقالات
