بروتوكول يلي الخطوط العريضة لعملية تشريح البنكرياس للتصوير شريحة الظاهري ، والقياس الكمي لاحقة من جميع GFP الموسومة خلايا بيتا في البنكرياس بأكمله.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
في الوضع الطبيعي للقداس الكمي بيتا في البنكرياس خلايا الفئران
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تتبع التغيرات في خلية معينة من السكان في الصحة والمرض هو هدف مهم للبحوث الطبية الحيوية. عملية رصد انتشار خلايا بيتا في البنكرياس ، ونمو الجزيرة هو تحديا من نوع خاص. طورنا طريقة لالتقاط توزيع خلايا بيتا في البنكرياس سليمة من الفئران المعدلة وراثيا مع مضان الموسومة خلايا بيتا مع ماكرو مكتوبة لImageJ (rsb.info.nih.gov / ط /). بعد تشريح البنكرياس وتطهير الأنسجة ، ويتم التقاط البنكرياس بأسره شريحة افتراضية ، وبعد ذلك يتم فحص GFP الموسومة خلايا بيتا. ويشمل التحليل الكمي لمجموع عدد خلايا بيتا منطقة الجزيرة ، وتوزيع حجم مع الإشارة إلى معلمات وأماكن محددة لكل جزيرة ومجموعات صغيرة من خلايا بيتا. يمكن رسم توزيع كامل من الجزر في ثلاثة أبعاد ، والمعلومات عن توزيع على حجم وشكل كل جزيرة يسمح مقارنة كمية ونوعية التغيرات في مجال خلايا بيتا الشاملة في لمحة.
البروتوكول
الجزء 1 : إعداد العينات
- مكان ماوس تحت المجهر تشريح ، وإزالة كامل البنكرياس مع الاثني عشر والطحال لا تزال تعلق ، ومكان الأجهزة على شريحة زجاجية قبل زنه. إزالة الاثنى عشر عن طريق قطع النسيج الضام لها على طول الجانب ، حيث كان من المحتم أن البنكرياس. قطع وإزالة الطحال والدهون الزائدة في البنكرياس حتى يتم معزولة تماما البنكرياس على الشريحة. (الدهون البنكرياس تكون مميزة من خلال لونه أبيض ، ومتباينة من لون أغمق قليلا وتانر من نسيج البنكرياس).
- مكان ساترة (كبير يغطي زجاج 50x75mm ؛ القياسية تغطية 25....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تحليل الصور الظاهري شريحة من الجزر ومجموعات خلايا بيتا في البنكرياس سليمة يقدم وجهة نظر واسعة النطاق لتوزيع كامل من الجزر. وبالتالي يمكن أن التطورات والتغيرات في توزيع مجموع جزيرة بمرور الوقت يمكن دراستها ومقارنتها. ويتجلى هذا مثلا في تحليلنا لتشكيل جزيرة البنكرياس (1). وقد أظهر تحليل شامل للبنكرياسات الفئران حديثي الولادة في نقاط زمنية مختلفة (P1 - P21) التي تتشكل الجزر بواسطة الانشطار. في حين بيتا تكاثر الخلايا يتناسب مع دالة كثافة الاحتمال lognormal في الفئران من P1 - P10 ، P12.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
وتدعم هذه الدراسة من قبل الولايات المتحدة الصحة العامة خدمة المنح DK - 081527 ، 072473 وDK DK - 20595 لجامعة شيكاغو ومركز أبحاث السكري التدريب (الحيوان النماذج الأساسية) ، وهبة من مؤسسة أسرة Kovler.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| ملقط | Miltex Inc. | ||
| مقص | F.S.T. | 14001-13 | 01n2 |
| مقص | F.S.T. | 14072-10 | 02s5 |
| شريحة زجاجية كبيرة | Electron Microscopy Sciences | 71862-01 | 75x51x1.2mm |
| غطاء زجاجي كبير | Ted Pella, Inc. | 260462 | 50x75mm |
| شريحة زجاجية | Fisher Scientific | 12-550-15 | 25x75x1.0mm |
| غطاء زجاجي | Fisher Scientific | 12-458-5M | 75x25mm |
| غطاء زجاجي | Erie Scientific | 25mm circle | |
| مجهر فلوري | Olympus Corporation | ||
| مجهر تشريحي | Olympus Corporation | ||
| Stereo Investigator | MBF Bioscience | ||
| فئران MIP-GFP | Jackson Laboratory |
المراجع
- Miller, K., Kim, A., Kilimnik, G., Moka, U., Jo, J., Periwal, V., Hara, M. Islet formation during the neonatal development in mice. PloS One. 4, E7739-E7739 (2009).
- Kilimnik, G., Kim, A., Jo, J., Miller, K., Hara, M. Quantification of pancreatic islet distribution in situ in mice. ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
