فلاش التجميد وCryosectioning E12.5 مخ الفأر

D. Spencer Currle; Edwin S. Monuki

doi:10.3791/198

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تظاهر في هذا الفيديو هي تقنيات الفلاش تجميد وsectioning الجنينية أنسجة المخ من الماوس. يتم إعطاء نصائح مفيدة لاستخدام ناظم البرد ، بما في ذلك الطرق لحل المشاكل التي يمكن استخدامها في حين قطع لضمان أن ينجم عنها من الأنسجة المقاطع خالية من الشقوق والتشوهات الأخرى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إصلاح الأنسجة في بارافورمالدهيد 4 ٪ في برنامج تلفزيوني عن الوقت المطلوب.
السكروز لبث الأنسجة (cryoprotection)
1. جعل 30 ٪ في محلول السكروز ث PBS / V 2059 في الأنبوب.
2. شطف الأنسجة 3X في برنامج تلفزيوني (~ 5 دقائق مع هزاز).
3. النسيج في محلول السكروز مكان 30 ٪. سوف الأنسجة لا تغرق.
4. مكان النسيج في 4 درجات مئوية خلال الليل ، أو حتى قد غرقت.
cryomold التسمية المناسبة مع حجم المعلومات والتوجيه.
ملء مع cryomold أكتوبر (تجنب فقاعات).
نقل الأنسجة لحمام أكتوبر وذلك مع معطف أكتوبر
نقل الأنسجة لفي أكتوبر cryomold.
توجيه النسيج تحت المجهر.
صب النيتروجين السائل في طبق بتري بلاستيكية.
بسرعة وبدقة أقل من الأنسجة في cryomold في النيتروجين. (لا يغرق في أعلى cryomold).
عندما أكتوبر صلبة بيضاء ، ضع الأنسجة المجمدة في الثلاجة -80 درجة مئوية للتخزين.
يوازن الأنسجة ل~ 20 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة على الأقل. قبل sectioning.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم

الشركة

رقم فهرسي

التعليقات

Tissue-Tek Cryomold

Ted Pella، Inc.

27181

O.C.T.

تيد بيلا ، إنك.

27050

السكروز

30٪ محلول سكروز في PBS w / v

بارافورمالدهيد

4٪ بارافورمالدهيد في PBS

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن