تظاهر في هذا الفيديو هي تقنيات الفلاش تجميد وsectioning الجنينية أنسجة المخ من الماوس. يتم إعطاء نصائح مفيدة لاستخدام ناظم البرد ، بما في ذلك الطرق لحل المشاكل التي يمكن استخدامها في حين قطع لضمان أن ينجم عنها من الأنسجة المقاطع خالية من الشقوق والتشوهات الأخرى.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
البروتوكول
- إصلاح الأنسجة في بارافورمالدهيد 4 ٪ في برنامج تلفزيوني عن الوقت المطلوب.
- السكروز لبث الأنسجة (cryoprotection)
- جعل 30 ٪ في محلول السكروز ث PBS / V 2059 في الأنبوب.
- شطف الأنسجة 3X في برنامج تلفزيوني (~ 5 دقائق مع هزاز).
- النسيج في محلول السكروز مكان 30 ٪. سوف الأنسجة لا تغرق.
- مكان النسيج في 4 درجات مئوية خلال الليل ، أو حتى قد غرقت.
- cryomold التسمية المناسبة مع حجم المعلومات والتوجيه.
- ملء مع cryomold أكتوبر (تجنب فقاعات).
- نقل الأنسجة لحمام أكتوبر وذلك مع معطف أكتوبر
- نقل الأنسجة لفي أكتوبر cryomold.
- توجيه النسيج تحت المجهر.
- صب النيتروجين السائل في طبق بتري بلاستيكية.
- بسرعة وبدقة أقل من الأنسجة في cryomold في النيتروجين. (لا يغرق في أعلى cryomold).
- عندما أكتوبر صلبة بيضاء ، ضع الأنسجة المجمدة في الثلاجة -80 درجة مئوية للتخزين.
- يوازن الأنسجة ل~ 20 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة على الأقل. قبل sectioning.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| قالب Tissue-Tek Cryomold | Ted Pella, Inc. | 27181 | |
| O.C.T. | Ted Pella, Inc. | 27050 | |
| محلول السكروز | محلول سكروز بنسبة 30% في PBS w/v | ||
| بارافورمالدهيد | بارافورمالدهيد بنسبة 4% في PBS |
إعادة الطباعة والأذونات
