اختبار تسلق الذبابة: طريقة لاختبار الحركة العامة في ذبابة الفاكهة السوداء

الملخص

المصدر: Gevedon، O.، et al. In vivo Forward Genetic Screen لتحديد الجينات الواقية من الأعصاب الجديدة في ذبابة الفاكهة السوداء. J. Vis. Exp. (2019).

يصف هذا الفيديو طريقة بسيطة لتحديد حركة الذباب ويظهر مقايسة التسلق التي تم إجراؤها. مقايسة تسلق الذباب هي اختبار عام للوظيفة الحركية التي تعتمد على استجابة جيوتاكس سلبية.

البروتوكول

هذا البروتوكول هو مقتطف من Gevedon et al. ، In Vivo Forward Genetic Screen لتحديد جينات جديدة واقية من الأعصاب في ذبابة الفاكهة السوداء ، J. Vis. Exp.(2019).

< p class = "jove_title" >1. اختبار التسلق (مقتبس من Ali et al. ، J. Vis. Exp. (2011))

1. التحقق من صحة اختبار التسلق. في هذه الدراسة ، اختبر مقايسة التسلق بناء على المنهجية الموصوفة سابقا من قبل Ali et al. ، باستخدام Elav^C155>UAS-Tau^R406W (يعرض معدلات تمرير تسلق أقل) و Elav^C155>UAS-GFP (تحكم) و Elav^C155>UAS-mCherry (التحكم).
2. اقلب الذباب في غرفة الاختبار ، سطرا واحدا في كل مرة (لا تستخدم تخدير ثاني أكسيد الكربون₂) واتركه يتعافى لمدة 5 دقائق. إذا تم إجراء الاختبار في أيام مختلفة ، فقم بإجراء الفحص في نفس الوقت من اليوم. في هذه الدراسة ، تم إجراء جميع فحوصات التسلق في فترة ما بعد الظهر للتحكم في تأثيرات الساعة البيولوجية على الحرك><ة. <فئة قوية = "ملاحظة" >ملاحظة تجنب تعريض الذباب لأشعة الشمس المباشرة عند الاختبار ؛ هذا سوف يتداخل مع قدرتهم على التسلق.
3. اضغط بالقوة على الغرفة (الجانب المحدد لأسفل) على لوحة الماوس الموضوعة على سطح صلب 3 مرات حتى يبدأ جميع الذباب في الفحص في الأسفل. راقب حركة الذباب على مدى 10 ثوان.
4. سجل عدد الذباب الذي يصل إلى خط 5 سم أو يمر به خلال هذا الوقت ، بالإضافة إلى العدد الإجمالي للذباب الذي تم اختباره. كرر البروتوكول ، وانتظر دقيقة واحدة بين كل تجربة ، لمدة لا تقل عن 3 تكرارات تجريبية لكل سطر.
   <فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة في هذه الدراسة ، احتوت كل قارورة على ما بين 2 و 19 ذبابة للفحص الأولي (ذكور الذباب) وما بين 6 و 21 ذبابة لتحليل نقص الطافرة للخطوط الأنثوية المتقاطعة.

المواد

<حدود الجدول = "0" cellpadding = "0" cellpacing = "0" نمط = "العرض: 1448 بكسل ؛" العرض = "1449"> قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات VWR® ذبابة الفاكهة قارورة ؛ ضيق < td style="العرض:310px;">VWR < td style="العرض:147px;">75813-160 < نمط td = "العرض: 420 بكسل ؛ "> < td height = "19" النمط = "الارتفاع: 20 بكسل ؛" > VWR® شريط وضع العلامات على المختبر للأغراض العامة VWR 89097-912 لوحة الماوس القياسية المجسم موتيك الموديل SMZ-168 ذبابة الفاكهة حاضنة VWR 89510-750 < td height = "19" نمط = "الارتفاع: 20 بكسل ؛" حزمة برامج >R