ذبابة الفاكهة السوداء تشريح المبيض: تقنية لتحضير الأنسجة خارج الجسم الحي

الملخص

المصدر: Parker، D.J.، et al. دراسة بنية الميتوكوندريا ووظيفتها في ذبابة الفاكهة المبايض. J. Vis. Exp. (2017).

يصف هذا الفيديو التشريح العام للمبيض ذبابة الفاكهة ويتميز بطريقة تشريح المبايض للتصوير الحي أو الثابت.

البروتوكول

< p class = "jove_content">هذا البروتوكول هو مقتطف من Parker et al. ، دراسة بنية الميتوكوندريا ووظيفتها في ذبابة الفاكهة المبايض ، J. Vis. Exp. (2017).

< p class = "jove_title" >1. تحضير ذبابة الفاكهة (الأدوات المطلوبة موضحة في <فئة قوية = "xfig" >الشكل 1أ)

1. بالنسبة لأي من التجارب الموصوفة ، اجمع ذبابة الفاكهة (يتم الاحتفاظ بها في درجة حرارة الغرفة ، أو 25 درجة مئوية) في غضون 5 أيام من الإغلاق وضعها في قارورة مملوءة ب 5-7 مل من طعام ذبابة الفاكهة (انظر جدول المواد) ، مع ما لا يزيد عن 25 ذبابة في كل قارورة ؛ حافظ على نسبة الإناث والذكور 2: 1.
2. رش كمية صغيرة من الخميرة المحببة لتحفيز إنتاج بيض ذبابة الفاكهة. إجراء التلاعب التجريبي في غضون 2-4 أيام.

< p class = "jove_title" >2. تشريح ذبابة الفاكهة المبايض (الأدوات المطلوبة موضحة في <فئة قوية = "xfig" >الشكل 1أ)

1. وسط تشريح الحشرات الدافئ (انظر جدول المواد) إلى درجة حرارة الغرفة ، 25 درجة مئوية. املأ ثلاثة آبار من طبق تشريح زجاجي مكون من ثمانية آبار ، مع 200 ميكرولتر من الوسط في كل بئر.
2. تخدير ذبابة الفاكهة باستخدام ثاني أكسيد الكربون₂ عن طريق وضع إبرة مسدس النفخ أسفل سدادة القارورة. ضعهم على وسادة ذبابة. باستخدام مجهر تشريح ، قم بفرز 5 إناث ووضعها في البئر الأول من طبق التشريح. تعامل مع ذبابة الفاكهة واحدة في كل مرة عند إجراء الفحص المجهري الحي.
3. أثناء النظر من خلال عدسة مجهر التسليح ، افصل الصدر عن البطن باستخدام زوجين من الملقط. باستخدام الملقط ، انقل البطن بعناية إلى البئر الثاني من الطبق.
4. استخدم زوجا واحدا من الملقط لتثبيت البطن في الطرف الخلفي ، وادفع المبايض ببطء للخارج (جنبا إلى جنب مع محتويات البطن الأخرى) مع زوج آخر من الملقط. إذا فشلت هذه المحاولة ، فقم بإزالة الهيكل الخارجي للبطن بعناية عن طريق إدخال الملقط في الطرف الأمامي لتحرير المبايض.
5. باستخدام الملقط ، أمسك مبيضا فرديا من الطرف الخلفي غير الشفاف (أي البيض المملوء بالصفار في المرحلة المتأخرة) وانقله بعناية إلى البئر الثالث من الطبق لإغاظته لمعالجته للفحص المجهري الحي أو لتثبيته لإجراء تلطيخ مناعي.
6. قم بإثارة الغلاف الواقي بعناية من حول المبايض عن طريق مسح إبرة إغاظة برفق من الجزء الخلفي إلى الطرف الأمامي لكل مبيض مع إمساكه من الطرف الخلفي باستخدام زوج من الملقط.
   <فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة: لتقليل الضرر أثناء المضايقة ، ثني طرف الإبرة وقم بتكبير كل مبيض عن طريق زيادة تكبير المجهر (<فئة قوية = "xfig">الشكل 1أ). يجب أن تكون المضايقة فعالة بما يكفي لكسر الغمد ، ولكن يجب أيضا إجراؤها بعناية للحفاظ على سلامة المبيض.

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: الخطة التجريبية والتحضير. (أ) الأدوات المستخدمة في الطرق الموصفة: أ. قارورة الذبابة؛ ب. وسط تشريح الحشرات. جيم بارافورمالدهايد. د. فرشاة الذبابة. هاء - تشريح الطبق. و. غطاء الزجاج. ز. أنبوب الطرد الدقيق. ح. طبق ذو قاع زجاجي. I. شريحة زجاجية. J. 1,000 ميكرولتر ماصة دقيقة; K. 200 ميكرولتر ماصة دقيقة؛ L. 2.5 ميكرولتر ماصة دقيقة; إبرة إغاظة مع طرف منحني (يتم تكبير الطرف);...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات جريس ميديا (وسيط تشريح الحشرات) فيشر ساينتيك 30611031-2 41 بارافورمالدهايد AQ علوم المجهر الإلكتروني 50-259-99 بوليسين MP الطب الحيوي ICN15017625 قوارير الطيران فيشر ساينتيك أ إس -515 مقابس قارورة الطيران فيشر ساينتيك أ 273 طعام Jazzmix ذبابة الفاكهة (طعام ذبابة الفاكهة) فيشر ساينتيك إيه إس 153 شرائح مجهر Azer Scientific EverMark Select فيشر ساينتيك 22-026-252 زجاج غطاء المجهر فيشر ساينتيك 12-542-ب طبق ميركرويل زجاجي من مات تيك كورب فيشر ساينتيك P35G-0-14-C الخميرة المجففة النشطة فيشر ساينتيك ICN10140001 دومون # 5 ملقط تقنيات العلوم الجميلة 11251-20 حامل دبوس مطلي بالنيكل موريا تقنيات العلوم الجميلة 26016-12 دبابيس Minutien تقنيات العلوم الجميلة 26002-15 MYFP ( ث [*]; P{w[+mC]=sqh-EYFP-Mito}3 ) مركز بلومنجتون للأوراق المالية 7194 وسادة الطيران الجنة الطيبة 59-118 بندقية النفخ الجنة الطيبة 54-104 إبرة بندقية النفخ فلاي ستاف 54-119 تشريح المجهر كارل زايس ستيمي 2000