فحص التعديلات الجينومية: طريقة لتحديد الطفرات التي تم إنشاؤها بواسطة كريسبر في ذبابة الفاكهة

Abstract

المصدر: Du ، L. ، et al. استراتيجية فعالة لتوليد أنظمة نسخ ثنائية خاصة بالأنسجة في ذبابة الفاكهة عن طريق تحرير الجينوم. J. Vis. Exp. (2018).

يصف هذا الفيديو طريقة فحص لتحديد ذبابة الفاكهة المعدلة وراثيا ، التي تم تعديل جينومها باستخدام CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 هي أداة قوية لتحرير الجينوم أحدثت ثورة في الطريقة التي يمكن للعلماء من خلالها التلاعب بجينوم الكائن الحي. في مثال البروتوكول ، سنرى كيفية تحديد الطفرات التي تم إنشاؤها بواسطة CRISPR ، حيث يحل إدخال تسلسل التنشيط محل الإكسون الأول للجين عديم الفروع (bnl) ، وبالتالي إنشاء خط تشغيل خاص بجين bnl ، bnl-LexA.

Protocol

هذا البروتوكول هو مقتطف من Du et al. ، استراتيجية فعالة لتوليد أنظمة نسخ ثنائية خاصة بالأنسجة في ذبابة الفاكهة عن طريق تحرير الجينوم ، J. Vis. Exp. (2018).

< p class = "jove_title" >1. علم الوراثة والفحص للذبابة (الشكل 1 والشكل 2)

1. عندما تتطور الأجنة المحقونة إلى بالغين ، اعبر كل ذبابة G₀ إلى الذباب الموازن. حدد الموازن المناسب للكروموسوم الذي يحتوي على الأليل المستهدف.
2. قم بتخدير نسل F1 من كل صليب G0 على وسادة ثاني أكسيد الكربون₂ واختر بشكل عشوائي 10-20 ذكرا تحت مجهر مجسم. انقلها بشكل فردي إلى إناث الموازن كما هو موضح في <الفئة القوية = "xfig">الشكل 2.
3. عندما تفقس يرقات F2 ....

Results

الشكل 1: نظرة عامة على سير العمل لتحرير الجينوم بوساطة CRISPR / Cas9 لإنشاء نظام نسخ ثنائي. يشار إلى المدة الزمنية التقريبية المطلوبة لكل خطوة. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2: رسم توضيحي لف.......

Materials