تحضير شرائح اليرقات: طريقة لتصور الخلايا العصبية الحسية السليمة وخلايا البشرة المرتبطة بها

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Tenenbaum ، CM ، Gavis ، E. R. إزالة الأنسجة العضلية ذبابة الفاكهة من شرائح اليرقات لتحليل التألق المناعي للخلايا العصبية الحسية وخلايا البشرة. J. Vis. Exp. (2016).

يصف هذا الفيديو كيفية تحضير شرائح اليرقات المستخدمة لتصور الخلايا العصبية للتشجير الشجيري الحسي (da) وخلايا البشرة المرتبطة بها. يوضح البروتوكول المميز بالتفصيل كيفية إزالة الأنسجة العضلية من جدار الجسم مع الحفاظ على مورفولوجيا الخلايا ، مما يحسن التلوين المناعي وتصور الخلايا العصبية وخلايا البشرة المحجوبة.

البروتوكول

هذا البروتوكول هو مقتطف من Tenenbaum and Gavis ، إزالة الأنسجة العضلية ذبابة الفاكهة من شرائح اليرقات لتحليل التألق المناعي للخلايا العصبية الحسية وخلايا البشرة ، J. Vis. Exp.(2016).

< فئة قوية = "ملاحظة" >ملاحظة: إجراء إزالة العضلات (<فئة قوية = "xfig" >الشكل 1) هو تعديل للطرق الموصوفة سابقا لتحضير شرائح اليرقات. يتم تحديد الخطوات التي تسبق إزالة العضلات وتتبعها بإيجاز ويتم إحالة القارئ إلى العمل السابق في Brent، et al.، J. Vis. Exp. (2009) و Karim and Moore، J. Vis. Exp. (2011) للحصول على أوصاف أكثر تفصيلا.

< p class = "jove_title" >1. تشريح اليرقة في محلول ملحي بارد

....

النتائج

الشكل 1: نظرة عامة على إجراء إزالة العضلات. يتم تشريح اليرقة وتثبيتها في طبق تشريح مطاط الصناعي السيليكوني. لإزالة الأنسجة العضلية ، يتم إدخال شق ملقط واحد بين العضلات وطبقة خلايا البشرة ، بدءا من خط الوسط الظهري بالقرب من حدود الجزء (2.2). يتم سحب الملقط لأعلى لكسر التعلق بين العضلات وجدار الجسم (2.3). يتكرر هذا للأجزاء ذات الأهمية ثم يتم تثبيت اليرقة في الفورمالديهايد (2.5). بعد التثبيت ، يتم استخدام الملقط لفصل الأنسجة.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ملاقط دومون # 5 علوم المجهر الإلكتروني 72701-د مقص دقيق ، 8 سم ، مستقيم ، شفرات 5 مم ، أطراف 0.1 مم أدوات الدقة العالمية 14003 Sylgard 184 مجموعة المطاط الصناعي سيليكون داو كورنينج 3097358-1004 لتشريح الألواح دبابيس حشرات أوسترليتز ، 0.1 مم أدوات العلوم الدقيقة 26002-10 مصدر الضوء Fostec 8375 مجموعة التكنولوجيا الحرفية 62792-4