ذبابة الفاكهة جمع البيض وتفكيكه: طريقة لإزالة طبقة البيض الخارجية

الملخص

المصدر: Koyle، M.L.، et al. تربية ذبابة الفاكهة ذبابة الفاكهة السوداء تحت ظروف محورية وجينوتوبيوتيك. J. Vis. Exp. (2016).

ذبابة الفاكهة الجنين محاط بأغشية خارجية واقية. للوصول إلى الجنين ، غالبا ما تتم إزالة المشيمة - أقصى الأغشية - يصف هذا الفيديو طريقة شائعة الاستخدام لإزالة الكسادة باستخدام هيبوكلوريت الصوديوم. يوضح بروتوكول المثال الإجراء أثناء استخدام التقنيات المعقمة اللازمة لتربية المحورية أو الغنوتوبيوتيكية.

البروتوكول

هذا البروتوكول مقتطف من Koyle et al. ، تربية ذبابة الفاكهة ذبابة الفاكهة السوداء تحت ظروف محورية وجينوتوبيوتيك ، J. Vis. Exp.(2016).

< p class = "jove_title" >1. تحضير أقفاص وضع البيض

1. اصنع أطباق أجار عصير العنب عن طريق وضع 100 مل من الماء في الميكروويف ، و 10 جم من خميرة البيرة ، و 10 جم من الجلوكوز ، و 1 غرام من أجار. يغلى المزيج 3 مرات في الخطوة 1.1 ويضاف 10 جم من عصير العنب المجمد المركز لزيادة ظهور البيض على طبق الأجار.
2. عندما يبرد الأجار إلى 55 درجة مئوية ، اسكب 20 مل في أطباق بتري مقاس 100 مم واتركها حتى تتصلب.
3. قم بتغطية سطح ألواح الأجار بعجينة الخميرة عن طريق خلط 1 جم من خميرة البيرة مع 15 جم ماء. صب معجون الخميرة على طبق الأجار مع التأكد من تغطية السطح ، ثم اسكب الفائض ، تاركا وراءه بقايا خميرة رقيقة. إذا تم استخدام أطباق متعددة ، فيمكن سكب المعجون بالتتابع على أطباق متعددة.
4. انقل ألواح أجار إلى قاع القفص.
   <فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة: تعتبر حاوية الأطعمة الجاهزة سعة 32 أونصة بديلا جيدا لأقفاص ذبابة الأكريليك.
   1. اصنع أغطية لحاويات الأطعمة الجاهزة سعة 32 أونصة عن طريق قطع ثقب في الأعلى ولصق شبكة قابلة للتنفس فوق الفتحة بغراء غير سام. إذا كان الغراء قابلا للذوبان في الماء ، فقم بمنع التعرض للماء للغطاء.
5. انقل 200-300 ذبابة إلى الحاوية وقم بتغطيتها بغطاء. قم بتغطية الفتحة المحمية بالشبكة بغطاء فارغ من طبق بتري لمنع التبخر من سطح الأجار وأضف مناديل ورقية مبللة داخل الغطاء إذا رغبت في ذلك. احتضان الذباب عند 25 درجة مئوية طوال الليل لمدة 16-20 ساعة.

2. اجمع البيض

1. قم بإعداد غربال لجمع البيض عن طريق وضع شبكة من النايلون في جلبة بلاستيكية.
2. لاسترداد اللوحة التي تحتوي على البيض ، قم بإزالة الذباب من القفص عن طريق نقله إلى وعاء فارغ. إذا تم استخدام نفس الذباب في اليوم التالي ، فقم بنقله على الفور إلى قفص جديد يحتوي على طبق أجار عصير العنب الطازج. يمكن استخدام الذباب لمدة 3-5 أيام متتالية
3. قم بإزالة الذباب الميت من الأجار بفرشاة رسم نظيفة ، مع الحرص على عدم تفتيت الأجار.
4. اجمع البيض عن طريق شطف طبق الأجار بالماء المقطر ، ودهن البيض برفق من سطح الأجار ، وصب الملاط على الشبكة. كرر 3-4 مرات حتى تتم إزالة كل البيض أو معظمه من طبق الأجار.

< ص الفئة = "jove_title" >3. البيض المكسورة ونقله إلى نظام غذائي معقم

1. قم بإعداد خزانة السلامة الحيوية عن طريق رش الداخل (بما في ذلك الجوانب) بنسبة 70٪ من الإيثانول. امسح الجزء السفلي بمنديل مختبر ، وقم بتعقيم الغطاء بضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة ~ 15 دقيقة. تعقيم جميع المستلزمات غير البيولوجية (أكواب العينات ، وفرشاة الرسم ، والملقط ، وحاوية النفايات ، و 400 مل من الماء المعقم ، و 100 مل من هيبوكلوريت الصوديوم 0.6٪) عن طريق الرش بالإيثانول ووضعها على الفور في خزانة السلامة الحيوية. تعقيم بضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 15 دقيقة.
2. ابدأ أول غسلة من 2 هيبوكلوريت الصوديوم عن طريق وضع الجلبة مع البيض في كوب عينة سعة 120 مل أو حاوية معقمة أخرى. صب ببطء ~ 90 مل من محلول هيبوكلوريت الصوديوم 0.6٪ في الجلبة حتى أسفل الحافة مباشرة.
3. اشطف البيض لمدة 2.5 دقيقة. أعد تعليق البيض بشكل دوري باستخدام الملقط لتحريك الجلبة لأعلى ولأسفل في محلول هيبوكلوريت.
4. انقل الجلبة مباشرة إلى كوب عينة ثان ، مملوء مسبقا بمبيض 90 مل ، داخل خزانة السلامة الحيوية.
5. كرر الخطوة 3.3 داخل خزانة السلامة الحيوية. في نهاية علاج التبييض الثاني ، يجب أن يبدأ البيض في الالتصاق بجوانب البطانة.
6. قم بتنفيذ الخطوات 3.7-3.8 في خزانة السلامة الحيوية.
7. تخلص من المبيض واغسل الجلبة بالماء المعقم 3 مرات. أعد تعليق البيض عدة مرات أثناء كل غسيل عن طريق تحريك الجلبة بالملقط. بحلول نهاية الغسيل الثالث ، يجب ربط معظم البيض بجانب البطانة.
8. باستخدام فرشاة رسم معقمة بالإيثانول ، انقل البيض من جانب الجلبة إلى النظام الغذائي المعقم. انقل البيض بشكل فردي أو على دفعات صغيرة. اهدف إلى 30-50 بيضة لكل قارورة. اترك الأغطية فضفاضة للسماح للأكسجين بالدخول إلى الأنبوب.

المواد