A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Abstract

المصدر: Kudumala, S., et al. الشلل الناجم عن السباحة لتقييم إشارات الدوبامين في Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp.(2019).

هنا ، نقدم فحصا لقياس SWIP ، وهو نمط ظاهري سلوكي ل C. ايليجانس يحدث أثناء الحركة القوية مثل السباحة. يناقش بروتوكول المثال كلا من أساليب التحليل اليدوي والآلي.

Protocol

البروتوكول التالي هو مقتطف من Kudumala et al ، الشلل الناجم عن السباحة لتقييم إشارات الدوبامين في Caenorhabditis elegans ، J. Vis. Exp.(2019).

SWIP

ملاحظة: نصف الطريقة اليدوية لتقييم SWIP في الديدان البرية المعالجة ب AMPH. نناقش أيضا بإيجاز تتبع الديدان ومزيد من التحليل لحركية الديدان باستخدام متتبع دودة آلي وبرنامج تتبع تم وصفه سابقا بواسطة Hardaway et al.

1. الطريقة اليدوية لاختبار SWIP
   1. Aliquot 40 ميكرولتر من محلول السكروز 200 mOsm / L إما مع أو بدون 0.5 mM AMPH في صفيحة بقعة زجاجية. تحت المجسم ، اختر 8-10 ديدان من المرحلة المتأخرة L4 باستخدام رمش أو معول بلاتيني واغمر المعول في اللوحة التي تحتوي على المحلول حتى تتحرك الديدان من المعول وتسبح في المحلول. لاحظ عدد الديدان التي تم التقاطها في البئر ، وابدأ المؤقت ، ولاحظ وسجل عدد الديدان التي تظهر SWIP في كل علامة دقيقة.
   2. انسخ البيانات الأولية في جدول بيانات واحسب النسبة المئوية للديدان المشلولة بقسمة عدد الديدان المشلولة في كل دقيقة على العدد الإجمالي للديدان التي تم اختبارها خلال الفحص واضربها في 100. انسخ قيم النسبة المئوية إلى أي برنامج رسوم بيانية وإحصائية وارسم البيانات بقيم النسبة المئوية على المحور Y والوقت على المحور X باستخدام تنسيق الرسم البياني XY.
   3. قم بإجراء ANOVA ثنائي الاتجاه متبوعا بتحليل لاحق (على سبيل المثال ، اختبار Bonferroni اللاحق) لاختبار الدلالة الإحصائية بين مجموعات التحكم وAMPH ووقت العلاج.
2. التحليل الآلي ل SWIP
   1. إجراء تحليل آلي على دودة واحدة في كل مرة. تم وصف بروتوكول إعداد الكاميرا وبرنامج تعقب الدودة والبرنامج النصي لتشغيل تحليل برنامج التتبع بالتفصيل في Hardaway et al.
   2. باختصار ، ضع خنثى واحدة متأخرة من المرحلة L4 في صفيحة موضعية زجاجية باستخدام معول رمش ، كما هو موضح في الطريقة اليدوية في القسم 1.1.2. سجل مقاطع فيديو للسباحة لدودة واحدة في ذلك الوقت واستخدم برنامج تعقب الدودة لحساب وتيرة انحناءات الجسم.
   3. اتبع البرنامج النصي المرفق مع برنامج التتبع للحصول على تردد سحق الدودة وإنشاء خرائط حرارية من بيانات سحق الدودة.

Materials

Amphetamine	Sigma	51-63-8  
Depression glass spot plate	Corning	Corning, Inc. 722085
Eye lash
Graphing and statistical software	Prism		Graphpad 5
Osmometer	Advanced Instruments, Inc	Model 3320
Spreadsheet	MS office		Microsoft Excel
Stereo Microscope	Zeiss	Model tlb3. 1 stemi2000
Sucrose	Sigma-Aldrich	RB=S5016
Superglue	Loctite	1647358 .14 oz.
SwimR sofware	10.18129/B9.bioc.SwimR
Tracker 2	Worm Tracker 2.0	www.mrc-lmb.cam.ac.uk/wormtracker/
Video recording software	Virtualdub	http://www.virtualdub.org/