فحص الشلل الناجم عن السباحة (SWIP): طريقة لتحديد الحركة بوساطة الدوبامين في C. ايليجانس

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Kudumala, S., et al. الشلل الناجم عن السباحة لتقييم إشارات الدوبامين في Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp.(2019).

هنا ، نقدم فحصا لقياس SWIP ، وهو نمط ظاهري سلوكي ل C. ايليجانس يحدث أثناء الحركة القوية مثل السباحة. يناقش بروتوكول المثال كلا من أساليب التحليل اليدوي والآلي.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

البروتوكول التالي هو مقتطف من Kudumala et al ، الشلل الناجم عن السباحة لتقييم إشارات الدوبامين في Caenorhabditis elegans ، J. Vis. Exp.(2019).

SWIP

< فئة قوية = "ملاحظة" >ملاحظة: نصف الطريقة اليدوية لتقييم SWIP في الديدان البرية المعالجة ب AMPH. نناقش أيضا بإيجاز تتبع الديدان ومزيد من التحليل لحركية الديدان باستخدام متتبع دودة آلي وبرنامج تتبع تم وصفه سابقا بواسطة Hardaway et al.

الطريقة اليدوية لاختبار SWIP
1. Aliquot 40 ميكرولتر من محلول السكروز 200 mOsm / L إما مع أو بدون 0.5 mM AMPH في صفيحة بقعة زجاجية. تحت المجسم ، اختر 8-10 ديدان من المرحلة المتأخرة L4 باستخدام رمش أو معول بلاتيني واغمر المعول في اللوحة التي تحتوي على المحلول حتى تتحرك الديدان من المعول وتسبح في المحلول. لاحظ عدد الديدان التي تم التقاطها في البئر ، وابدأ المؤقت ، ولاحظ وسجل عدد الديدان التي تظهر SWIP في كل علامة دقيقة.
2. انسخ البيانات الأولية في جدول بيانات واحسب النسبة المئوية للديدان المشلولة بقسمة عدد الديدان المشلولة في كل دقيقة على العدد الإجمالي للديدان التي تم اختبارها خلال الفحص واضربها في 100. انسخ قيم النسبة المئوية إلى أي برنامج رسوم بيانية وإحصائية وارسم البيانات بقيم النسبة المئوية على المحور Y والوقت على المحور X باستخدام تنسيق الرسم البياني XY.
3. قم بإجراء ANOVA ثنائي الاتجاه متبوعا بتحليل لاحق (على سبيل المثال ، اختبار Bonferroni اللاحق) لاختبار الدلالة الإحصائية بين مجموعات التحكم وAMPH ووقت العلاج.
التحليل الآلي ل SWIP
1. إجراء تحليل آلي على دودة واحدة في كل مرة. تم وصف بروتوكول إعداد الكاميرا وبرنامج تعقب الدودة والبرنامج النصي لتشغيل تحليل برنامج التتبع بالتفصيل في Hardaway et al.
2. باختصار ، ضع خنثى واحدة متأخرة من المرحلة L4 في صفيحة موضعية زجاجية باستخدام معول رمش ، كما هو موضح في الطريقة اليدوية في القسم 1.1.2. سجل مقاطع فيديو للسباحة لدودة واحدة في ذلك الوقت واستخدم برنامج تعقب الدودة لحساب وتيرة انحناءات الجسم.
3. اتبع البرنامج النصي المرفق مع برنامج التتبع للحصول على تردد سحق الدودة وإنشاء خرائط حرارية من بيانات سحق الدودة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

<حدود الجدول = "0" cellpadding = "0" cellpacing = "0" نمط = "العرض: 711 بكسل ؛" العرض = "711" > قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات الأمفيتامين < td style="العرض:163px;">سيجما < td style="العرض:247px;">51-63-8 < td style="العرض:99 بكسل;"> < ارتفاع TD = "19" النمط = "الارتفاع: 20 بكسل ؛ "> لوحة بقعة زجاجية للاكتئاب كورنينج شركة كورنينج 722085 رموش العين الرسوم البيانية والبرامج الإحصائية موشور لوحة الرسم البيانية 5 مقياس التناضح الأجهزة المتقدمة ، وشركة نموذج 3320 جدول البيانات مكتب MS مايكروسوفت إكسل مجهر ستيريو زييس نموذج tlb3. 1 stemi2000 السكروز سيجما ألدريتش RB = S5016 Superglue لوكتايت 1647358.14 أوقية. SwimR sofware 10.18129 / B9.bioc.SwimR < td height = "19" النمط = "الارتفاع: 20 بكسل ؛" >المقتفي 2 دودة المقتفي 2.0 www.mrc-lmb.cam.ac.uk/wormtracker/ برنامج تسجيل الفيديو فيرتثال دوب http://www.virtualdub.org/

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن