ذبابة الفاكهة فحص المتاهة Y: طريقة لتقييم الاستجابات الشمية في الذباب

الملخص

المصدر: Simonnet ، M. M. ، et al. اختبار ذبابة الفاكهة الشم باستخدام اختبار متاهة Y. J. Vis. Exp. (2014).

يصف هذا الفيديو طريقة لاختبار السلوك الاستكشافي الشمي في ذبابة الفاكهة، تسمى متاهة Y. يوضح مقطع البروتوكول المميز كيفية إعداد الفحص وإجرائه.

البروتوكول

نص البروتوكول هذا هو مقتطف من Simonnet et al. ، اختبار ذبابة الفاكهة الشم باستخدام مقايسة متاهة Y، J. Vis. Exp. (2014).

1. قبل البدء

1. استخدم مخزونا مرجعيا متساوغا يحمل أنماطا ظاهرية سلوكية مستقرة وقوية. لا توجد قاعدة عامة لاختيار هذا المخزون ، لأن جميع الضوابط المحتملة قد تحمل أليلات خلفية غير متجانسة.
2. استخدم سلالة التحكم هذه لعكس كل مخزون آخر ضروري للخطوات اللاحقة. عادة ما يتم تمثيل خطوة التقاطع الخلفي هذه من خلال 5 تقاطعات متتالية على الأقل لأنثى عذراء واحدة (للسماح بالعبور المحتمل بين الكروموسومات المتجانسة) إلى 2-3 ذكور مرجعية متساوية الجين. هذه الخطوة مهمة لتجانس الخلفية الجينية بين مخزونات الذباب المختلفة.
3. الحفاظ على مخزون ذبابة الفاكهة على دقيق الذرة القياسي (9٪) والخميرة (10٪) ووسط أجار (1.5٪) مع المضادات الحيوية (0.4٪ ميثيل بارا هيدروكسي بنزوات) في دورة ضوء / ظلام مدتها 12 ساعة عند 25 درجة مئوية.
4. قم بإجراء تجارب حسية كيميائية في غرفة يتم التحكم في درجة حرارتها (25 درجة مئوية) تحت الضوء الأحمر البعيد (للقضاء على مساهمة الإشارات البصرية ، والتركيز على الإشارات الحسية الكيميائية). قم بتجديد هواء الغرفة بانتظام لتهوية المنطقة بين كل تجربة.

2. الاستجابة الشمية باستخدام فحص المتاهة Y

1. تجويع الذباب لمدة 16-18 ساعة عند 25 درجة مئوية في أنابيب زجاجية تحتوي على منشفة ورقية مبللة قبل الاختبار.
2. قم بتوصيل موصل على شكل حرف Y بقارورتين زجاجيتين وقارورة بلاستيكية أصغر (قارورة تحميل). استخدم أطراف ماصة سعة 1 مل تمر عبر سدادات الرغوة لربط الموصل بالقوارير الثلاثة، وللحصول على متاهة Y محكمة الإغلاق. قم بقص الأطراف الضيقة لطرفي ماصة (~ 2 مم قطرها ، لتجنب أي عودة للذبابة بمجرد اتخاذها قرارها) لتشكيل قارورتين "مصائد" ، ونهاية كبيرة لطرف ماصة واحد لتشكيل أنبوب "التحميل" (<فئة قوية = "xfig" >الشكل 1أ).
3. قبل توصيل قوارير "المصيدة" مباشرة (<فئة قوية = "xfig">الشكل 1ب) ، ضع ورقة ترشيح قطرها ~ 6 مم في كل قارورة. أضف 40 ميكرولتر من محلول الرائحة على ورق ترشيح واحد ، و 40 ميكرولتر من المذيب المقابل على ورق الترشيح الثاني.
4. أدخل عشرة ذباب من 4 إلى 9 أيام في قارورة "التحميل". لا تستخدم تخدير ثاني أكسيد الكربون₂ أثناء هذا النقل ، لأن له تأثيرا قويا على السلوك. بدلا من ذلك ، استخدم التبريد القصير على الجليد. يعد التلاعب السليم بالذباب المخدر أمرا مهما للحد من الضغط على الأشخاص قدر الإمكان.
   1. قم بإجراء سلسلة من اختبارات المتاهة Y عند 25 درجة مئوية تحت الضوء الأحمر البعيد (باستخدام مصابيح LED للحد من مصدر التسخين المحتمل) لتجنب المحفزات البصرية قدر الإمكان. احرص على تبديل اتجاهات المتاهات Y (أنبوب يحتوي على رائحة على اليسار أو على اليمين وأنبوب التحميل في الأمام أو في الخلف ؛ <فئة قوية = "xfig" >الشكل 1ج).
   2. اترك عدة ساعات حتى يدخل الذباب في قارورة المصيدة التي تحتوي على الرائحة أو المذيب. يطير العد بعد 24 ساعة لزيادة المشاركة إلى أكثر من 80٪ وتوفير أقصى قيمة لمؤشر حاسة الشم (Simonnet ، الاتصال الشخصي).
   3. احسب مؤشر حاسة الشم الناتج باستخدام الصيغة التالية: (الرقم في أنبوب الرائحة - الرقم في أنبوب المذيب) / العدد الإجمالي للذباب المحمل.
5. اغسل إعداد المتاهة على شكل حرف Y على النحو التالي: انقع الإعداد المفكك في RBS 35 MD طوال الليل. اشطفها جيدا بماء الصنبور. أخيرا اشطفها بالماء منزوع الأيونات واتركها تجف.

3. التحليل الإحصائي للبيانات

1. قم بإجراء اختبار t أو ANOVA أحادي الاتجاه أو ANOVA ثنائي الاتجاه اعتمادا على البيانات والمتغيرات.

النتائج

p class = "jove_content" >
الشكل 1: تم تقييم استجابة حاسة الشم للذكور باستخدام إعداد متاهة Y. أ) جهاز مقسم. ب) الجهاز المجمع. ج) الإعداد في حالة صالحة للعمل تحت الضوء الأحمر البعيد. د) القياس الكمي للاستجابات الشمية للذكور تجاه حمض الأسيتيك (AA) أو حمض فينيل أستيك (PAA) كلاهما مخفف في الماء المقطر (10٪ حجم / حجم) (N = 11 ، يمثل ما مجموعه 110 ذبابة). أجري التحليل الإحصائي ب...

المواد

<جدول fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="دائما"> قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ذبابة الفاكهة أنبوب البوليسترين VWR أوروبا 734-2255 30 × 25 مم متاهة Y ذبابة الفاكهة أنبوب البورسليكات ديجون فير 95 × 25 مم متاهة Y سدادة الرغوة دوتشر 999038 متاهة Y موصل على شكل حرف Y يوروبريكس 11020605 متاهة Y 100-1,000 ميكرولتر أطراف ماصة كورنينج 4868 اربط أطراف الماصة التالية بالموصل على شكل حرف Y.
قم بقص 2 من أطراف الماصة على بعد 65 مم من الطرف العريض، وقم بتوصيل الطرف الضيق (بفتحة ~2 مم) بقارورتين للاختبار.
ستحد هذه الفتحات من المنعطفات على شكل حرف U بمجرد دخول الذباب إلى الأنابيب التي تحتوي على الروائح.
قم بقص طرف ماصة واحد على بعد 35 مم من الطرف العريض ، وقم بتوصيله بقارورة التحميل. لمبة LED حمراء فارة روبن لاكاك 0RB180238 625-630 نانومتر حمض الخليك سيجما ألدريتش 45725 حمض فينيل أستيك سيجما ألدريتش ص 16621 خميرة النكهات الحساسة ستراسبورغ 1018880464 دقيق الذرة يوروجيرم فارين دي ميس اجار كاليس إتش بي -697-25 ميثيل هيدروكسي 4 بنزوات VWR الدولية 25605293