نص البروتوكول هذا هو مقتطف من Sun et al. ، الفحص المستند إلى بقعة الضوء لتحليل ذبابة الفاكهة اليرقات الضوئية ، J. Vis. Exp.(2019).
< p class = "jove_title" >1. إعداد نظام التصوير
- قم بتثبيت كاميرا ويب عالية الدقة بمشبك حديدي ، على ارتفاع حوالي 10 سم فوق بقعة الضوء على سطح المكتب (<فئة قوية = "xfig" >الشكل 1).
- اضبط اتجاه عدسة الكاميرا نحو سطح المكتب. قم بتوصيل الكاميرا بجهاز كمبيوتر من خلال واجهة USB.
- ضع لوحة أجار على سطح المكتب أسفل الكاميرا مباشرة.
- افتح برنامج "Amcap9.22" على الكمبيوتر الذي يعمل بنظام التشغيل Windows 7 ، وستظهر بقعة الضوء تلقائيا في نافذة AMcap. حرك الكاميرا قليلا إلى اليسار أو اليمين للتأكد من أن بقعة الضوء قريبة من مركز النافذة. تأكد من أن الكاميرا لا تحجب مسار الضوء. يجب أن تكون بقعة الضوء كاملة ومستديرة.
<فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة: يمكن العثور على البرنامج على http://amcap.en.softonic.com/.
- قم بإصلاح مرشح تمرير النطاق 850 نانومتر ± 3 نانومتر بمشبك عند 5-7 مم أسفل الكاميرا مباشرة.
<فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة: يبلغ قطر الفلتر حوالي 2.5 سم ، ويبلغ قطر عدسة الكاميرا أقل من 1 سم ، لذلك يمكن للمرشح تغطية المجال البصري للكاميرا. مع وجود الفلتر الموجود أسفل الكاميرا ، يجب عدم رؤية بقعة الضوء في نافذة AMcap.
- ضع ثلاثة مصابيح LED مولدة للأشعة تحت الحمراء (الطول الموجي المركزي = 850 نانومتر) بالتساوي حول لوحة الأجار. يجب أن يكون كل مصباح LED على بعد حوالي 5 سم من حافة لوحة الأجار ، ويجب أن يكون وجه عدسة LED بزاوية 70 درجة لأسفل باتجاه لوحة الأجار. قم بتوصيل مصابيح LED بالطاقة من خلال محول التيار المتردد إلى التيار المستمر.
<فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة: من الأفضل إصلاح مواضع وزوايا مصابيح LED لضوء الأشعة تحت الحمراء لضمان اتساق سطوع المجال في التجارب التجريبية المختلفة وتسهيل معالجة الفيديو لاحقا.
- ضع لوحة سوداء بين الكمبيوتر والجهاز. اضبط سطوع شاشة الكمبيوتر لمنع ضوء شاشة الكمبيوتر من التأثير على التجربة.
<فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة: حافظ على البيئة مظلمة عند قياس الطول الموجي أو شدة الضوء.
2. تحديد معلمات التصوير
- في قائمة برنامج AMcap ، اختر خيارات | جهاز الفيديو | التقط التنسيق ، واضبط حجم البكسل للفيديو الملتقط على 800 × 600 ومعدل الإطارات على 60 إطارا في الثانية.
- قم بإزالة الفلتر من أسفل الكاميرا ، ضع مسطرة أسفل الكاميرا واضبط تركيز الكاميرا لجعل خط المقياس واضحا وموازيا لعرض مجال رؤية الفيديو.
- انقر فوق الالتقاط | الإعداد | التقاط الفيديو لتحديد مسار الحفظ ، انقر فوق بدء التسجيل ، وسجل المسافة الفعلية المقابلة ل 600 بكسل ، واحسب نسبة كل بكسل إلى المسافة الفعلية.
< p class = "jove_title" >3. تسجيل فيديو لسلوك تجنب الضوء
- الحفاظ على درجة حرارة 25.5 درجة مئوية خلال جميع التجارب. تحكم في درجة حرارة الغرفة باستخدام مكيف الهواء إذا لزم الأمر. حافظ على الرطوبة باستمرار عند 60٪ باستخدام جهاز ترطيب.
- التقط مقطع فيديو قصيرا لموضع بقعة الضوء المسمى "lightarea1". بعد ذلك ، حرك مرشح 850 نانومتر ± 3 نانومتر للخلف لتغطية عدسة الكاميرا.
<فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة: عند تسجيل سلوك اليرقات ، يتم تغطية عدسة الكاميرا بمرشح 850 نانومتر ± 3 نانومتر بحيث لا تظهر بقعة الضوء في الفيديو. يمكن إعادة بناء بقعة الضوء في مقاطع الفيديو مع اليرقات لاحقا باستخدام Matlab. لا تغير موضع الكاميرا، وتجنب تغيير نسبة كل بكسل إلى المسافة الفعلية المقاسة في الخطوة 2.3.
- قم بتشغيل ضوء (أي ضوء الغرفة) بعيدا عن الجهاز التجريبي. اخفض الضوء إلى أدنى مستوى ممكن ، طالما يمكن رؤية اليرقات بوضوح بالعينين. أخرج اليرقات من وسط الاستزراع بملعقة ، واختر يرقة الطور الثالث برفق ، واغسلها نظيفة بالماء المقطر. احرص على غسل اليرقة واحدة تلو الأخرى لتجنب التدخل من الجوع. تتطلب تجربة واحدة ما لا يقل عن 20 يرقة.
- انقل اليرقة إلى منتصف صفيحة الأجار الموضوعة أسفل الكاميرا أثناء الخطوة 1.3. قم بإزالة الماء الزائد برفق من اليرقة بفرشاة أو استخدم ورق نشاف لإزالة الماء من اليرقة لمنع انعكاس الضوء تحت العدسة. أطفئ ضوء الغرفة واترك اليرقة تتأقلم لمدة دقيقتين في البيئة المظلمة.
- قم بتشغيل ضوء LED لتوليد ضوء الأشعة تحت الحمراء ، وقم بتنظيف اليرقة برفق في منتصف اللوحة. عندما تبدأ اليرقة في الزحف بشكل مستقيم ، قم بتدوير الصفيحة لجعل اليرقة تتجه نحو بقعة الضوء. تأكد من أنه يزحف مباشرة من البداية ، وإلا فقد لا يتمكن من الوصول إلى بقعة الضوء.
- انقر فوق الالتقاط | الإعداد | التقاط الفيديو لتحديد مسار الحفظ، ثم انقر على بدء التسجيل للتسجيل. اسمح لليرقة بالزحف نحو البقعة الضوئية ، والدخول إلى بقعة الضوء ، ثم اترك بقعة الضوء حتى تكاد تكون خارج مجال الرؤية. انقر على إيقاف التسجيل. إذا ابتعدت اليرقة عن بقعة الضوء قبل الاقتراب ، فانقر مباشرة فوق إيقاف التسجيل.
- حرك الفلتر بعيدا عن الكاميرا. التقط مقطع فيديو قصيرا لموضع بقعة الضوء المسماة "lightarea2" وقارنها ب "lightarea1" للتأكد من عدم تغيير موضع بقعة الضوء. إذا لوحظ تغيير واضح في الموقف ، فتجاهل البيانات.