فحص المسبار الحراري المحلي: طريقة لتقييم الشعور بالألم في درجات الحرارة المرتفعة في ذبابة الفاكهة

الملخص

المصدر: Chattopadhyay ، A. ، et al. الطرق المحلية والعالمية لتقييم الألم الحراري في ذبابة الفاكهة اليرقات. J. Vis. Exp. (2012).

ذبابة الفاكهة لديها خلايا عصبية حسية مخصصة - مستقبلات الألم - التي تؤدي استجابتها للمنبهات الحرارية الضارة المحتملة إلى سلوكيات مكروهة - أو ما يسمى ب "nocifensive" - في. يصف هذا الفيديو طريقة لتقييم الشعور بالألم الحراري عن طريق تسجيل سلوك اليرقات استجابة للتطبيق المحلي لمسبار حراري على البشرة. لذلك ، تسمى هذه الطريقة باختبار مسبار الحرارة المحلي.

البروتوكول

هذا البروتوكول هو مقتطف من Chattopadhyay et al. ، الطرق المحلية والعالمية لتقييم الألم الحراري في ذبابة الفاكهة يرقات ، J. Vis. Exp. (2012).

< p class = "jove_title" >1. فحص مسبار الحرارة المحلي

< p class = "jove_content" > نقدم حافزا حراريا ضارا لجزء من جسم اليرقات الفردية باستخدام مسبار حراري مصمم خصيصا تم تصنيعه بواسطة Pro-Dev Engineering (انظر جدول المواد). على الرغم من أن هذا المسبار يتمتع بميزات تصميم مثالية (طرف معدني صغير يبلغ ~ .07 مم² ، والقدرة على الحفاظ بدقة على درجة حرارة نقطة محددة من 23 درجة مئوية إلى 65 درجة مئوية) ، من حيث المبدأ ، يجب أن تكون أي أداة ذات طرف صغير يمكن تسخينها إلى درجة حرارة محددة لمدة تصل إلى 20 ثانية كافية. يستخدم طرف المسبار لتحفيز يرقات الطور الثالث المبكرة على وجه التحديد على خط الوسط الظهري في الجزء البطني A4 (انظر <فئة قوية = "xfig">الشكل 1). استجابة لهذا الحافز الحراري ، تظهر اليرقات عموما سلوك انسحاب مكروها يتمثل في التدحرج بشكل جانبي بمقدار 360 درجة أو أكثر. يختلف هذا السلوك عن استجابتهم للمس الضوء لمسبار معدني غير ضار بدرجة حرارة الغرفة والذي ينطوي عموما على توقف قصير في نشاطهم الحركي.

بروتوكول لمقايسة المسبار الحراري:

1. درجة حرارة محددة مسبقا للمسبار الحراري إلى نقطة الضبط المطلوبة.
2. استخدم فرشاة رسم أو ملقط لنقل يرقة فردية برفق إلى منصة مسطحة (عادة ما نستخدم قطعة صغيرة من الفينيل مقطوعة من مادة رابطة) والتي سيتم تحفيز اليرقات عليها لاحقا. يجب تغطية اليرقة بغشاء رقيق من الماء قبل ملامسة المسبار الحراري. يجب أن يكون فيلم الماء الذي يغطي اليرقة أقل قدر ممكن وأن يغطي اليرقة بالكامل ، مع التأكد من أن اليرقة ليست جافة عند لمس الفينيل.
3. اضغط برفق على طرف المسبار على اليرقة في الجزء A4 مع الضغط الخفيف مع الحافة بزاوية 45 درجة تقريبا بين المسبار وسطح اليرقة (انظر <فئة قوية = "xfig">الشكل 1). يجب أن يتسبب الضغط في حدوث فجوة طفيفة على سطح اليرقة وعادة ما يكون كافيا لمنع الحركة. إذا استمرت اليرقة في الحركة ، فقم بالضغط أكثر قليلا وستتوقف عادة. لا تسجل البيانات من اليرقات التي تتجاوز مجال الرؤية أو التي لا يمكن تحقيق اتصال مسبار ثابت لها حتى الاستجابة أو قطع 20 ثانية.
4. استمر في تحفيز اليرقة حتى تظهر استجابة الانسحاب أو حتى يتم الوصول إلى 20 ثانية ، أيهما يحدث أولا. عادة ما تظهر اليرقات المستجيبة أولا سلوكا أوليا لرفع الرأس والذيل. يتبع ذلك عادة سلوك الانسحاب المتمثل في التدحرج بزاوية 360 درجة على الأقل. يتم تسجيل لفة كاملة من 360 درجة فقط كسلوك مؤلم (الرأس الأولي أو رفع الذيل ليس كذلك).
5. بمجرد بدء سلوك الانسحاب ، قم بتحرير الاتصال بالمسبار وسجل زمن الوصول أو وقت الانسحاب. إذا لم يلاحظ أي سلوك انسحاب في غضون 20 ثانية ، فإن اليرقة غير مستجيبة. يمكن تقسيم المستجيبين إلى فئتين. إذا تم عرض سلوك الانسحاب في غضون 5 ثوان ، فإن اليرقة هي مستجيب سريع. إذا تم عرض سلوك الانسحاب بين 5-20 ثانية ، فإن اليرقة تكون مستجيبة بطيئة (انظر <فئة قوية = "xfig">الشكل 1 في Babcock et al. ، Curr. Biol. (2009)).

النتائج

الشكل 1: إعداد تجريبي لمقايسة مسبار الحرارة المحلية. يتم التحكم في المسبار الحراري بواسطة وحدة تحكم حرارية تستخدم لضبط درجة حرارة المسبار والحفاظ عليها. يتم تثبيت المسبار بشكل عمودي على المحور الأمامي الخلفي ويستخدم لتحفيز اليرقة بزاوية 45 درجة إلى الأفقي. يتم إجراء ملامسة المسبار على وجه التحديد في الجزء البطني A4 كما هو موضح. يجب على المستخدم الحفاظ على هذا التلامس بضغط لطيف حتى القطع لمدة 20 ثانية أو حتى يبدأ سلوك التد...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات مسبار حراري الهندسة المؤيدة للتطوير مصممة خصيصا عند الطلب يمكن تقديم معلومات الاتصال عند الطلب كاميرا ملونة Leica DFC290 12v / 400mA لايكا مايكروسيستمز 12730080 أي كاميرا مكافئة ستفي بالغرض. مجهر لايكا MZ6 لايكا مايكروسيستمز رقم الجزء لهيكل التكبير/التصغير MZ6 (حامل البصريات) 10445614 وحدة Schott Ace Modulamp شوت إيه جي أ 20500 Schott Dual Gooseneck 23 بوصة دليل ضوء الألياف البصرية شوت إيه جي شوت A08575 وحدة التحكم الحراري شركة TSCI مخصص بنيت يمكن تقديم التفاصيل عند الطلب مجهر زايس ستيمي 2000 كارل زايس ، إنك. NT55-605 أي مجهر مكافئ سيفي بالغرض. ملقط أدوات العلوم الدقيقة م إس إ-1670 الرسام مواد فنية بليك 06762-1002 35 × 10 مم طبق بتري من البوليسترين فالكون BD 351008 لم نختبر أطباق بديلة. قطعة من الفينيل مستودع المكاتب 480009