$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
هذا البروتوكول هو مقتطف من Gou et al. ، اختبار الإنتاجية العالية لفحص تفضيلات وضع البيض لذبابة الفاكهة السوداء الفردية ، J. Vis. Exp. (2016).
< p class = "jove_title" >1. بناء الغرفة ، التجميع ، إعداد الفحص
- اطلب من متجر ماكينات بناء غرف وضع البيض من الأكريليك (<فئة قوية = "xfig" > الشكل 1أ-د). تم عرض الرسم الهندسي لقطع مختلفة في الشكل التكميلي 1-3. يمكن أيضا العثور على صور عالية الدقة هنا (http://www.rebeccayang.org/pdf/chamber%20design.pdf).
- أدخل الألواح البلاستيكية في قطعة التحميل (العلوية) من الغرفة كما هو موضح في <فئة قوية = "xfig">الشكل 1ج. يعمل هذا كسطح سفلي أثناء تحميل الذباب في ساحات وضع البيض الفردية.
- قم بتخدير الإناث على وسادة ثاني أكسيد الكربون2 وتحميلها بشكل فردي في كل ساحة لوضع البيض. اترك ~ 30 دقيقة للذباب للتعافي من ثاني أكسيد الكربون2 والتأقلم مع البيئة الجديدة.
- تحضير ركائز الاغاروز.
- للراحة ، احتفظ بزجاجة معدة مسبقا من الاغاروز المذاب بنسبة 1٪ في حمام مائي 55 درجة مئوية.
- أضف الكمية المطلوبة من محلول السكروز (2 م) في أنبوب مخروطي سعة 50 مل واخلطه بكمية مناسبة من الاغاروز. على سبيل المثال ، لتحضير ركيزة السكروز 150 ملي مولار ، ضع 750 ميكرولتر من محلول السكروز 2 M في الأنبوب ثم املأ الأنبوب بالأغروز حتى علامة 10 مل.
- قم بإعداد الركيزة العادية بنفس الطريقة ولكن أضف الماء المقطر بدلا من محلول السكروز.
<فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة: التركيز النهائي للأغاروز في هذا البروتوكول أقل بقليل من 1٪. في تجربتنا ، لا يهم التركيز الدقيق للأغاروز طالما أنه يتم التحكم فيه ليكون في حدود ~ 0.9 - 1.1٪ وأن الركيزتين لهما نفس تركيز الاغاروز.
- خذ قطعة الركيزة (السفلية) من الغرفة وماصة 1,000 ميكرولتر من ركيزة الاغاروز في كل حوض كما هو موضح في <الفئة القوية = "xfig">الشكل 1د.
- اترك الاغاروز يتصلب لمدة ~ 30 دقيقة.
- بمجرد أن تصبح ركائز الاغاروز والذباب جاهزة ، قم بتجميع جميع القطع الثلاث لغرفة وضع البيض ثم أخرج الألواح البلاستيكية.
- ضع الغرف في حاضنات الذباب.
<فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة: يمكن أن يختلف طول تجارب وضع البيض حسب الاحتياجات التجريبية. عادة ما نجري التجربة O / N (14-16 ساعة). أيضا ، لم يلاحظ أي تأثير كبير لتوقيت الساعة البيولوجية على تفضيلات وضع البيض.
- تخدير الإناث عن طريق حقن ثاني أكسيد الكربون2 في الغرفة. قم بتفكيك الغرفة ، وتخلص من الذباب المخدر في مشرحة الذباب (أي علبة قهوة فارغة مملوءة ببعض زيت الذرة). التقط صورا للنتائج لحفظ السجلات (انظر <الفئة القوية = "xfig">الشكل 2).
- عد عدد البيض يدويا واحسب مؤشرات التفضيل للتحليل. احسب مؤشر التفضيل ك (Na - Nb) / (Na + Nb) حيث يمثل Na و Nb عدد البيض في الموقع أ مقابل الموقع ب ، على التوالي.
