فحص وضع البيض: طريقة لتحديد سلوك وضع البيض ل C. ايليجانس

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Lee ، S. Y. and Kang ، K. قياس تأثير المواد الكيميائية على نمو وتكاثر Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2017).

C. ايليجانس يمكن أن يوفر سلوك وضع البيض معلومات مهمة في الدراسات التنموية والإنجابية والتشريحية. يقدم هذا الفيديو الخطوات المهمة لمقايسة وضع البيض ويظهر عينة من التجربة التي يتم فيها اختبار الدواء للكشف عن السمية الإنجابية.

البروتوكول

Lee and Kang ، قياس تأثير المواد الكيميائية على نمو وتكاثر Caenorhabditis elegans ، J. Vis. Exp. (2017).

فئة

1. C. ايليجانس فحص وضع البيض

1. احتضان البويضات المتزامنة مع العمر على صفيحة NGM التي تحتوي على DMSO أو etoposide لمدة 64 ساعة (قبل الولادة الأولى) حتى مرحلة الشباب عند 20 درجة مئوية
   <فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة: من الاختياري استخدام الديدان من تجارب قياس النمو. من الملائم إجراء قياس النمو وفحص وضع البيض معا.
2. انقل 5 ديدان بالغة إلى ألواح NGM الجديدة بدون مواد كيميائية (الحالة 1 ، المعالجة الكيميائية خلال فترة زمنية معينة ، من البيض إلى مرحلة البالغين) أو صفيحة NGM جديدة تحتوي على نفس المعالجة الكيميائية المسبقة (الحالة 2 ، التعرض المستمر للمواد الكيميائية خلال الفترة التجريبية الإجمالية) ، ثم احتضانها لمدة 24 ساعة
   <فئة قوية = "ملاحظة">ملاحظة: يوصى بعمل مكررات باستخدام 3-5 ألواح NGM لكل علاج ؛ يمكن استخدام هذه النسخ المتماثلة للتحليل الإحصائي.
3. انقله إلى طبق NGM الجديد كما هو موضح أعلاه واحسب عدد البيض كل يوم. عد الديدان التي زحفت وماتت وفقست داخليا.
4. كرر هذه الخطوات حتى لا تضع الديدان المزيد من البيض ، عادة في غضون 5 أيام.
5. احسب عدد البيض الموضوع لكل دودة من كل طبق ، واجمع هذه القيم كل يوم لمدة 5 أيام لتحديد العدد الإجمالي للبيضات الموضوعة.
   <فئة قوية = "ملاحظة" >ملاحظة: استبعاد عدد الديدان التي زحفت وفقست داخليا من الحساب.

المواد

<حدود الجدول = "0" cellpadding = "0" cellpacing = "0" نمط = "العرض: 656 بكسل ؛" العرض = "656" > قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات < td height = "19" style = "الارتفاع: 19 بكسل ؛ العرض: 165 بكسل ؛ ">Caenorhabditis elegans N2 مركز علم الوراثة Caenorhabditis (CGC) < td style="العرض:103 بكسل;"> النوع البري <ارتفاع TD = "19" النمط = "الارتفاع: 19 بكسل ؛" >ثنائي ميثيل سلفوكسيد سيجما ، الولايات المتحدة الأمريكية د2650 الإشريكية القولونية OP50 مركز علم الوراثة Caenorhabditis (CGC) Etoposide سيجما ، الولايات المتحدة الأمريكية [إ1383] < td height = "19" النمط = "الارتفاع: 19 بكسل ؛" > 35 × 10 مم طبق بتري SPL علوم الحياة ، كوريا الجنوبية 10035 <ارتفاع td = "نمط 19" = "الارتفاع: 19 بكسل ؛" >مجهر ستيريو نيكون، اليابان SMZ800N