تصوير الكالسيوم: طريقة لتصور النشاط العصبي في C. ايليجانس الحي

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Turek, M. et al. غرف الاغاروز الدقيقة لتصوير الكالسيوم طويل الأمد لالتهاب الغضب العصبي.J. Vis. Exp.(2015).

يقدم هذا الفيديو المفاهيم الكامنة وراء تصوير الكالسيوم ويتضمن مثالا على بروتوكول التصوير بفاصل زمني للديدان الموجودة في آبار الاغاروز المصبوبة.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

< p class = "jove_content">هذا البروتوكول هو مقتطف من Turek et al ، Agarose Microchambers لتصوير الكالسيوم طويل المدى ل Caenorhabditis elegans ، J. Vis. Exp. (2015).

فئة

1. تصوير الكالسيوم

استخدم السلالات المعدلة وراثيا التي تعبر عن مستشعرات الكالسيوم المشفرة وراثيا مثل HBR16 (goeIs5 [pnmr-1:: SL1-GCaMP3.35-SL2:: unc-54-3'UTR، unc-119 (+)]).
استخدم مجهرا مركبا مجهزا للتألق العرضي واسع المجال. قم بتوصيل إخراج TTL لكاميرا EMCCD بمدخل TTL لمؤشر LED ، بحيث تضيء العينة في كل مرة تسجل فيها الكاميرا إطارا. استخدم وقت تعريض ضوئي يبلغ حوالي 5 مللي ثانية. استخدم كسب EM في حدود 50 - 300.
حدد فيلما متتابعا يعمل لمدة 24 ساعة مع تصوير كل دودة كل 15 - 30 دقيقة أولا لمدة 20 ثانية باستخدام DIC ، ثم لمدة 20 ثانية باستخدام مضان GFP لتسجيل GCaMP ، ثم التقط صورة نهائية لإشارة mKate2 يتم التقاطها للتحكم في مستويات التعبير. استخدم معدل إطارات يبلغ 2 / ثانية أثناء كل تتابع.
لفحص البيانات المرئية ، استخدم خريطة ألوان زائفة لتحسين رؤية التغييرات الصغيرة في شدة التألق. ارسم بيانات الفلورسنت على أنها ΔF / F ، مع كون F هو متوسط قيمة خط الأساس للتألق. يمكن العثور على وصف مفصل لتحليل بيانات الكالسيوم في الأدبيات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

<حدود الجدول = "0" cellpadding = "0" cellpacing = "0" نمط = "العرض: 748 بكسل ؛" العرض = "749" > قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات < ارتفاع TD = "19" النمط = "الارتفاع: 19 بكسل ؛ العرض: 177 بكسل ؛ "> نظام LED < td style="العرض:65px;">CoolLED < نمط td = "العرض: 283 بكسل ؛ "> pE-2 < td style="العرض:223px;"> <ارتفاع TD = "19" النمط = "الارتفاع: 19 بكسل ؛" >المجهر المركب نيكون ربط < td style="العرض:223px;"> <ارتفاع TD = نمط "19" = "الارتفاع: 19 بكسل ؛" >كاميرا EMCCD أندور اكسون 897 يباع الآن باسم iXon Ultra 897 < td height = "19" النمط = "الارتفاع: 19 بكسل ؛ "> Z للمجهر قبل نانو سكين Z < td style="العرض:223px;"> < td height = "19" style = "الارتفاع: 19 بكسل ؛" > المرحلة XY للمجهر قبل بروسكان الثالث < td style="العرض:223px;"> < ارتفاع TD = "19" النمط = "الارتفاع: 19 بكسل ؛" >مرشح الضوء الأحمر صفاء ET660 / 50 م < td style="العرض:223px;"> < ارتفاع TD = "19" النمط = "الارتفاع: 19 بكسل ؛" > 35 مم طبق بتري صقر أطباق فالكون بتري يمكن التخلص منها ، معقمة ، كورنينج < td style="العرض:223px;">

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن