اختبار الغوص في الخزان الجديد: طريقة لدراسة استجابات الإجهاد الفطري في أسماك الزرد

الملخص

المصدر: Chin J.S.R.، et al. الأساليب السلوكية لدراسة الإجهاد الفطري في أسماك الزرد. J. Vis. Exp. (2019)

تصف المقالة طريقة سلوكية لتقييم الإجهاد في أسماك الزرد. استجابة للإجهاد ، تميل أسماك الزرد إلى السباحة في قاع الخزان حتى يتم إزالة الإجهاد. يصف نموذج البروتوكول الطريقة التدريجية لإجراء الفحص.

البروتوكول

فئة

1. إعداد اختبار الخزان الجديد

1. قم بإعداد دورق سعة 250 مل مملوء مسبقا بمياه نظام الأسماك ، وخزانين على الأقل.
2. في صباح يوم الاختبار ، قم بنقل ما لا يقل عن 10 أسماك زرد بالغة للاختبار لاستخدامها في كل حالة تجريبية (الضوابط والبالغين التجريبيين) من منشأة الأسماك إلى حوض احتجاز ، ونقلها إلى غرفة السلوك ، والسماح لها بالتأقلم لمدة ساعة واحدة على الأقل.
   ملاحظه: يجب إجراء تحليل الطاقة قبل التجريب ، ولكن في أيدينا ، عادة ما يكون n = 10 كافيا لاكتشاف الدلالة الإحصائية. علاوة على ذلك ، يجب ألا يحتوي الخزان على أكثر من خمسة أفراد لكل لتر من الماء. يكفي التأقلم لمدة ساعة واحدة حيث ثبت أن البالغين من أسماك الزرد يعتادون في غضون 30 دقيقة من الخزان الجديد. أيضا ، تتأثر الإيقاعات السلوكية بعمليات الساعة البيولوجية ، وبالتالي يجب إجراء التكرارات التجريبية التي تتم في أيام مختلفة في نفس الساعات. نقوم عادة بإجراء جميع التجارب بين الساعة 11:00 صباحا و 6:00 مساء.
3. قم بتسمية الخزانات بحيث تكون حالة أو النمط الجيني لها عمياء عن المجري.
   ملاحظه: يمكن بسهولة تعمية التجارب عن المجرب عن طريق وضع العلامات على الخزانات باستخدام نظام الحروف أو الأرقام (على سبيل المثال ، يتم تسمية خزان واحد ب "A" ، وآخر "B" ، وما إلى ذلك). يقوم طرف غير مشارك في التجارب بتسمية الخزانات بمثل هذا النظام ، ويخفي الهويات من المجرب حتى يكتمل التحليل اللاحق.
4. باستخدام شبكة ، ضع شخصا بالغا برفق في الدورق المملوء مسبقا من الخطوة 1.1. اسمح للأسماك البالغة بالتأقلم مع الدورق لمدة 10 دقائق.
   ملاحظه: سجل جنس الشخص البالغ ، حيث قد يكون من المهم البحث عن الاختلافات الخاصة بالجنس بعد التحليل.
5. بعد التأقلم في الدورق ، أدخل السمكة في الخزان الجديد (قم بإعداد التفاصيل أدناه) عن طريق سكب الماء والبالغين برفق من الدرق.
   ملاحظه: تصف الخطوات الواردة في هذا القسم إعداد اختبار الخزان الجديد. ويرد رسم بياني للمنتج النهائي في الشكل 1 ب.
   1. ضع الخزان الجديد في منتصف الطاولة.
   2. ضع مصابيح الأشعة تحت الحمراء خلف الخزان وضع لوح الأكريليك الأبيض أو شاشة الناشر بين الخزان ومصدر ضوء LED.
   3. ضع الناشر بحيث ينشر الضوء القادم من مصابيح LED إلى أقصى حد ، وتكون شدة الضوء كافية لإضاءة الخزان الجديد. كلما اقتربت اللوحة من مصدر الضوء ، كانت الأضواء أكثر سطوعا ، ولكن قل انتشارها. على النقيض من ذلك ، فإن وضع لوحة الناشر بعيدا عن مصدر الضوء سيقلل من شدة الضوء ، ولكنه ينشر الضوء بشكل أفضل.
   4. املأ ما يقرب من ثلاثة أرباع الخزان الجديد بمياه نظام الأسماك.
      ملاحظه: يتم توليد مياه النظام باستخدام التناضح العكسي لماء الصنبور ، متبوعا بالجرعات بحيث تساوي الموصلية 900 ± 100 ميكرو ثانية ، وأن يكون الرقم الهيدروجيني محايدا (7.2) ، وأن درجة الحرارة 27 ± 1 درجة مئوية.
   5. قم بتوصيل الكاميرا بحامل الكاميرا وقم بتوصيل الكاميرا بالكمبيوتر. افتح برنامج الحصول على الفيديو واضبط الكاميرا لمواجهة مقدمة الخزان وتأكد من إمكانية رؤية الخزان الجديد بالكامل وعدم وجود مناطق محجوبة في الفيديو. اضبط الخزان وأضواء الأشعة تحت الحمراء بحيث تكون هناك إضاءة كافية ومتساوية في جميع أنحاء الخزان عند ملاحظتها من خلال الكاميرا.
      ملاحظه: قبل الشروع في التجارب ، قد يكون من المفيد في كثير من الأحيان إجراء تشغيل تجريبي ، حيث يتم التقاط فيديو لسمكة وإجراء التتبع. سيضمن ذلك أن الإعداد كاف لتجربة السلوك.
6. بعد إدخال الشخص البالغ إلى الخزان الجديد ، ابدأ تسجيل الكاميرا ، وابتعد عن الإعداد لمنع الضيق الإضافي للأسماك.
7. بعد انتهاء التسجيل ، أخرج الفرد من الخزان الجديد وضعه في خزان احتجاز جديد.
   ملاحظه: يجب استخدام خزان حمل مختلف عن الخزان الوارد في الخطوة 1.2 لمنع الاختبار المتكرر على نفس الأفراد.

النتائج

الشكل 1. رسم تخطيطي لإعداد الخزان الجديد.(أ) أبعاد الخزان الجديد شبه المنحرف سعة 1.8 لتر كما يتضح من جانب تسجيل الخزان. (ب) رسم تخطيطي للإعداد بما في ذلك مواضع مصابيح الأشعة تحت الحمراء والكاميرا والحواجز المستخدمة لتقليل التداخل البشري.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات كاميرا نستخدم كاميرا Point Gray Grasshopper3 USB مع عدسة من Edmund Optics. مرشح الأشعة تحت الحمراء إدموند للبصريات برنامج اقتناء الفيديو استخدم برامج مثل Virtualdub أو FlyCapture لأنه يمكن ضبط معدل إطارات الاستحواذ. أضواء LED بالأشعة تحت الحمراء خزان الفحص أكوانيرينغ رقم الجزء ZT180 الحجم: M3 1.8 لتر الحامل والمشبك ، أو حامل ثلاثي القوائم قياسي للكاميرا 250 مل دورق برنامج التتبع نحن نستخدم Ethovision XT 13 من Noldus Information Technology