استئصال الكبد المستهدف: إحداث موت خلايا الكبد باستخدام الميترونيدازول في يرقات الزرد المعدلة وراثيا

الملخص

المصدر: Choi T.Y., et al. الاستئصال الخاص بخلايا الكبد في أسماك الزرد لدراسة تجديد الكبد الذي يحركه القنوات الصفراوية. J. Vis. Exp. (2015)

تصف المقالة استئصال الكبد المستهدف ، وهي طريقة للحث على موت خلايا الكبد باستخدام الميترونيدازول في يرقات الزرد المعدلة وراثيا. يصف بروتوكول العينة عملية توليد واستئصال الكبد المستهدف في أسماك الزرد ومعالجته وتقييمه.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. تحضير الأجنة / اليرقات

1. انقل 100 جنين إلى طبق بتري 100 مم مع 25 مل من ماء البيض. احتفظ بعدم الاحتفاظ بأكثر من 100 جنين لكل طبق بتري وارفعها عند 28 درجة مئوية.
2. لتثبيط التصبغ ، أضف فينيل ثيوريا (PTU) إلى أطباق بتري قبل 10 ساعات بعد الإخصاب (HPF) ، وقم برفع الأجنة / اليرقات حتى 80 حصان. التركيز النهائي ل PTU هو 0.2 ملي مولار < br / > تحذير: PTU سامة. استخدم وفقا لإرشادات المناولة المناسبة.
3. قم بتخدير اليرقات عن طريق إضافة 3 أمينو حمض البنزويك إيثيل استر (Tricaine) ، بتركيز نهائي قدره 0.016٪ ، في أطباق بتري. ثم ، باستخدام مجهر اللفائفلور ، قم بفرز اليرقات الإيجابية CFP. استخدم اليرقات ذات حجم الكبد المماثل وتخلص من ال....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 3-حمض البنزويك الأميني إيثيل إستر (تريكايين) مسحوق سيجما ألدريتش أ 5040 اصنع 0.4٪ (15 ملم) من مرق التريكايين: أحضر 0.4 جم من التريكيين إلى 100 مل مع ماء البيض. اضبط على درجة الحموضة 7. ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) سيجما ألدريتش د8418 ميترونيدازول سيجما ألدريتش م 1547 ن-فينيلثيوريا (PTU) سيجما ألدريتش ص 7629 طبق بتري 100 × 15 مم شركة دينفيل العلمية م 5300 ماء البيض 0.3 جم / لتر من أملاح البحر "المحيط الفوري" و 0.5 ملي CaSO4 في الماء المقطر. مجهر epifluorescence لايكا مايكروسيستمز M205FA