تشريح أمعاء أسماك الزرد البالغة: تقنية لتحليل الامتصاص المركب

الملخص

المصدر: Jie J. et al. ، التنبيب الفموي لأسماك الزرد البالغة: نموذج لتقييم امتصاص الأمعاء للمركبات النشطة بيولوجيا. J. Vis. Exp. (2018).

يصف هذا الفيديو تقنية عزل الأمعاء لتقييم امتصاص الأمعاء للمركبات النشطة بيولوجيا. في هذه العينة ، سنقوم بعزل الأمعاء عن سمكة الزرد البالغة لتحليل امتصاص المنشطات المناعية.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. تشريح الأمعاء لسمك الزرد

1. بعد فترة زمنية محددة بعد التنبيب (على سبيل المثال ، 5 ساعات و / أو 24 ساعة) ، ضع السمكة باستخدام شبكة في محلول 300 مجم / لتر إيثيل 3-أمينوبنزوات ميثان سولفونات (MS-222) للقتل الرحيم. تأكد من توقف الأنبوب عن الحركة وعدم وجود منعكس قرصة الذيل. خمس دقائق كافية عادة.
2. التقط القتل الرحيم بشبكة وضعه على ورق ترشيح.
   ملاحظه: ورق الترشيح مفيد جدا لإزالة الأنسجة اللاصقة على طول الأمعاء.
3. باستخدام مقص تشريح حاد ، قم بعمل شق نصف دائري من فتحة الشرج إلى الأوركالوم وافتح شق باستخدام ملاقط دقيقة. اقطع طرفي الأمعاء ، وأخرج جميع الأعضاء الداخلية ، وضعها على ورق الترشيح.
   أنذر: العمل بسرعة لتقليل التمثيل الغذائي للخلايا وموتها.
   ملاحظه: بدلا من ذلك ، قم بإزالة الأنسجة اللاصقة في PBS وعلى الجليد.
4. افصل الأمعاء عن الأعضاء الداخلية مع التأكد من الحفاظ على اتجاهها (الجزء الأمامي إلى الجزء المعوي الخلفي) وتمديدها. عادة ما يكون الجزء الأمامي من الأمعاء أوسع من الجزء الخلفي. احرص على الحصول على الأمعاء بالكامل عند التشريح.
   ملاحظه: الطرف الخلفي ناعم جدا وهش في الأسماك الصغيرة وقد ينكسر ، خاصة في <0.7 جم.
5. لف الأمعاء على ورق الترشيح بالملاقط لفصل الأنسجة اللاصقة عن الأمعاء.
6. المضي قدما في إعداد الأمعاء لإجراء تحليلات مختلفة

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات إم إس -222 سيجما ألدريتش [إ10521] ذرور 10x PBS سيجما ألدريتش ص 5493 ورق الترشيح مختبر التصفية RM14034252