الحقن داخل القناة: توصيل مزيج الحقن إلى قنوات الغدة الثديية للفأر

الملخص

المصدر: Xiang ، D. ، et al. نمذجة سرطان الثدي عن طريق الحقن داخل القناة للفيروس الغدي المعبر عن Cre في الغدة الثديية للفأر. J. Vis. Exp (2019).

يصف هذا الفيديو تقنية الحقن داخل القناة حيث نقوم بتوصيل مزيج الحقن في قنوات الغدد الثديية للفأر.

البروتوكول

فئة < p = "jove_title" >1. الحقن داخل القناة

1. استخدم تقنيات التعقيم طوال العملية الجراحية.
2. قم بعمل موقع شق على الجلد بطول ~ 1 سم بين اثنين من MGs الأربية الرابعة (الشكل 1). افصل بعناية سديلة الجلد (باستخدام MG) عن الصفاق الجداري لتصور شجرة الأقنية
الثديية.
3. أمسك الحلمة بحذر باستخدام ملقط Watchmaker وقم بإزالة الحلمة الخارجية دون قطع أي جلد قريب ، باستخدام مقص التشريح الدقيق.
4. قم بتحميل ~ 3-5 ميكرولتر من خليط حقن Ad-Cre في حقنة هاميلتون سعة 25 ميكرولتر مع إبرة محور معدنية 33 G. تقدير حجم خليط الحقن في المحقنة بناء على الصبغة الزرقاء الموجودة في الخليط.
   ملاحظه: استخدم حجما أصغر (على سبيل المثال ، 3 ميكرولتر) عند الحقن في MGs من الإناث التي تتراوح أعمارهن بين 3-4 أسابيع وحجم أكبر (على سبيل المثال ، 10 ميكرولتر) عند الحقن في MGs من الإناث المرضعات.
5. أمسك حافة رفرف الجلد برفق باستخدام ملاقط منحنية ناعمة وحقن خليط حقن Ad-Cre ببطء في الحلمة ، وفي الوقت نفسه راقب انتشار الصبغة الزرقاء في شجرة القنوية الثديية. حافظ على معدل الحقن منخفضا قدر الإمكان لتجنب تلف تجويف الأقنية.
   ملاحظه: يشير السائل المحقون (كما يتضح من الصبغة الزرقاء البروموفينول المضمنة) الذي ينتشر في جميع أنحاء شجرة القناة بأكملها دون تسرب إلى الحجرة اللحمية إلى نجاح الحقن داخل القناة.
6. اسحب الإبرة برفق من الحلمة لتجنب أي تسرب للسائل المحقون.
7. افحص الجانب البعيد (أي بعيدا عن الحلمة) من MG أو المنطقة المحيطة بالحلمة المحقونة. لاحظ أن تورم الصبغة الزرقاء (أي الصبغة المنتشرة في السدى القريب) يشير إلى حقن وسادة دهون الثدي بدلا من الحقن الناجح داخل القناة.
8. أغلق الجروح الجراحية (من 1.2) في الجلد بمشابك الجرح.

< p class = "jove_title" >2. رعاية ما بعد الجراحة

1. أخرج الماوس من التخدير وضعه على وسادة تدفئة داخل قفص نظيف للشفاء.
2. يتم تطبيق ميلوكسيكام تحت الجلد بمعدل 5 ملغ/كغ مرة أخرى، بعد 24 ساعة من الجراحة.
3. راقب الظروف العامة للحيوان وابحث عن علامات العدوى في موقع الشق لمدة 5 أيام.
4. تتم إزالة مقاطع الجرح ~ 7-10 أيام بعد الجراحة.

النتائج

الشكل 1: رسم تخطيطي للحقن داخل القناة لفيروس Ad-Cre في MG.(أ) موقع الشق في خط الوسط بين المغدرين الربعين. (ب) الحقن داخل القناة ل Ad-Cre بصبغة زرقاء (لتحسين التصور) في واحدة من المغمرات الرابعة. (ج) إغلاق الشق في الجلد بمشابك الجرح

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات إبرة قياس 33 هاملتون 7803-05 نمط النقطة 3 حادة مشبك انعكاس 7 مم برينتري العلمية RF7 CS الفيروس الغدي ، Ad-K5-Cre نواة الناقل الفيروسي بجامعة أيوا Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547) الفيروس الغدي ، Ad-K8-Cre نواة الناقل الفيروسي بجامعة أيوا Ad5mK8-nlsCre بروموفينول الأزرق سيجما ألدريتش ب 0126-25 جي حقنة هاميلتون هاملتون 7636-01 0.025 مل مقص التشريح الدقيق بنتاير 9 م ملقط صانع الساعات ملاقط تشريح دقيقة دومونت م 5