1. التحقق من صحة نقائل الرئة باستخدام تضخم الحبر الهندي للرئتين الحاملتين للورم
< p class = "jove_content" >
ملاحظة: للتحقق من صحة نتائج تصوير الورم الحي لوسيفيراز ، قم بإجراء نفخ حبر الهند لرئتي الفأر الحاملة للورم لتحديد كمية عقيدات الورم. تنتقل خلايا 4T1 أيضا إلى أعضاء وأنسجة أخرى (
الشكل 1) ، وبالتالي ، يجب إجراء الفحص النسيجي لهذه الأعضاء للتحقق من صحة ورم خبيث إذا لزم الأمر. يستخدم هذا البروتوكول ورم خبيث في الرئة كمثال.
- احتفظ بالفئران في قفص منزلها الحالي للقتل الرحيم. عند إيواؤها مع أخرى ، انقل تلك الفئران التي لا يتم قتلها رحيما إلى قفص مختلف.
- قم بإزالة الجزء العلوي من مرشح القفص واستبدله بأعلى مرشح CO2. قم بتشغيل أسطوانة غاز CO2 المضغوطة (100٪) المتصلة بأعلى مرشح CO2. اضبط معدل التدفق على 2 لتر / دقيقة واحتفظ بثاني أكسيد الكربون لمدة 10 دقائق على الأقل. إذا كانت الفئران لا تزال تتنفس في نهاية 10 دقائق ، فاترك ثاني أكسيد الكربون حتى دقيقة واحدة على الأقل بعد توقف الفئران عن التنفس. قم بإيقاف تشغيل التحكم في أسطوانة CO2 ومقياس التدفق. انتظر لمدة 3 دقائق أخرى وقم بإزالة الجزء العلوي من الفلتر.
- ضع الفأر المضحى على ظهره على لوح البوليسترين. قم بتثبيت الساقين لضمان الوصول دون عوائق إلى القصبة الهوائية. رش الفئران بنسبة 70٪ من الإيثانول.
- باستخدام مقص ، قم بقص خط الوسط لمنتصف بطن الفأر من خلال القفص الصدري وأعلى باتجاه الغدد اللعابية. راقب القصبة الهوائية. استخدم الملقط لإزالة الأنسجة المحيطة بالقصبة الهوائية لكشف القصبة الهوائية.
- قم بربط طرف ماصة أسفل القصبة الهوائية. أمسك الطرف بيد واحدة ، ارفع القصبة الهوائية برفق لأعلى وبعيدا عن الجسم.
- قم بتدوير المنصة مع تثبيت الماوس 180 درجة. استخدم حقنة توبركولين 1/2 CC 27 G 1/2 لحقن الحبر الهندي (10٪ حبر هندي و 0.1٪ هيدروكسيد أمونيوم) في الرئتين عبر القصبة الهوائية. قم بتضخيم الرئتين تماما بالحبر حتى تشعر بمقاومة قوية.
- استخدم مقصا لقطع القصبة الهوائية. استخدم الملقط لإمساك الماوس وإدخال مجموعة أخرى من الملقط تحت الرئتين وسحب فصوص الرئة من الفأر. اشطف الرئتين لفترة وجيزة في دورق يحتوي على الماء.
- في غطاء الدخان الكيميائي ، انقل الرئتين إلى قارورة زجاجية تحتوي على 3 مل من محلول Fekete (50٪ إيثانول ، 6٪ فورمالديهايد ، و 3٪ حمض الخليك الجليدي). قم بتغطية القارورة لمنع المحلول من التبخر.
ملاحظه: يمكن تخزين الأنسجة في محلول Fekete إلى أجل غير مسمى.
- بعد بضع دقائق ، لاحظ عقيدات الورم كنقاط بيضاء على الرئتين السوداء (الشكل 1). يمكن رؤية عقيدة الورم البيضاء بالعينين. انقل الرئتين إلى طبق في غطاء الدخان واحسب عدد البقع البيضاء. تمثل كل بقعة بيضاء عقيدة ورم نقيلية واحدة.
