القياس المكاني لضغط السائل الخلالي للورم: طريقة لقياس ضغط السائل الخلالي

الملخص

المصدر: Stapleton et al. ، قياسات التروية وضغط السائل الخلالي وتراكم الجسيمات الشحمية في الأورام الصلبة. J. Vis. Exp. (2016).

يصف هذا الفيديو تقنية لقياس ضغط السائل الخلالي داخل الورم عن طريق تصوير التروية باستخدام نظام آلي موجه بالصور. تتم مقارنة القياسات بالتراكم داخل الورم للجسيمات الشحمية ، داخل ورم صلب.

البروتوكول

فئة

1. القياسات المكانية لضغط السائل الخلالي للورم

1. لقياس IFP ، قم بتوصيل إبرة العمود الفقري 25 G بمحول الضغط ونظام اكتساب IFP من خلال 50 سم من أنابيب البولي إيثيلين PE20. اغسل النظام بالكامل بمحلول كبريتات الهيبارين / محلول ملحي (1:10). عقم الإبرة بنسبة 70٪ من الأيزوبروبيل قبل الاستخدام.
2. قم بتشغيل نظام الاستحواذ وقم بتشغيل برنامج اكتساب IFP وقم بتحميل ملفات الإعدادات لمعايرة النظام للحصول على قياسات IFP في مم زئبق. انقر فوق الزر الحصول لجمع بيانات IFP باستمرار.
3. إجراء قياسات IFP بين 48 و 72 ساعة بعد حقن الجسيمات الشحمية المقطعية (وهذا يتوافق مع الوقت التقريبي لتراكم ذروة الجسيمات الشحمية المقطعية في الورم) ، باستخدام الطريقة الموصوفة.
   1. استخدم مضخة الحقنة لحقن بلعة من الجسيمات الشحمية المقطعة بتركيز 400 مجم من اليود ^كجم-1. اضبط المضخة على حقن حجم 150 ميكرولتر تقريبا (بافتراض أن الماوس 25 جم). اضغط على زر "ابدأ" في المضخة للحقن. اغسل القسطرة يدويا ب 50 ميكرولتر من المحلول الملحي (ضعف حجم القسطرة) للتأكد من حقن كمية العامل بالكامل وأن القسطرة صافية.
      قم بتوصيل إبرة IFP بروبوت CT-IFP.
4. قم بإجراء عمليات فحص المعايرة لمحاذاة أنظمة الإحداثيات لروبوت CT-IFP والماسح الضوئي المقطعي المحوسب. أضف مرفق العلامة الإيمانية إلى روبوت CT-IFP وقم بإجراء فحص بالأشعة المقطعية الحجمي بأربعة باستخدام العلامة الإيمانية في أربعة أوضاع مختلفة.
   1. قم بتشغيل برنامج وحدة التحكم في الروبوت CT-IFP ، وقم بتهيئة الروبوت ، وحرك الروبوت إلى المواضع الثلاثة عن طريق إدخال مواضع الاستهداف x و y و z والنقر فوق الزر "انتقال".
   2. قم بإجراء فحص بالأشعة المقطعية بإحداثيات x و y و z التالية: (1) 0،0،0 ؛ (2) -10,0,0; (3) 0,7,0; و (4) 0،0،10. حدد مسحا ضوئيا بجهد 90 كيلو فولت ، 10 مللي أمبير ، 16 ثانية باستخدام برنامج الماسح الضوئي المقطعي المحوسب واضغط على "ابدأ" لبدء الفحص. أعد بناء الفحص كما هو موضح. قم بإجراء فحص DCE-CT عن طريق ضبط مضخة الحقنة لحقن حجم 100 ميكرولتر من iohexol الحر الممزوج بالمحلول الملحي (نسبة 9: 1 من حيث الحجم).
      1. على وحدة التحكم في الماسح الضوئي المقطعي المحوسب، حدد الفحص الديناميكي لمدة 5 دقائق الذي يستخدم إعداد طاقة الأشعة السينية بقدرة 80 كيلو فولت، وطاقة أنبوب تبلغ 90 مللي أمبير، ويلتقط 416 عرضا للصور كل ثانية خلال أول 30 ثانية ويتبعها اكتساب كل 10 ثوان. التقط 5 ثوان من بيانات DCE-CT ثم اضغط على زر البدء في مضخة الحقن.
      2. بعد فحص DCE-CT ، قم بإجراء فحص التصوير المقطعي المحوسب التشريحي الحجمي.
5. قم بتشغيل برنامج محاذاة الروبوت CT-IFP. انقر فوق الزر "إضافة" الذي تم تحميله في منطقة "بيانات التسجيل" وحدد عمليات مسح التسجيل الأربعة المعاد بناؤها التي تم الحصول عليها في 1.3 ، ثم انقر فوق "فتح" .
   ملاحظه: سيتم إدخال موقع البكسل للعلامة الإيمانية تلقائيا في البرنامج.
   1. انقر فوق الزر "حساب التحويل" ثم انقر فوق الزر "تطبيق التحويل". يؤدي ذلك إلى إنشاء بيانات المحاذاة التي سيتم استخدامها لتحويل نظام إحداثيات الروبوت CT-IFP إلى نظام إحداثيات الماسح الضوئي CT. بعد اكتمال المعايرة ، قم بتوصيل منصة بروبوت CT-IFP.
6. قم بتخدير كل فأر باستخدام 2٪ من الأيزوفلوران الممزوج بالهواء الطبي أو الأكسجين وتأكد عن طريق الضغط على إصبع القدم وعدم ملاحظة أي تفاعل. شل حركة على منصة الروبوت CT-IFP ووضع الفأر بحيث يمكن الوصول إلى الورم من قبل نظام الروبوت CT-IFP. شل حركة الورم باستخدام شريط لاصق بحيث لا يتحرك أثناء إدخال إبرة IFP.
7. قم بإجراء فحص التصوير المقطعي المحوسب التشريحي قبل إدخال إبرة IFP. إعادة بناء بيانات التصوير المقطعي المحوسب باستخدام الخطوات الموضحة في 1.2.
8. قم بتحميل بيانات التصوير المقطعي المحوسب لإدخال الإبرة المسبقة في برنامج محاذاة الروبوت CT-IFP. اضبط النافذة والمستوى لتصور الورم. انقر فوق حافة الورم في أي صورة ، ثم انقر فوق موقع حافة ثان.
   ملاحظه: سيقوم البرنامج بحساب سلسلة من المواضع على طول خط خطي بين الموضعين. لاحظ إحداثيات x و y و z لسلسلة من 5 إلى 8 مواضع متباعدة بشكل متساو من القائمة.
9. قم بإعداد نظام IFP عن طريق شطف الإبرة بمحلول الهيبارين الملحي قبل الإدخال.
10. أدخل مواضع الإبرة الأولى المحددة مسبقا في x و y و z في برنامج التحكم في الروبوت CT-IFP واضغط على زر "انتقال" لتحريك الروبوت إلى الموضع المطلوب. انقر فوق الزر "إدخال إبرة" لإدخال الإبرة في الأنسجة.
    1. بعد إدخال الإبرة ، تأكد من اتصال جيد بالسوائل بين إبرة IFP والأنسجة عن طريق الضغط على أنبوب PE20 وتحريره ، مع ملاحظة أن قياس IFP يزيد ويعود إلى قيمة القرص المسبق على برنامج الحصول على IFP. رفض القياسات التي لا تعود إلى خط الأساس.
11. احصل على فحص تشريحي بالأشعة المقطعية مع إدخال الإبرة ، ثم انقر فوق الزر "سحب الإبرة" في برنامج التحكم في الروبوت CT-IFP لسحب الإبرة من الأنسجة. رفض أي قياسات IFP حيث لا تعود قيمة IFP إلى قيمة إدخال الإبرة المسبقة بعد سحب الإبرة. هذا يدل على أن الإبرة ربما تكون مسدودة أثناء القياس. كرر الخطوات من 1.8 إلى 1.10 لكل موضع إبرة.
12. حدد موضع الإبرة داخل حجم الورم عن طريق حساب مواضع x و y و z لمنفذ الإبرة بالنسبة لمركز كتلة حجم الورم كما هو محدد في الفحص المقطعي المحوسب الحجمي بعد الإدخال للإبرة.
13. أعد إلى قفصها بعد اكتمال جميع القياسات. لا تترك دون رقابة ، واحرص على مراقبتها حتى يتم استعادة الوعي وتكون قادرة على الحفاظ على الاستلقاء القصي.

المواد