مقالة منهجية

اختبار التألق المناعي CTC: تقنية لتوصيف الخلايا السرطانية المنتشرة

أبريل 30, 2023

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Garcia ، J. ، et al. توصيف PD-L1 شبه التلقائي وتعداد الخلايا السرطانية المنتشرة من مرضى سرطان الرئة ذو الخلايا غير الصغيرة عن طريق التألق المناعي.J. Vis. Exp.(2019)

يصف هذا الفيديو مقايسة التألق المناعي للخلايا السرطانية المنتشرة (CTC) ، وهي تقنية لتوصيف المؤشرات الحيوية على الخلايا السرطانية المنتشرة في عينات مرضى سرطان الرئة ذات الخلايا غير الصغيرة. يمكن استخدام هذا الاختبار لمراقبة التغيرات الديناميكية للورم والاستجابة المناعية ، والتي قد تعكس الاستجابة للعلاج الكيميائي والإشعاعي وعلاجات العلاج المناعي المحتملة.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_title" >1. تلطيخ التألق المناعي

  1. اعدد عدد الخلايا لكل مل على شريحة مجمعة بشبكة من نوع مقياس الدم لكل مل. قم بتخفيف العينة المخصبة بمحلول مضاد للارتباط بنسبة 0.2٪ (جدول المواد) بتركيز يصل إلى 100,000 خلية / 100 ميكرولتر لكل خلوي.
  2. بلل محيط حجرة العينة باستخدام القطن (جدول المواد) ب 50 ميكرولتر من محلول مضاد للربط بنسبة 0.2٪. ضع شريحة زجاجية من البوليليسين في غرفة العينة وأغلقها.
  3. قم بتغطية طرف بمحلول مضاد للارتباط بنسبة 0.2٪ عن طريق سحب العينة لأعلى ولأسفل 3x. أعد تعليق العينة المخصبة وانقل محلول الخلية إلى غرفة العينة. جهاز طرد مركزي مع جهاز طرد مركزي مخصص (جدول المواد) عند 400 دورة في الدقيقة لمدة 4 دقائق (تسارع منخفض).
  4. ضع عازل السيليكون حول منطقة الترسيب. اترك الشريحة الزجاجية تجف تحت خزانة أمان ميكروبيولوجية لمدة 2 دقيقة.
  5. تحضير محلول التثبيت عن طريق تخفيف 1 مل من 16٪ بارافورمالدهيد (PFA) مع 3 مل من PBS المعقم. أضف 100 ميكرولتر من محلول التثبيت (4٪ PFA) لكل عينة واحتضن في RT لمدة 10 دقائق. قم بإزالة محلول التثبيت وقم بإجراء ثلاث غسلات ب 200 ميكرولتر من PBS واحتضانها في RT لكل منهما لمدة دقيقتين < br / > تنبيه: استخدم PFA تحت خزانة السلامة الكيميائية لمنع الاستنشاق.
  6. تحضير محلول التشبع عن طريق تخفيف مصل الأبقار الجنيني (FBS) بنسبة 5٪ ، وكاشف حجب مستقبلات Fc (FcR) بنسبة 5٪ ، وألبومين مصل الأبقار (BSA) بنسبة 1٪ في PBS المعقم (جدول المواد). أضف 100 ميكرولتر من محلول التشبع لكل عينة واحتضنه لمدة 30 دقيقة في RT. قم بإزالة محلول التشبع.
  7. أضف 100 ميكرولتر من محلول الأجسام المضادة لكل عينة (الجسم المضاد CD45 1/20 ؛ الجسم المضاد PanCK 1/500 ؛ الجسم المضاد PD-L1 1/200 ؛ محلول التشبع Qsp 100 ميكرولتر) (جدول المواد). ضع شريحة زجاج البوليليسين في طبق بتري مقاس 100 مم × 15 مم. بلل ورقة ماصة ب 2 مل من الماء المعقم وأغلق طبق بتري بالغطاء. ضعها عند 4 درجات مئوية طوال الليل واحميها من الضوء.
  8. قم بإزالة مزيج الأجسام المضادة وقم بإجراء 3 غسلات مع 200 ميكرولتر من PBS تحتضن كل غسلة لمدة دقيقتين. اترك العينة تجف لمدة 5 دقائق واحميها من الضوء. ضع 10 ميكرولتر من محلول التركيب (جدول المواد) في منطقة الترسيب وقم بتغطيتها بغطاء مجهر دون عمل فقاعة. ختم الغطاء بطلاء الأظافر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات بلورونيك F-68 10٪ جيبكو هاتف: 24040-032 حل مضاد للربط. شروط التخزين: درجة حرارة الغرفة EZ Cytofunnels ثيرموفيشر A78710003 غرفة عينة مع القطن. شروط التخزين: درجة حرارة الغرفة جهاز طرد مركزي شاندون سيتوبسين 4 ثيرموفيشر A78300003 جهاز طرد مركزي مخصص. شروط التخزين: درجة حرارة الغرفة بارافورمالدهايد 16٪ ثيرموفيشر 11490570 حل التثبيت. شروط التخزين: + 4 درجة مئوية فوسفات مخزن ملحي فائق النقاء الصف 1X - 1 لتر 1 مختبر القاعدة BUF-2040-1X1L شروط التخزين: درجة حرارة الغرفة عامل حجب FcR ميلتيني بيوتيك 130-059-901 شروط التخزين: + 4 درجة مئوية الجسم المضاد أحادي النسيلة PD-L1 (استنساخ 29E2A3) - Phycoerythrin بيو ليجند BLE329706 شروط التخزين: + 4 درجة مئوية الجسم المضاد أحادي النسيلة PanCK (استنساخ AE1 / AE3) Alexa Fluor 488 ثيرموفيشر 53-9003-80 شروط التخزين: + 4 درجة مئوية CD45 الجسم المضاد أحادي النسيلة (استنساخ HI30) Alexa Fluor 647 بيو ليجند BLE304020 شروط التخزين: + 4 درجة مئوية فلوروماونت سيغما F4680 حل التركيب. شروط التخزين: درجة حرارة الغرفة طبق بتري دوتشر 632180 شروط التخزين: درجة حرارة الغرفة محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) أوزيم BE17-512F شروط التخزين: + 4 درجة مئوية شرائح البولي ليسين ثيرموفيشر J2800AMNZ شروط التخزين: درجة حرارة الغرفة عازل السيليكون جريس بيو لابز 664270 شروط التخزين: درجة حرارة الغرفة ماء معقم منزوع الأيونات - 100 مل 1 مختبر القاعدة CUS-4100-100 مل شروط التخزين: درجة حرارة الغرفة مصل ربلة الساق الجنينية (FCS) جيبكو 10270-106 شروط التخزين: + 4 درجة مئوية

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

PD L1PBS

مقالات ذات صلة