فحص استخراج الحمض النووي الريبي: طريقة لاستخراج الحمض النووي الريبي من خلايا سرطان الرئة المنقولة miRNA

الملخص

المصدر: Hossian ، A. K. M. N. et al. ، تحليل علاجات miRNA التوافقية لتنظيم دورة الخلية وتكوين الأوعية. J. Vis. Exp. (2019).

يصف هذا الفيديو بروتوكول استخراج الحمض النووي الريبي من خلايا سرطان الرئة المنقولة miRNA. يمكن استخدام هذا النهج لتحديد نشاط علاج miRNA الاندماجي في وقف دورة الخلية وتكوين الأوعية.

البروتوكول

1. تعداء miR-143 و miR-506

تنبيه: استخدم قفازات اللاتكس والنظارات الواقية ومعطف المختبر أثناء إجراء التجارب الموصوفة. عند الحاجة ، استخدم خزانة السلامة الحيوية مع تشغيل مروحة الخزانة ، دون سد الشعب الهوائية أو إزعاج تدفق الهواء الرقائقي. اضبط النافذة الزجاجية الواقية دائما على الارتفاع المناسب ، كما هو موضح من قبل الشركة المصنعة.

خلايا
1. البذور NSCLC A549 في T25 سم² قارورة / 6/96 صفيحة بئر في وسائط DMEM / F12K مكملة ب 10٪ FBS و 1٪ بنسلين ستربتومايسين (وسط الاستزراع) في غطاء زراعة الأنسجة واحتضانها طوال الليل عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون₂ في حاضنة زراعة ال....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات A549 خلايا سرطان الرئة ذات الخلايا غير الصغيرة ATCC ATCC CCL-185 أمبيون كاتم الصوت التحكم السلبي رقم 1 siRNA أمبيون AM4611 هاس-مير-143-3 ب miRNA مقلد ABM MCH01315 هاس-مير-506-3p miRNA مقلد ABM MCH02824 مصل الأبقار الجنينية (FBS) فيشر ساينتيك 10438026 HyClone فوسفات المحلول الملحي المخزن (PBS) فيشر ساينتيك SH30256FS DMEM 4.5 جم / لتر جلوكوز ، مع بيروفات الصوديوم ، مع L/ Glutamine VWR VWRL0100-0500 ماء مقطر خال من Invitrogen UltraPure DNase / RNase إنفيتروجين 10-977-015 أطقم الحمض النووي الريبي السريع زيمو للأبحاث R1055 الإيثانول ، المطلق (200 برهان) ، درجة البيولوجيا الجزيئية ، فيشر الكواشف الحيوية BP2818500 -80 درجة مئوية فريزر VWR VWR40086A نانودروب الترمو: العلمية نانو دروب واحد ج 96 لوحة بئر سيلتريت العلمية 50-607-511 البنسلين الستربتومايسين 10/10 أنتلانتا بيولوجيكس ب 21210 حاضنة CO2 الترمو: العلمية HERAcell 150i دناسي زيمو للأبحاث E1010 خليط المغذيات F-12K (Kaighn's Mod.) مع L-glutamine ، Corning كورنينج 45000-354 مصل الأبقار الجنينية - بريميوم أنتلانتا بيولوجيكس S11150 ماتيشين الطرد المركزي الذي يتم التحكم فيه في درجة الحرارة الترمو: العلمية ST16R تسيطر على درجة الحرارة مايكرو الطرد المركزي المايشين إيبندروف 5415 ص