الزراعة المشتركة ثنائية الأبعاد لخلايا سرطان الدم مع BMSCs: طريقة للحصول على مجموعات سكانية فرعية من خلايا سرطان الدم

الملخص

المصدر: Slone، W. L. et al. نمذجة سرطان الدم المقاوم للعلاج الكيميائي في المختبر.

يصف هذا الفيديو تقنية الزراعة المشتركة ثنائية الأبعاد طويلة المدى لخلايا سرطان الدم مع الخلايا اللحمية لنخاع العظم لدراسة تفاعلها مع البيئة المكروية لنخاع العظم. يستخدم نموذج الزراعة المشتركة ثنائي الأبعاد خلايا ابيضاض الدم الليمفاوية الحادة ونخاع العظم اللحمي أو بانيات العظم التي تؤثر على النمط الظاهري للخلايا السرطانية. ستدعم هذه الدراسة التحقيق في الآليات التي تكمن وراء بقاء نخاع العظم المدعوم لخلايا سرطان الدم أثناء التعرض للعلاج الكيميائي.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. التحضير المتقدم

1. زراعة الخلايا اللحمية لنخاع العظم (BMSC) وبانيات العظم (OB).
   1. حافظ على كل من BMSC أو OB عند 37 درجة مئوية في 6٪ ثاني أكسيد_{الكربون 2} وتنمو على ألواح زراعة الأنسجة 10 سم حتى يتم الوصول إلى التقاء 90٪.
   2. قم بتربسين خلايا BMSC أو OB وقم بتقسيم 1: 2 على ألواح جديدة مقاس 10 سم. تزرع الخلايا وفقا لهذه المعايير حتى تكون هناك حاجة للزراعة المشتركة لسرطان الدم.

2. تأسيس الثقافة المشتركة والحفاظ

عليها

1. أضف 5-20 × 10⁶ خلايا ابيضاض الدم في 10 مل من وسائط الثقافة الخاصة بالورم على 80٪ -90٪ من BMSC أو لوحة OB.
   ملاحظة: يحافظ مختبرنا على الثقافات المشتركة عند 37 درجة مئوية في 5٪ O₂ لتلخيص البيئة المكروية لنخاع العظم بشكل أفضل والتي ثبت أنها تتراوح من 1٪ إلى 7٪. ومع ذلك ، فإن الحفاظ على الثقافات المشتركة عند توتر الأكسجين هذا ليس أمرا بالغ الأهمية لإنشاء المجموعات السكانية الفرعية الثلاثة لسرطان الدم وهو وفقا لتقدير المختبر.
2. كل 4^أيام ، قم بإزالة جميع الوسائط باستثناء 1 مل (بما في ذلك خلايا اللوكيميا المعلقة) واستبدلها ب 9 مل من وسائط زراعة سرطان الدم الطازجة. عند إزالة 9 مل من الوسائط من اللوحة ، احرص على عدم إزعاج الخلايا اللحمية لنخاع العظم (BMSC) أو الطبقة الملتصقة بانيات العظم (OB).
   1. قم بإزالة الوسائط عن طريق إمالة اللوحة إلى الجانب وشفط الوسائط في زاوية اللوحة. بالإضافة إلى ذلك ، عند إضافة وسائط جديدة ، تأكد من إضافة قطرة حكيمة في زاوية اللوحة مقابل الجدار الجانبي لضمان الحد الأدنى من انقطاع الطبقة الملتصقة BMSC أو OB.
3. بعد اليوم الثاني عشر من الزراعة المشتركة ، اشطف خلايا سرطان الدم من طبقة BMSC أو OB عن طريق سحب وسائط المزرعة من الطبق لأعلى ولأسفل برفق فوق الطبق حوالي 5 إلى 10 مرات ثم جمعها في أنبوب مخروطي 15 مل. أعد البذر على لوحة BMSC أو OB متجانسة جديدة بنسبة 80٪ -90٪ كما هو موضح في الخطوة 2.1.
   ملاحظة: سيؤدي الشطف اللطيف للزراعة المشتركة كما هو موضح في الخطوة 2.3 إلى إزالة خلايا سرطان الدم العالقة والطورية الساطعة دون تعطيل طبقة أحادية BMSC أو OB. هذا يسمح فقط بنقل الخلايا السرطانية إلى لوحة الزراعة المشتركة التالية. هذه الدورة 12 يوما يمكن تكرارها عدة مرات حسب الحاجة بناء على احتياجات المستخدم.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات أطباق زراعة الخلايا 100 × 20 مم غرينر بيو ون 664160 [م] 15 مل أنابيب طرد مركزي مخروطية الشكل المنتجات الطبية في جميع أنحاء العالم 41021037 تستخدم لجمع الخلايا الإعلام الثقافي وسائل الإعلام لثقافة العظام PromoCell سي -27001 لوسائط بانيات العظم البشرية وسائط RPMI 1640 ميدياتك ، إنك. 15-040 لتحضير وسائط الورم الخلايا الملتصقة بانيات العظم البشرية PromoCell سي -12720 تم استزراع بانيات العظم البشرية وفقا لتوصيات المورد. الخلايا اللحمية للعظام البشرية WVU العينة الحيوية الأساسية تم توفير ابيضاض الدم البشري الأولي والخلايا اللحمية لنخاع العظم (BMSC) من قبل مركز ماري باب راندولف للسرطان (MBRCC) وقسم بنك الأنسجة المرضية بجامعة ويست فرجينيا خلايا اللوكيميا ريه ATCC ATCC-CRL-8286 تم استزراع خلايا REH وفقا لتوصيات المورد والوسائط الموصى بها. [د-1] DSMZ لجنة المساعدة النقدية 366 تم استزراع SD-1 وفقا لتوصيات المورد والوسائط الموصى بها.