حصاد الاكتساب الفرعي للكريات الدموية: طريقة للفصل المكاني للمجموعات السكانية الفرعية لخلايا اللوكيميا عن الزراعة المشتركة ثنائية الأبعاد

الملخص

المصدر: Slone، W.L.، et al. نمذجة سرطان الدم المقاوم للعلاج الكيميائي في المختبر. J. Vis. Exp. (2016).

يصف هذا الفيديو طريقة للفصل المكاني لثلاث مجموعات سكانية فرعية لخلايا سرطان الكريات: خلايا ابيضاض الدم العالقة التي تطفو بحرية في الوسائط ، وخلايا ابيضاض الدم الساطعة الطورية الملتصقة بسطح الطبقة الأحادية للخلية اللحمية المتوسطة ، وخلايا ابيضاض الدم الخافتة التي هاجرت تحت طبقة أحادية الخلية اللحمية الوسيطة من الزراعة المشتركة ثنائية الأبعاد.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. فصل 3 مجموعات سكانية فرعية داخل الثقافة المشتركة

1. مجموعة من الورم المعلق (S) الفرعية.
   1. قم بشفط الوسائط من لوحة الزراعة المشتركة باستخدام الماصة وأعد وضع نفس الوسائط برفق لشطف اللوحة وتجميع الوسائط التي تحتوي على خلايا ابيضاض الدم في أنبوب مخروطي سعة 15 مل. خلايا سرطان الدم التي تم جمعها هي مجموعة سكانية فرعية S.
2. مجموعة من الورم المرحلة الساطعة (PB) الفرعية.
   1. أضف 10 مل من الوسائط الطازجة مرة أخرى إلى طبق الزراعة المشتركة. اشطفها بقوة عن طريق سحب الوسائط المضافة لأعلى ولأسفل لأعلى ولأسفل 5 مرات تقريبا لإزالة خلايا ابيضاض الدم الملتصقة ولكن ليس بقوة كافية لإخراج مكون BMSC/OB الملتصق.
   2. قم بالشفيق باستخدام الماصة وجمع الوسائط في أنبوب مخروطي سعة 15 مل. الخلايا التي تم جمعها هي مجموعة سكانية PB الفرعية.
3. مجموعة من الورم الخافت (PD) الفرعية.
   1. اشطف الطبق ب 1 مل PBS لإزالة الوسائط المتبقية. قم بتربسين طبق الزراعة المشتركة مع 3 مل من التربسين وضعه في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
   2. قم بإزالة اللوحة من الحاضنة واضغط برفق على جوانب اللوحة لإخراج BMSC / OB الملتصقة.
   3. أضف 1 مل من مصل الأبقار الجنينية (FBS) والماصة لأعلى ولأسفل 3-5 مرات لتفكيك مجاميع الخلايا الكبيرة.
   4. اجمع الوسائط بالخلايا في أنبوب مخروطي سعة 15 مل. هذه الخلايا هي مجموعة سكانية فرعية لمرض باركنسون غير المنقى مع BMSC / OB أيضا.
4. أجهزة الطرد المركزي 3 مجموعات سكانية فرعية معزولة عند 400 × جم لمدة 7 دقائق. الخلايا جاهزة للتحميل على عمود G10.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 50 مل أنابيب الطرد المركزي المخروطية المنتجات الطبية في جميع أنحاء العالم 41021039 محلول حافظة ل
عينات علم الخلايا 15 مل أنابيب طرد مركزي مخروطية الشكل نوفاسيت غير أ تستخدم لجمع الخلايا مصل الأبقار الجنينية سيغما F6178 0.05٪ تربسين ميدياتك ، إنك 5229 TEC 5 25-053-CI أطباق زراعة الخلايا 100 × 20 مم غرينر بيو ون 664160 [م] الثقافة الإعلامية وسائل الإعلام لثقافة العظام PromoCell سي -27001 لوسائط بانيات العظم البشرية وسائط RPMI 1640 ميدياتك ، إنك. 15-040 لتحضير وسائط الورم خطوط الخلايا بانيات العظم البشرية PromoCell سي -12720 تم استزراع بانيات العظم البشرية وفقا لتوصيات المورد. الخلايا اللحمية للعظام البشرية WVU العينة الحيوية الأساسية تم توفير سرطان الدم البشري الأولي والخلايا اللحمية لنخاع العظم (BMSC) من قبل مركز ماري باب راندولف للسرطان (MBRCC) وقسم بنك الأنسجة المرضية بجامعة وست فرجينيا. تم إنشاء ثقافات BMSC كما هو موضح سابقا (*) خلايا اللوكيميا ريه ATCC ATCC-CRL-8286 تم استزراع خلايا REH وفقا لتوصيات المورد والوسائط الموصى بها. [د-1] DSMZ لجنة المساعدة النقدية 366 تم استزراع SD-1 وفقا لتوصيات المورد والوسائط الموصى بها.