Method Article

فرز خلايا سرطان الدم القائم على العمود G-10: طريقة لتنقية خلايا ابيضاض الدم الليمفاوية الحادة من الخلايا اللحمية لنخاع العظام

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Slone، W.L.، et al. نمذجة سرطان الدم المقاوم للعلاج الكيميائي في المختبر.

يصف هذا الفيديو فصل خلايا ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد عن الخلايا اللحمية لنخاع العظم باستخدام عشرة أعمدة ديكستران G-10 متشابكة من النوع الهلامي. تساعد هذه الطريقة على استعادة مجموعة الخلايا السرطانية التي هاجرت تحت الخلايا اللحمية لنخاع العظم الملتصقة مما يولد مجموعة خلايا سرطانية "خافتة الطور".

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. تحميل خلايا الزراعة المشتركة على عمود G10

ملاحظة: تأكد من إغلاق محبس الإيقاف تماما قبل إضافة وسائط تحتوي على خلايا إلى عمود G10. أيضا ، يجب تشغيل كل مجموعة سكانية فرعية عبر عمود G10 منفصل حتى لا يتم إدخال أي تحيز بين السكان في التحليل النهائي.

  1. باستخدام ماصة سعة 1,000 ميكرولتر، أضف 1 مل من كل مجموعة فرعية من الخلايا في وسائط مسخنة مسبقا إلى عمود G10 منفصل من حيث القطر. تأكد من بقاء الوسائط التي تحتوي على الخلايا في الأعلى أو داخل حبيبات G10. اسمح للخلايا بالتحتضن على حبيبات G10 لمدة 20 دقيقة عند RT.
    ملاحظه: يظل محبس الجوز مغلقا طوال مدة الحضانة.
< p class = "jove_title" >2. جمع خلايا سرطان الدم من عمود G10

  1. أضف 1-3 مل من الوسائط المسخنة مسبقا إلى كل عمود G10. افتح صمام الإيقاف واسمح للوسائط بالخروج ببطء من العمود بحكمة.
    ملاحظه: من الأهمية بمكان الحفاظ على معدل تدفق بطيء من العمود أو يمكن أن تغسل حبيبات G10 التي تحتوي على BMSC / OB من العمود وتلوث خلايا سرطان الدم المعزولة.
  2. استمر في إضافة وسائط مسخنة مسبقا بزيادات صغيرة (1-2 مل) إلى عمود G10 حتى يتم تشغيل إجمالي 15 إلى 20 مل عبر العمود ويتم جمعها. أغلق صمام محبس وأنبوب جمع الغطاء.
    ملاحظه: إذا شوهدت حبيبات جسيمات G10 في الجزء السفلي من أنبوب التجميع ، فقم بإزالة الوسائط برفق من الأنبوب تاركا حبيبات جسيمات G10 دون إزعاج ونقلها إلى أنبوب جديد.
    3. تقوم
  3. أجهزة الطرد المركزي بتجميع الوسائط عند 400 × جم لمدة 7 دقائق في RT. قم بإزالة المادة الطافية وإعادة تعليق حبيبات الخلية في المخزن المؤقت المناسب للتطبيق النهائي.
  4. أصبحت الخلايا الآن مجموعة نقية من خلايا سرطان الدم الخالية من تلوث BMSC أو OB وهي جاهزة للتطبيق على التطبيقات النهائية وفقا لتقدير المستخدم.
    ملاحظة: يجب أن تظل صلاحية خلايا سرطان الدم دون تغيير عند تمرير الخلايا عبر أعمدة G10.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments حبات سيفاديكس G10 سيغما جي 10120 يشار إليها في المخطوطة باسم جسيمات ديكستران من النوع 10 10 مل حقنة معقمة دينار بحريني 309604 1-طريقة محبس شركة World Precision Instruments، Inc. 14054-10 بانيات العظم البشرية PromoCell سي -12720 تم استزراع بانيات العظم البشرية وفقا لتوصيات المورد. الخلايا اللحمية للعظام البشرية WVU العينة الحيوية الأساسية تم توفير سرطان الدم البشري الأولي والخلايا اللحمية لنخاع العظم (BMSC) من قبل مركز ماري باب راندولف للسرطان (MBRCC) وقسم بنك الأنسجة المرضية بجامعة وست فرجينيا. تم إنشاء ثقافات BMSC كما هو موضح سابقا (*) 0.05٪ تربسين ميدياتك ، إنك. 25-053-CI ريه ATCC ATCC-CRL-8286 تم استزراع خلايا REH وفقا لتوصيات المورد والوسائط الموصى بها الصوف الزجاجي بيركس 3950 50 مل أنابيب الطرد المركزي المخروطية المنتجات الطبية في جميع أنحاء العالم 41021039 تستخدم كأنابيب تجميع 15 مل أنابيب طرد مركزي مخروطية الشكل المنتجات الطبية في جميع أنحاء العالم 41021037 تستخدم لجمع الخلايا مصل الأبقار الجنينية سيغما F6178 [د-1] DSMZ لجنة المساعدة النقدية 366 تم استزراع SD-1 وفقا لتوصيات المورد والوسائط الموصى بها أطباق زراعة الخلايا 100 × 20 مم غرينر بيو ون 664160 [م]

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

G 10 ColumnLeukemia Cell SortingAcute Lymphoblastic LeukemiaBone Marrow Stromal CellsCell DissociationGel Matrix SeparationStromal Cell RestrictionLeukemia Cell RecoveryColumn EquilibrationStopcock Operation

Related Articles