أخذ عينات الدم المدارية الرجعية: طريقة لعزل الخلايا أحادية النواة من الجيوب الأنفية المدارية الرجعية للفأر

الملخص

المصدر: Mopin A. et al. بروتوكول مفصل لتوصيف خط خلية الفئران C1498 ونموذج فأر سرطان الدم المرتبط به. J. Vis. Exp. (2016)

يصف الفيديو طريقة أخذ العينات لجمع الدم المحيطي من الجيوب الأنفية المدارية الرجعية للفأر ومزيد من العزل للخلايا أحادية النواة من الدم مع الطرد المركزي المتدرج الكثافة.

البروتوكول

< ص الفئة = "jove_title" >1. جمع الدم المداري الرجعي

1. قم بإجراء جمع الدم المداري الرجعي قبل القتل الرحيم مباشرة في ظروف معقمة في غطاء التدفق الصفحي وتحت مصباح التدفئة لمنع انخفاض حرارة الجسم.
2. للتخدير ، استخدم الكيتامين بمعدل 150 مجم / كجم والزيلازين بمعدل 10 مجم / كجم. تحضير محلول التخدير عن طريق تخفيف 1.5 مل من الكيتامين و 0.5 مل من الزيلازين في 18 مل من محلول PBS.
3. أدخل أنبوبا شعريا في القناة الإنسية للعين. يرتفع الدم من الجيب الحجاجي إلى الأنبوب الشعري. السيطرة على النزيف عن طريق الضغط برفق على العين باستخدام إسفنجة شاش معقمة.
   ملاحظه: يمكن جمع حجم من 100 إلى 200 ميكرولتر من الدم باستخدام هذه التقنية.
4. اجمع ....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات كيتامين 1000 (100 مجم / مل) فيرباك 3.59713ه +12 زيلازين سيداكسيلان (20 مجم / مل) سيفا محلول PBS (تركيز 1x) ثيرموفيشر العلمي 14190 محلول EDTA فائق النقاء 0.5 متر ، درجة الحموضة 8.0 ثيرموفيشر العلمي 15575 [م] حل فصل (Pancoll Mouse) بانبيوتك P04-64100 أنبوب EDTA غرينر بيو ون 454034 ماصة باستور 150 مم (أنبوب شعري) فيشربراند 1154-6963 أنابيب قياس التدفق الخلوي (أزرق) بيكمان كولتر 2523749 أنبوب الطرد المركزي الدقيق (1.5 مل) ثيرموفيشر العلمي 05-408-129 إسفنج شاش معقم أورغو 501580 30 جرام إبرة بيكتون وديكنسون 304000 حقنة 1 مل تيرومو إس إس -01 تي شاندون سيتوسبين 3 جهاز طرد خلوي ثيرموفيشر العلمي