حصاد نخاع العظام من الطرف الخلفي للفأر

الملخص

المصدر: Zhu ، Y. P. ، Padgett ، et al. تحضير نخاع العظم الكامل لتحليل القياس الخلوي الكتلي لخلايا سلالة العدلات. J. Vis. Exp. (2019).

يصف هذا الفيديو بروتوكولا مفصلا لعزل نخاع العظم الكامل الطازج من الأطراف الخلفية للفأر للتحقيق في عيوب BM الكاملة للمرضى الذين يعانون من اضطرابات الدم مثل سرطان الدم.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. حصاد نخاع عظم الفأر (BM)

1. قم بشراء الفئران C57BL / 6J من بائع تجاري. قم بإطعام النظام الغذائي القياسي لتناول القوارض ووضعه في أقفاص معزولة في منشأة خالية من مسببات الأمراض.
2. استخدم ذكور الفئران ، من 6 إلى 10 أسابيع ، للأغراض التجريبية. القتل الرحيم عن طريق استنشاق ثاني أكسيد الكربون₂ متبوعا بخلع عنق الرحم.
3. ضع الفأر على وسادة جراحية معقمة بحيث يكون جانب البطن لأعلى. تعقيم جلد البطن ومنطقة الأطراف الخلفية عن طريق رش 70٪ من الإيثانول. استخدم زوجا من المقصات الجراحية التشريح لفتح تجويف البطن.
4. قم بإزالة الجلد لكشف الأطراف الخلفية. استخدم زوجا من ملقط الضمادات ذات الطرف الحاد لتثبيت ظنبوب الفأر أسفل الكاحل مباشرة. استخدم زوجا آخر من ملقط الضمادات المنحني لتثبيت الساق أسفل ملقط الضمادة غير الحاد. كسر الساق وفضح العظم عن طريق تمزيق العضلات باستخدام ملقط الضمادة ذات الطرف الحاد.
   ملاحظه: يتم ربط الساق بشكل فضفاض بمفصل الركبة ويمكن انتقاؤه بسهولة باستخدام ملقط الضمادة ذات الطرف الحاد.
5. ضع الساق في بارد 1x PBS.
6. بعد ذلك ، حرك ملقط الضمادة المنحنية المثبتة لأسفل إلى عظم الفخذ. حرك ملقط الضمادة ذات الطرف الحاد أسفل مفصل الركبة وامسك الرضفة. خلع الرضفة عن طريق سحبها برفق. كشف عظم الفخذ عن طريق تمزيق العضلة المرتبطة بالرضفة. أمسك عظم الفخذ المكشوف بواسطة ملقط الضمادة المنحنية واقطع عظم الفخذ من أسفل العظم باستخدام مقص جراحي تشريح.
7. ضع عظم الفخذ في بارد 1x PBS.
8. قم بعمل ثقب في أنبوب الطرد المركزي الدقيق سعة 0.5 مل بإبرة 18 جراما.
9. ضع كل من الظنبوب وعظم الفخذ في نفس أنبوب الطرد المركزي الدقيق سعة 0.5 مل بحيث يكون الطرف المفتوح للعظام متجها لأسفل إلى الفتحة.
10. ضع الأنبوب سعة 0.5 مل الذي يحتوي على كل من الظنبوب وعظم الفخذ في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.7 مل.
11. قم بتدوير الأنابيب ذات الطبقات المزدوجة التي تحتوي على كل من الساق وعظم الفخذ عند 5,510 × جم لمدة 30 ثانية في جهاز الطرد المركزي الصغير.
12. تأكد من استخراج BM من العظام وحبيبات في قاع الأنبوب. ارم الأنبوب سعة 0.5 مل الذي يحتوي على العظام المقدسة. الماوس BM جاهز للخطوات التالية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات الماوس: C57BL / 6J مختبر جاكسون رقم المخزون: 000664 محلول ملحي مخزن من HyClone Phosphate جنرال إلكتريك لعلوم الحياة قطة # SH30256.01