فحص المرونة العصبية البنكرياسية في المختبر: دراسة التغيرات في الخلايا العصبية في الجهاز الهضمي المعرضة لمستخلصات أنسجة البنكرياس البشرية الصحية والسرطانية

الملخص

المصدر: Demir, I. E., et al. محاكاة المرونة العصبية للبنكرياس: فحص اللدونة العصبية المزدوجة في المختبر . J. Vis. Exp. (2014).

يوضح هذا الفيديو في المختبر اختبار المرونة العصبية لدراسة التغيرات المورفولوجية في العقد الجذرية الظهرية والخلايا العصبية للضفيرة العضعية المعوية المعرضة لمستخلصات أنسجة البنكرياس البشرية السليمة والسرطانية. يسمح لنا هذا الاختبار بدراسة نمو الخلايا العصبية والنمط المتفرع وحجم الخلايا العصبية.

البروتوكول

1. عزل الخلايا العصبية

بمجرد الانتهاء من جمع المستخلص / المواد الطافية ، استمر في عزل الخلايا العصبية.

1. بالنسبة للخلايا العصبية DRG ، اجمع DRG من عنق الرحم إلى أسفل الظهر للفئران حديثي الولادة بين يوم ما بعد الولادة (P) 2-12 بعد قطع الرأس والتشريح المجهري الفراغي ل DRG (الشكل 1 أ) . من أجل الحصول على ما يكفي من الخلايا العصبية DRG للوحة 24 بئرا ، اجمع كل DRG من عنق الرحم إلى أسفل الظهر لفأر حديث الولادة (أي ما يعادل 52 DRG) لكل لوحة.
2. قم بقطع الإسقاطات الطرفية (العصبية) والمركزية (الجذور) ل DRG عن طريق المقص المجهري. يؤدي ترك الإسقاطات في مكانها إلى إعاقة التجربة ويزيد من خطر تلوث ا....

النتائج

الشكل 1. البروتوكول التخطيطي لاختبار في المختبر مقايسة المرونة العصبية. يستخدم الفحص الحالي العقد الجذرية الظهرية للفئران حديثي الولادة (DRG) والخلايا العصبية الضفيرة العضلية المعوية (MP) لدراسة تأثير مستخلصات أنسجة البنكرياس أو المواد الطافية الخلوية على مورفولوجيا الخلايا العصبية والدبقية. يتم جمع DRG بعد استئصال الصفيحة الفقرية الأمامية والطبقة العضلية المصلية المحتوي.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
بولي دي ليسين هيدروبروميد	سيجما ألدريتش	P1149
أورنيثين / لامينين	سيجما ألدريتش	P2533 / L4544
13 مم Coverslips	Merck		للاستخدام في 24 بئر
لوحة Dismembranator S	Sartorius
الأجسام المضادة للبيتا III توبولين	Millipore	MAB1637	تركيز 1: 200
الأجسام المضادة ل GFAP	DAKO	M0761	1: 400 تركيز
RIPA العازلة + مثبط			أي مورد
الوسيط العصبي	العصبي Gibco / علوم الحياة	21103-049
B-27 الملحق	Gibco / علوم الحياة	17504044	من المعروف أن جودة B-27 تعتمد على رقم الدفعة
Gentamicin / Metronidazole			أي مورد
الحد الأدنى من الوسط الأساسي	Gibco / علوم الحياة	31095-029
هانك محلول الملح المتوازن (HBSS)	جيبكو / علوم الحياة	24020133	يحسن نشاط الكولاجيناز عند احتوائه على Ca / Mg
كولاجيناز النوع الثاني	ورثينجتون الكيمياء الحيوية	CLS-2	الحصول على الكثير بنشاط لا يقل عن 200 وحدة / ملغ
Trypsin-EDTA 0.25٪	Gibco / علوم	الحياة 25200056
4٪ بارافورمالدهايد			أي مورد
AnalySIS docu برنامج	أوليمبوس

البروتياز