التحليل الجرثومي التعبير الجيني عن طريق ميكروأرس]

Protocol

عكس رد الفعل الناسخ

بدوره كتلة التدفئة إلى 70-80 درجة مئوية و 42 درجة مئوية. ويمكن أيضا أن تستخدم حمامات المياه في هذه الخطوة. إذا باستخدام كتل التدفئة ، ووضع بعض الماء بحيث الحرارة موحدة.

1. رد فعل فتيلة
   1. يستغرق 3 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي
   2. ضبط مستوى الصوت إلى 13 ميكرولتر مع المياه مجانا ريبونوكلياز

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
AA-dUTP		سيجما ألدريتش	A0410	5- (3-أمينواليل) -2 ' ديوكسي يوريدين -5'-ثلاثي الفوسفات
dNTP		Amersham	27-2035-01	100 ملي مولار dNTP مجموعة PCR درجة
	عشوائية Hexamer	Amersham	27-2166-01	3 مجم / مل
SuperScript III RT		Invitrogen	80800444	200U/μ ؛ L
CyDye &# 8482 ؛		Amersham	RPN5661	حزمة صبغة تفاعلية
العلامات QIAquick		Qiagen	28104	طقم تنقية PCR
1 M K2HPO4
1 M KH2PO4
1 M KPO4	Buffer			لعمل مخزن فوسفات 1M (KPO4 ، درجة الحموضة 8.5-8.7) يجمع: 9.5 مل 1M K2HPO4 و 0.5 مل 1M KH2PO4
غسيل الفوسفات	العازلة			ل 100 مل مخزن غسيل الفوسفات (5 ملي KPO4 ، درجة الحموضة 8.0 ، 80٪ EtOH) مزيج: 0.5 مل 1 م KPO4 درجة الحموضة 8.5 + 15.25 مل ماء مللي كيو + 84.25 مل 95٪ إيثانول. سيكون المخزن المؤقت للغسيل غائما قليلا.** هام: يجب تحضير مخزن غسيل الفوسفات يوميا.
عازلة شطف الفوسفات	المخزن المؤقت			التخفيف 1 M KPO4 ، درجة الحموضة 8.5 إلى 4 ملي مولار بالماء
المعقم كربونات الصوديوم العازلة				(Na2CO3): 0.5 م ، درجة الحموضة 9.0. قم بإذابة 4.2 جم من NaHCO3 في 80 مل من الماء المعقم واضبط الرقم الهيدروجيني إلى 9.0 مع 10 نيوتن هيدروكسيد الصوديوم ؛ يصل الحجم إلى 100 مل بالماء المعقم. لعمل محلول 50 ملي مولار لتفاعل اقتران الصبغة ، قم بتخفيف 1:10 بالماء. ملاحظة: يغير المخزن المؤقت للكربونات التكوين بمرور الوقت ؛ اجعلها طازجة كل أسبوعين إلى شهر.