مزمنة التصوير ماوس القشرة البصرية باستخدام إعداد ضعفت - الجمجمة

Summary

في هذا الفيديو والمواد التكميلية ، وتبين لنا بروتوكول للالمزمنة في الجسم الحي تصوير الدماغ سليمة باستخدام إعداد ضعفت - الجمجمة.

Abstract

المجراة في التصوير باستخدام اثنين من الفوتون المجهري المسح الضوئي ليزر (2PLSM) يسمح لدراسة الخلايا الحية وعمليات الخلايا العصبية في الدماغ سليمة. التقنية المقدمة هنا يسمح التصوير من نفس المنطقة من الدماغ في الوقت عدة نقاط (التصوير المزمنة) مع قرار السماح للالمجهرية تتبع في العمود الفقري شجيري التي هي هياكل الصغيرة التي تمثل الغالبية العظمى من المواقع مثير بعد المشبكي في الجهاز العصبي المركزي. القدرة على حل بوضوح الهياكل القشرية غرامة على نقاط عدة مرات العديد من المزايا ، وتحديدا في دراسة الدماغ في اللدونة التي تغيرات شكلية في نقاط الاشتباك العصبي ، وإعادة تشكيل الدوائر قد يساعد في تفسير الآليات الكامنة. في هذا الفيديو والمواد التكميلية ، وتبين لنا بروتوكول للمزمنة في الجسم الحي من تصوير الدماغ سليمة باستخدام إعداد ضعفت - الجمجمة. إعداد ضعفت - الجمجمة هو نهج مينيملي ، الذي يتجنب احتمال حدوث تلف و / أو قشرة الجافية ، وبالتالي تقليل ظهور رد فعل للالتهابات. عندما يتم تنفيذ هذا البروتوكول بشكل صحيح ، فمن الممكن لرصد التغيرات في الخصائص بوضوح شجيري العمود الفقري في الدماغ سليمة على مدى فترة طويلة من الزمن.

Protocol

1. لتصور الخلايا العصبية في الدماغ سليمة باستخدام اثنين من الفوتون المجهري ، والتحضير حيث وصفت الخلايا العصبية مع علامات الفلورسنت المستخدمة. في التجارب المقدمة هنا نستخدم الماوس المعدلة وراثيا GFP - M الذي تسميات خط طبقة الخلايا الهرمية 5 ^1. طبقة 5 خلايا هرمية المشروع شجيري العمليات في الطبقات السطحية ، والسماح للتصور من التشعبات والعمود الفقري شجيري يصل إلى عمق 300 ميكرومتر دون مستوى الحنون. نهج بديل يتمثل في استخدام الخلايا تسمية علامات الفيروسية (انظر لوري وآخرون ، التي قدمت إلى إن الرب).
2. تعقيم مساحة العمل باستخدام الايثانول 70 ٪ وأدو....

Discussion

التصوير المزمنة باستخدام اثنين من الفوتون المجهري أصبحت تقنية شعبية متزايدة لدراسة التغيرات المورفولوجية أثار خلال اللدونة ^2-5. هنا علينا أن نظهر استعدادا ضعفت - الجمجمة لمتابعة العمود الفقري شجيري التي تم تحديدها في مخ الفأر سليمة في أيام التصوير المختلفة. في هذا البروتوكول ، يتم ترك الجمجمة سليمة ، مما تسبب في أضرار طفيفة في القشرة ويؤدي إلى مستويات منخفضة جدا من neuroinflammation الذي قد يغير وظيفة المخ ^6. وهذا يسمح ليمكن تصوير الحيوان فورا بعد الجراحة أول.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
سترات		في المنزل		كوكتيل الفنتانيل: كوكتيل مخدر. جرعة IP: 0.0125 مل / جم كوكتيل كوكتيل نهائي: 0.05 مجم / كجم
ميديتوميندين هيدروكلوريد		في المنزل		كوكتيل فنتانيل: كوكتيل مخدر. جرعة IP: 0.0125 مل / جم كوكتيل كوكتيل نهائي: 0.05 مجم / كجم
كوكتيل ميدازولام هيدروكلورايد في		المنزل		: كوكتيل مخدر. جرعة IP: 0.0125 مل / ز كوكتيل نهائي: 0.05 مجم / كجم
2،2،2-tribrom &# 8211 ؛				أفيرتين: مخدر. جرعة IP: 0.0075 سم مكعب / ز كوكتيل الكوكتيل النهائي: 1٪
2-methyl-2-butanol (التركيز النهائي: 0.775٪) كوكتيل				أفيرتين: مخدر. جرعة IP: 0.0075 سم مكعب / g كوكتيل نهائي: .775٪
TC-1000 Temp. نظام التحكم للفئران		CWE، Inc.	TC-1000 درجة	حرارة جسم
Toberadex		مرهم العين	المنزلي
10٪ كلوريد		الحديديك شركة ريكا للكيماويات	3120-32	تحضير الجمجمة الرقيقة
شفرة		السمور	S-6400	تحضير الجمجمة الرقيقة
سيانواكريليت 404،401		لوكتايت	P / N 46551	تحضير الجمجمة الرقيقة
Cyanoacrylate 401		Loctite	P / N 40140	إعداد الجمجمة الرقيقة
Zip Kicker Glue Accelerator		Technology Pacer	PT-29	إعداد الجمجمة الرقيقة
نتوءات فولاذية دقيقة 0.7 مم قطر		أدوات العلوم الدقيقة	19008-07	إعداد الجمجمة الرقيقة
صندوق التحكم في عزم الدوران الصغير وقبضة	Tech2000	برودكتس، إنك.	TECH2000ON / OFF	إعداد الجمجمة الرقيقة
# 6-0 (0.7 متري) خياطة		Ethicon Inc.	K8894H	المستدق C-1
، 10 سم ، عرض الطرف 0.5 مم ،	أدوات جراحية	أدوات العلوم الدقيقة	11152-10
مقص بون ناعم للغاية ، 8.5 سم ، طرف مستقيم ، أحدث	الجراحية	أدوات العلوم الدقيقة	14084-08
ملقط نمط قياسي ، مستقيم ، 2.5 مم × 1.35 مم ، أدوات	جراحية	12 سم أدوات العلوم الدقيقة	11000-12