كان الهدف من هذه الدراسة لتقليد الأصلي three العمارة الطبقات من جدران الشرايين. لإنجاز هذا ، كان يعمل مع electrospinning استخدام فوهة (المدخلات والمخرجات) 3-1 ، ومزيج من polycaprolactone ، الإيلاستين والكولاجين.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
ثلاثي الطبقات Electrospinning لتقليد العمارة الشرياني الأصلية باستخدام Polycaprolactone ، الإيلاستين ، والكولاجين : دراسة أولية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
طوال الشريان الأصلي ، والكولاجين والإيلاستين تلعب دورا هاما ، وتوفير العمود الفقري الميكانيكية ، ومنع تمزق السفينة ، وتعزيز الانتعاش تحت التشوهات نابض. كان الهدف من هذه الدراسة لتقليد بنية الشريان الأم عن طريق افتعال قناة electrospun متعدد الطبقات يتألف من بولي (caprolactone) (PCL) مع إضافة الإيلاستين والكولاجين مع مزيج من 45-45-10 ، 55-35 -- 10 ، و65-25-10 PCL - ELAS - COL لإثبات الخواص الميكانيكية للأنسجة الشرايين الإرشادية الأصلية ، في حين تبقى مواتية لتجديد الأنسجة. وقد تم تحليل ترقيع كله والطبقات الفردية باستخدام اختبار الشد أحادية المحور ، والامتثال دينامية ، والاحتفاظ خياطة ، وقوة الانفجار. وكشفت النتائج أن الامتثال تغييرات على طبقة وسطى / الإنسي تغيير السلوك الكسب غير المشروع الشامل مع كل القيم الامتثال الكسب غير المشروع تتراوح بين 0،8-2،8 ٪ / 100 ملم زئبقي ، بينما أظهرت النتائج أحادي المحور مجموعة معامل متوسط 2،0-11،8 ميغاباسكال. كل من معامل والامتثال البيانات المعروضة قيم داخل نطاق الشريان الأصلي. وقد نفذ النمذجة الرياضية لاظهار كيف يمكن للتغييرات في طبقة تؤثر على صلابة الشاملة الإجهاد الجدار كفافي ، ونتيجة لتصميم المساعدات لتحقيق أفضل مزيج الميكانيكية للمواد. عموما ، أشارت النتائج التي يمكن أن تكون مصممة لتقليد طعم هيكل ثلاثي الطبقات عن طريق تغيير خصائص الطبقة.
البروتوكول
- قبل electrospinning ، والكولاجين ، من أدمة البقري 6 أشهر ، يجب أن يكون استخراجه باستخدام حمض الخليك عملية بناء. ثم وهذا هو تنقية الكولاجين المستخرجة من خلال سلسلة لاحقة من انحلال ، الامطار ، وغسيل الكلى. بمجرد مجفد الكولاجين ، ويمكن أن تبدأ عملية electrospinning.
- ثلاث مواد هي حشدت : polycaprolactone (PCL) ، الإيلاستين (ELAS) ، والكولاجين (العقيد). وسيتم حل هذه المواد بشكل منفصل في hexafluoro 1،1،1،3،3،3 - 2 - بروبانول (HFP ، جزر تركس وكايكوس الأمريكية) بتركيزات من 100 ملغ / مل ، و 200 ملغم / لتر ، و 70 ملغم / لتر ، على التوالي.
- يتم مزجها في خمس مواد مختلفة في قوارير التلألؤ النسب الحجمية من 98-2-0 PCL - ELAS - COL (البطانية) ، 45-45-10 ، 55-35-10 ، 65-25-10 وPCL - COL - ELAS (الإعلام) ، و70-0-30 PCL - ELAS - COL (البرانية).
- لاختبار الشد والفرد أحادي المحور اختبار الامتثال طبقة ، وكان كل من المواد electrospun فردي ، بينما electrospun متعددة الطبقات ترقيع الأوعية الدموية للانفجار ، والاحتفاظ خياطة ، واختبار الامتثال من تكوين 3 الى 1. أحادي المحور السقالات اختبار الشد كانت مسطحة ومستطيلة (2.5 سم X 10.2 سم طول × 0.3 سم) منذ مماسك بقطر 2 electrospin المستخدمة لطبقات الفردية والطعوم متعددة الطبقات كانت صغيرة جدا لكمة عينات الاختبار.
- لكلا electrospinning الفردية ومتعددة الطبقات ، وتحميل حلول البوليمر البلاستيكية الى حقنة 3 مل بيكتون ديكنسون بإبرة حادة - 18 عيار غيض ، ووضعها على مضخة الحقن في مجموعة معدل المستوصف. وحددت معدلات الفردية electrospinning إلى 4 مل / ساعة ، بينما تباينت معدلات electrospinning متعددة الطبقات بالاعتماد على التحول والطبقة. وكانت معدلات التدفق وحجم مثل : البطانية وكان electrospun بمعدل 4 مل / ساعة وبلغ حجم التداول 0.5 مل تليها مرحلة انتقالية تجمع بين كل من المحاقن باطنة وسطي ل0.2 مل في 2 مل / ساعة لكل منهما. ثم اغلقت المحقنة باطنة قبالة وسمح للطبقة وسطي لزيادة ونقصان عن 0.6 مل في 4 مل / ساعة تليها فترة انتقالية بين وسائل الإعلام والبرانية عن 0.2 مل من محلول البوليمر في كل مل / ساعة 2. أخيرا ، توقفت وسائل الإعلام وسمح للالبرانية تدور عن 0.4 مل في 4 مل / ساعة.
- وقد عبر ربط جميع العينات في EDC 50 ملم لمدة 18 ساعة قبل إجراء أي اختبار 1.
- أجري اختبار أحادي المحور الشد على ست عينات من ورقة electrospun one رطب في برنامج تلفزيوني لمدة 24 ساعة. "الكلب العظم" واللكم على شكل عينات من الحصير electrospun واختبارها على نظام Bionix MTS اختبار 200 مع 100 خلية تحميل N ونسبة 10.0 ملم تمديد / دقيقة. حسبت التوتر ذروته ، ومعامل ، والضغط على كسر به TestWorks الإصدار 4.
- وقد أجريت اختبارات الاحتفاظ الدرز على ست عينات 2 مم قطر داخلى أنبوبي من ستة ترقيع electrospun مختلفة ، غارقة في برنامج تلفزيوني لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية ، على نظام Bionix MTS اختبار 200 مع 50 خلية تحميل N (MTS نظم كورب) و معدل تمديد 150.0 مم / دقيقة وفقا للإجراءات مباشرة عبر وصفها في المعهد الأمريكي للمعايير الوطنية 2. وضعت 5-0 التجارية PDS حيدة البنفسج الثاني خياطة 2 مم من نهاية العينة ومددت حتى خياطة انسحبت من خلال الكسب غير المشروع. وقد سجلت الذروة في استخدام القوة ، غرام TestWorks الإصدار 4.
- أجري اختبار قوة الاندفاع في ست عينات من ستة electrospun الطعوم المختلفة. وكان انفجار الأنابيب ، 2-3 سم في الطول ، رطب في برنامج تلفزيوني ، تركيب أكثر من 1.5 مم الحلمات التي تعلق على الجهاز ، والمضمون مع خياطة الحرير 2-0. وقدم الهواء داخل النظام ، وزيادة الضغط بمعدل 5 ملم زئبقي / ثانية حتى تنفجر أنابيب 2. وأفادت النتائج على النحو مم زئبقي للضغط في الأنابيب التي تمزق.
- وتم تحديد ديناميكية الامتثال لمدة ستة ترقيع 2 مم قطر داخلى أنبوبي المتخذة من ستة ترقيع electrospun مختلفة بطول 3 سم تحت ظروف تحاكي الفسيولوجية. وكانت كل من طبقات electrospun الفردية ومتعددة الطبقات يبني أنبوبي واختبارها وفقا للشروط نفسها. تم اختبار عينات الأنسجة في الهندسة الميكانيكية الذكي عبر تفاعلات الاحيائية (البنود) حفز تطوير تكنولوجيات نمو الأنسجة مليئة PBS في 37 درجة مئوية. قدمت مفاعل حيوي ضغط دوري 1Hz التغيير من الداخل والكسب غير المشروع ، حيث جرى التحقيق في ثلاثة مستويات مختلفة من الضغط 90/50 ، 120/80 ، 150/110 مم زئبقي وضغط الدم الانقباضي / الانبساطي 2 ، 3.
ممثل النتائج
عندما يتم تنفيذ البروتوكولات electrospinning على نحو سليم ، ينبغي أن يكون الناتج النهائي لينة ، وأنبوب سلس مع عدم وجود العلامات الأولية للdelamination بين الطبقات. عندما يتم إجراء اختبارات الشد أحادية المحور ، واختبارات قوة الاندفاع ، واختبارات الأداء خياطة ، واختبارات الامتثال ، وينبغي أن النتائج تشير إلى أنه يتم زيادة صلابة طبقة وسطي ، مع انخفاض كميات الإيلاستين ، والخصائص المرتبطة بها يجب أن يبرهن على وجود ميكانيكية أشد الأنبوب.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الجزء الأكثر أهمية من هذه الدراسة هو عملية electrospinning. عند استخدام 3-1 المدخلات والمخرجات الفوهة والظليل وفقدان تهمة قد تحدث. إذا كان هذا لا يحدث ، فإن الجهد المرتبطة البوليمر الذي يسبب انخفاض الغزل الملحومة ، "الرطب" ألياف وخلق delamination بين كل من ثلاث طبقات. لذلك ، إمكانات الكهربائية متسقة ضرورية للحصول على المثالية متعددة الطبقات الأنبوب.
تطابق الامتثال هي واحدة من الأسباب الرئيسية للإطباق ال...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
العديد من الكتاب والولايات المتحدة وبراءات الاختراع الدولية المعلقة بشأن التكنولوجيا المقدمة في هذه المخطوطة ، وقد تم الترخيص لهذه التكنولوجيا لOrganogenesis ، وشركة
شكر وتقدير
نود أن نشكر جمعية القلب الأميركية في منتصف المحيط الأطلسي انضم (0555407U ، GLB) للحصول على التمويل.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| بولي كابرولاكتون | Sigma-Aldrich | ||
| إيلاستين | Elastin Products Company | ||
| كولاجين | |||
| حمض الأسيتيك | Fisher Scientific | ||
| كلوريد الصوديوم | Fisher Scientific | ||
| TRIS | Fisher Scientific | ||
| جهاز طرد مركزي 6 L Avanti J-HC Centrifuge | Beckman Coulter Inc. | ||
| 1,1,1,3,3,3 hexafluoro-2-propanol | TCI America | ||
| سرنجة 3 ml Becton Dickinson | |||
| وحدة تغذية طاقة مثبتة على حامل CZE1000R Rack Mount Power Supply | Spellman | ||
| مضخة سرنجة ذات ضغط عالٍ | Cole-Parmer | ||
| 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimide | Pierce, Thermo Scientific | ||
| 70 % إيثانول | Sigma-Aldrich | ||
| برنامج ImageTool 3.0 | Shareware provided by UTHSCSA | ||
| مجهر إلكتروني ماسح | Carl Zeiss, Inc. | ||
| نظام اختبار MTS Bionix 200 | MTS Systems Corp. | ||
| برنامج TestWorks الإصدار 4 | |||
| مفاعل حيوي لهندسة الأنسجة الذكية عبر التحفيز الميكانيكي (ITEMS) | Tissue Growth Technologies |
المراجع
- McClure, M. J., Sell, S. A., Barnes, C. P., Bowen, W. C., Bowlin, G. L. Cross-linking Electrospun Polydioxanone-Soluble Elastin Blends: Material Characterization. Journal of Engineered Fibers and Fabrics. 3, 1-10 (2008).
- Cardiovascular implants - Vascular graft protheses. VP20, AAMI Press. Bethesda, MD. (1994).
- McClure, M. J., Sell, S. A., Simpson, D. G., Walpoth, B. H., Bowlin, G. L. A three-layered electrospun matrix to mimic native arterial architecture using polycaprolactone, elastin, and collagen: A preliminary study. Acta Biomater. , (2010).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
