يرقات ذبابة الفاكهة السوداء البطن توفير نظام النموذج المثالي للتحقيق في آليات النقل داخل محواري الأعصاب قطعي اليرقات. باستخدام هذا الإجراء ، يمكن مقارنة 3 اليرقات طور مرحلي الثالثة تحمل طفرات مختلفة ليرقات النوع البري.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تصور الأعصاب القطاعي اليرقات في 3 الثالثة طور مرحلي ذبابة الفاكهة التحضيرات اليرقات
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ذبابة الفاكهة السوداء البطن في الظهور كنظام نموذج قوية لدراسة تطوير وظيفة من وظائف الجهاز العصبي ، وخصوصا بسبب الوراثة لها مريحة وتسلسل الجينوم الكامل. بالإضافة إلى ذلك ، فإن النظام العصبي اليرقات هو نظام نموذج مثالي لدراسة آليات النقل محواري كما تحتوي على أعصاب اليرقات قطعي حزم من المحاور مع الهيئات التي تقع داخل الخلية على المخ والأعصاب الطرفية التي تنتهي على طول الجسم. نحن هنا وصف الإجراء لرؤية البروتينات حويصلة متشابك داخل الأعصاب قطعي اليرقات. إذا فعلت بشكل صحيح ، وجميع مكونات الجهاز العصبي ، جنبا إلى جنب مع أنسجة المرتبطة بها مثل العضلات وNMJs ، ما زالت سليمة ، سليمة ، وجاهزة للتصور. يتم تشريح 3 اليرقات طور مرحلي الثالثة تحمل طفرات مختلفة ، الثابتة ، وحضنت مع الأضداد حويصلة متشابك ، وتصور بالمقارنة مع نوع اليرقات البرية. ويمكن تكييف هذا الإجراء لعدة أجسام مختلفة متشابك أو العصبية والتغيرات في توزيع مجموعة متنوعة من البروتينات يمكن ملاحظتها بسهولة داخل الأعصاب قطعي اليرقات.
البروتوكول
1. إعداد الكواشف
- إعداد 1X الاحتياطي تشريح باستخدام كلوريد الصوديوم 128 ملم ، 4mM CaCl 2 ، 4mM MgCl 2 ، 2 مم بوكل ، HEPES 5mM والسكروز 36mM. PH 7.2 الحل لتعقيم وتصفية.
- إعداد مثبت باستخدام 01:01 التخفيف من الفورمالديهايد بنسبة 16 ٪ والاحتياطي 1X تشريح.
- إعداد 1X PBT باستخدام الفوسفات 1X التخزين المؤقت المالحة (PBS) في PH من 7.2 و تريتون X - 100 في نسبة 1:100.
- تحضير 5 ٪ مصل....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
ويرقات ذبابة الفاكهة الأعصاب قطعي وجود نظام قوي لدراسة آليات النقل في محواري. إذا أجري تشريح الثالثة 3 اليرقات طور مرحلي بشكل صحيح ، يمكن النظر في جميع مكونات الجهاز العصبي المركزي ، الجهاز العصبي المحيطي ، والأنسجة المرتبطة بها ، مثل العضلات وNMJs ، داخل يرقة واحدة. وقد تكيفت نحن من هذا البروتوكول واحدة نشرتها هيرد وساكستون (1996). ويمكن أيضا هذا البروتوكول يمكن تكييفها لاختبار الأجسام المضادة الخلايا العصبية الأخرى ، ولكن ينبغي أن يتم الاستفادة المثلى من الأج.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
ويؤيد الأمين العام بأموال من جامعة ولاية نيويورك في بوفالو من مؤسسة جون وOishei ر.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| ملقط Dumont #5 | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| دبابيس Minutien، فولاذ مقاوم للصدأ | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| مقص Mcpherson-Vannas بشفرة مستقيمة 8cm | Fisher Scientific | 50822236 | |
| Vectashield، وسط تثبيت | Vector Laboratories | H-1000 | |
| Sylgard 184 مطاط السيليكون المرن | Dow Corning | 4026148 | |
| فورمالديهايد، 16% | Electron Microscopy Sciences | 15710 | |
| dCSP3 | Developmental Studies Hybridoma Bank | ||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 |
المراجع
- Gunawardena, S., Goldstein, L. Disruption of Axonal Transport and Neuronal Viability by Amyoid Precursor Protein Mutations in Drosophila. Neuron. 32 (2), 389-401 (2001).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
