Method Article

Intravital المجهري للماوس دوران الأوعية الدقيقة الدماغ باستخدام نافذة مغلقة القحف

DOI:

10.3791/2184

⸱

November 18th, 2010

 , 
1Bioengineering, University of California, San Diego, 2La Jolla Bioengineering Institute

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Intravital المجهري لمتابعة الأحداث الزمانية والمكانية الدورة الدموية والتهابات في دوران الأوعية الدقيقة حنوني.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد صمم هذا النموذج التجريبي لتقييم دوران الأوعية الدقيقة الماوس حنوني خلال الدورة الدموية ، الحادة والمزمنة والفسيولوجية والمرضية في جسم المريض ، وظروف التهابات والأيض ، وذلك باستخدام المجهر مضان في الجسم الحي. وضعت نافذة مغلقة في الجمجمة خلال القشرة الجداري القذالي الأيسر من الفئران. يتم تسجيل دوران الأوعية الدقيقة المحلية في الوقت الحقيقي من خلال النافذة باستخدام برنامج التحصين الموسع وإنارة مضان ، وقياسات للأقطار السفن وخلايا الدم الحمراء (RBC) يتم تنفيذ سرعات. ويتم قياس سرعة RBC في الوقت الحقيقي باستخدام عبر ارتباط و / أو كرات الدم الحمراء التي تحمل علامات الفلورسنت. تصنع الكريات البيضاء والصفائح الدموية الانضمام للسفن حنوني وتقييم نضح وتسرب الأوعية الدموية مع مساعدة من علامات مضان المسمى مثل الأجسام المضادة الزلال ، ومعاداة FITC TxR CD45. يمكن أن يكون دوران الأوعية الدقيقة مرارا الفيديو المسجلة على مدى عدة أيام. استخدمنا لأول مرة في الدماغ نافذة المجهري intravital قريبة من دراسة دوران الأوعية الدقيقة حنوني لمتابعة التغيرات الدينامية خلال عدوى المتصورة أنكا berghei في الفئران وتبين أن يرتبط التعبير عن CM مع الاختلالات microcirculatory يتميز تضيق الأوعية ، وانخفاض عميقة في الدم تدفق الأوعية الدموية ، والانهيار في نهاية المطاف.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. حج القحف

A حج القحف في 8 إلى 10 أسبوعا من العمر الفئران الاحتياجات التي يتعين القيام بها في وقت مبكر ك 1 الموصوفة سابقا ، إلا أنه لم يتم وضع شريط التيتانيوم في رأس الحيوان. نافذة المزمن هو فحص الجمجمة التحضير مستقر يسمح للدوران الأوعية الدقيقة حنوني أشهر حتى بعد أن زرع. عادة ، نحن لدينا إجراء دراسات 2-3 أسابيع بعد الزرع النافذة في الجمجمة.

2. Intravital المجهري

  1. ليومين أو ثلاثة أسابيع بعد حج ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأسلوب المجهري intravital الموصوفة هنا يوفر أداة فريدة وقوية لرصد تفصيلي للدوران الأوعية الدقيقة حنوني في الماوس. أنها تسمح استفراد فرد الشرايين والأوردة وقياس التغيرات في عدد من المعلمات مثل أقطار السفينة ، RBC السرعات ، وتدفق الدم ، والالتزام والمتداول من الكريات البيضاء والصفائح الدموية في الدم والعناصر الأخرى ، وتسرب الأوعية الدموية ، ودرجة الحموضة والأنسجة والعديد من المحتمل PO2 أخرى التطبيقات. يمكن أن تكون استجابة الأوعية الدموية فيفو تقييم فور التدخلات مث.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل عن طريق منح R01 - HL87290 ، R01 - S1 HL87290 وR01 - AI082610 من المعاهد الوطنية للصحة لLJMC.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
شركة IsofluraneBaxter Internationl Inc.FDG9623
صبغة الكربوسيانين Dil المجسات الجزيئية ، Life TechnologiesD306
Albumin-FITCSigma-AldrichA9771
Anti-CD45-TxR AbInvitrogenMCD4517
P. berghei< / em> ANKA-GFPMR4MRA-865

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A craniotomy surgery procedure for chronic brain imaging. J. Vis. Exp. (15), (2008).
  2. Intaglietta, M., Tompkins, W. R. Microvascular measurements by video image shearing and splitting. Microvasc. Res. 5, 309-312 (1973).
  3. Briceno, J. C., Cabr....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Intravital MicroscopyMouse Brain MicrocirculationClosed Cranial WindowPial VesselsRed Blood Cell VelocityLeukocyte AdhesionFluorescent LabelingCerebral MalariaPlasmodium BergheiBlood Flow Measurement

Related Articles