Method Article

تصور الوسطيات المتماثل للأشعة فوق البنفسجية يتسبب في E. القولونية ثنائي الأبعاد باستخدام Agarose جل التحليل

DOI:

10.3791/2220

⸱

December 21st, 2010

 ,  , 
1Department of Biology, Portland State University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نقدم الإجراء الذي يمكن أن تستخدم ثنائي الأبعاد agarose هلام تحليل لتحديد هيكل وسيطة النسخ التالية التي تحدث للاشعة فوق البنفسجية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

النسخ غير دقيقة في وجود الحمض النووي من التلف هي المسؤولة عن غالبية إعادة ترتيب الخلوية والطفرات التي لوحظت في جميع أنواع الخلايا ، ويعتقد على نطاق واسع لتكون مرتبطة مباشرة مع تطور السرطان لدى البشر. الحمض النووي من التلف ، مثل تلك التي تسببها أشعة فوق البنفسجية ، ويضعف بشدة قدرة تكرار لتكرار قالب الجينومية بدقة. وقد تم تحديد عدد من المنتجات التي يتم الجينات المطلوبة عند تكرار اللقاءات آفات الحمض النووي في القالب. ومع ذلك ، فقد كان التحدي المتبقية لتحديد كيفية معالجة هذه الآفات البروتينات أثناء النسخ المتماثل

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. النمو والإشعاع فوق البنفسجي.

  1. 200μl ثقافة جديدة بين عشية وضحاها التي تحتوي على البلازميد pBR322 نمت في المتوسط ​​ديفيس 1 تستكمل مع السكر بنسبة 0.4 ٪ ، 0.2 ٪ الأحماض casamino ، و 10 ميكروغرام / مل الثايمين (DGCthy متوسطة) و 100 ميكروغرام / مل الأمبيسيلين هو المحبب. هو معلق ثم بيليه خلية في المتوسط ​​DGCthy 200μl تفتقر أمبيسلين واستخدامها لتلقيح 20 مل من DGCthy المتوسطة.
  2. تزرع الثقافات دون انتقاء الأمبيسيلين في حاضنة تهتز عند 37 درجة مئوية إلى 600 من OD 0.5 (~ 5 × 10 <....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتظهر النتائج التي تم الحصول عليها من خلايا نموذجية النوع البري في حضور وغياب الأشعة فوق البنفسجية التي يسببها تلف في الشكل 1. في غياب أي ضرر ، ويمكن العثور ~ 1 ٪ من الحمض النووي للبلازميد الإجمالي في قوس Y عندما الخلايا تنمو بسرعة في مرحلة الأسي. بعد التشعيع ، لوحظ زيادة عابرة في شكل جزيئات Y كما منعت تكرار الشوك تتراكم في المواقع المتضررة. وسيطة النسخ X - شكل عابر أيضا تتراكم وتستمر حتى الوقت الذي يرتبط عندما يتم إصلاح الآفات.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويدعم العمل في المختبر لدينا من قبل جائزة التوظيف MCB0551798 من المؤسسة الوطنية للعلوم ومنطقة منحة R15GM86839 من NIGMS - NIH.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
مثال على التحليل الجنوبي للهلام 2D الذي تم فحصهGE HealthcareG15T8Yellow Lighting
15 & mu ؛ مصباح مبيد للجراثيم واطسيلفانياF20T12 / GOمصباح الأشعة فوق البنفسجية
Blak-Ray Uv Intensity Meter 254nmDaiggerEF28195TUVC مقياس ضوئي
0.025 & m أقراص المسامWhatman ، GE HealthcareVSWP04700أقراص غسيل الكلى العائمة
PvuIIFermentasER0632تقييد نوكلياز
داخلي مجموعة أدوات الترجمةRoche Group976776لصنع مسبار يحمل علامة 32P
نشافWhatman ، GE Healthcare3030-704لغشاء
النايلونHealthcareRPN203Sللنقل الجنوبي
ورق الجنوبي GE

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Davis, B. D. The Isolation of Biochemically Deficient Mutants of Bacteria by Means of Penicillin. Proc Natl Acad Sci U S A. 35, 1-10 (1949).
  2. Courcelle, J., Donaldson, J. R., Chow, K. H., Courcelle, C. T. DNA Damage-Induced Replication Fork Regres....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Two dimensional Gel ElectrophoresisDNA Replication IntermediatesUV induced DNA DamagePlasmid PBR322 AnalysisAgarose Gel AnalysisSouthern BlottingRestriction Enzyme DigestionAlkali Transfer SystemReplication Fork ReversalNucleotide Excision Repair

Related Articles