العديد من الإصابات استثارة رد فعل قوي CTL ، ولكن في بعض الأحيان ، وكمية من الخلايا لا ترتبط الاستجابة لمكافحة مسببات المرض 1. مقياس واحد للجودة CTL هي قدرتها على قتل تحديدا 2. ويمكن استخدام العلامات CFSE من الخلايا المستهدفة للتحقيق في هذه النوعية ردا CTL في الجسم الحي 3،4.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
مستضد محددة في فيفو الفحص باستخدام خلايا القتل المستهدف CFSE إعتبر
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ويمكن استخدام Carboxyfluorescein ثنائي الأسيتات succinimidyl استر (CFSE) بسهولة وبسرعة تسمية السكان الخلية التي تهم التحقيق في الجسم الحي. وتقليديا كانت هذه العلامات تستخدم لدراسة انتشار الأسلحة النووية والهجرة. في أسلوب المعروضة هنا ، ونحن تقصير الفترة الزمنية بعد نقل بالتبني للنظر في البقاء على قيد الحياة وقتل الخلايا حاتمة CFSE محددة الهدف المسمى 4-6. يمكن لمستوى معين من قتل استنساخ الخلية CD8 + T تشير إلى نوعية الاستجابة ، وكميتها قد يكون مضللا. محددة CD8 + الخلايا التائية يمكن أن تصبح مع مرور الوقت استنفدت وظيفيا مع انخفاض في الانتاج خلوى وقتل 7،8. أيضا ، قد بعض الخلايا التائية CD8 + لا تقتل الحيوانات المستنسخة فضلا عن غيرهم مع اختلاف الخصائص TCR 9. لفعالية الخلية الحصانة ساطة (CMI) ، يجب تحديد المستضدات التي تنتج ليس فقط أعدادا كافية للاستجابة خلايا تي ، ولكن أيضا قوية وظيفيا خلايا تي الاستجابة. هنا نقيم قتل خلايا محددة في المئة من اثنين من الببتيد محددة استنساخ خلايا تي في BALB / ج الفئران.
البروتوكول
1. انتزاع محددة الهدف CTLs المستجيب عن طريق التحصين (يوم 0)
- قبل البدء ، أن يقرر بناء على المستجيب معينة : النظام الهدف. في هذا المثال من الكلاسيكية في مقايسة CTL الحية ، وسوف نستخدم التحصين الببتيد المنقى لانتزاع محددة CD8 + T الخلايا. وسيتم استخدام نفس الببتيد لنبض الخلايا المستهدفة مسانج ، وخلق المستجيب محددة هي : النظام الهدف. بدلا من ذلك ، قد اخترت استخدام الممرض كليا أو الحصول على البروتين الخاص المستجيبات وأهداف محددة.
- تطهير داخل سطح العمل من غطاء لضمان السلامة البي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يمكن تعديل هذا الاختبار للتحقق من قدرة التكاثري من الخلايا ، بما في ذلك التوسع نسيلي ، لأن يقسم بالتساوي CFSE نسبيا بين 10،11 ذرية. ومن الممكن أيضا استخدام العلامات CFSE الهجرة للتحقيق في الخلية 6،12 ، وإن كانت هناك خلية أخرى تتبع الأساليب التي قد تكون أكثر ملائمة اعتمادا على فرضية الخاص ، على سبيل المثال tetramers وتلألؤ بيولوجي 13 ، والتي أيضا قد تكون جنبا إلى جنب مع وضع العلامات CFSE.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح. وقد أجريت تجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعتها المؤسسات ورعاية الحيوان اللجنة الاستخدام (IACUC) في جامعة ويسكونسن ماديسون.
شكر وتقدير
وأود أن أشكر بيانكا MOTHE ، Oseroff كارلا ، وDelGuercio ماري فرنسا على عرضه لي أن المقايسات المناعية والتعامل مع الفأرة. ويتم تمويل عمل في مختبر الفاصل GA بواسطة منحة المعاهد الوطنية للصحة 1 - RO1 - AI - 073558 ، GLRCE منح U54 - 1 - AI - 057153 ، وبين الولايات المتحدة وBARD 3829-06.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| خرزات زجاجية بحجم 1 ملم | منتجات Biospec | 11079110 | |
| 70 μمصفاة خلايا بقطر m | BD Biosciences | 352350 | |
| لوحة ذات 96 بئراً | Costar | 3799 | |
| أدجولايت فريند غير المكتمل (Adjulite Incomplete Freund)’مادة مساعدة | علم المناعة في منطقة المحيط الهادئ | نظرًا لعدم وجود نص مصدر مقدم للترجمة، يرجى تزويدي بالمحتوى العلمي أو التعليمي المطلوب ترجمته من اللغة الإنجليزية إلى اللغة العربية، وسأقوم بتنفيذه وفقًا للمعايير المهنية والأكاديمية المحددة. | |
| ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) | Sigma-Aldrich | D-5879 | |
| مصل جنين البقر | GIBCO، من شركة Life Technologies | 16000-077 | |
| جهاز قياس التدفق الخلوي FC 500 | Beckman Coulter Inc. | نظرًا لعدم توفر نص مصدر للترجمة، يرجى تزويدي بالمحتوى العلمي المراد ترجمته من اللغة الإنجليزية إلى اللغة العربية. | |
| طاحنة أنسجة زجاجية من Kontes | شركة Kontes Corp | 885300-0015 | |
| جهاز تكسير العينات بالخرز الصغير (Mini Beadbeater) | منتجات Biospec | لم يتوفر نص. | |
| إبرة | BD Biosciences | 305175 | |
| بارافيلم (Parafilm) "م" | بيشيني للتغليف البلاستيكي (Pechiney Plastic Packaging) | PM992 | |
| بارافورمالدهيد | علوم المجهر الإلكتروني | 157-8 | |
| محلول ملحي منظم بالفوسفات (PBS) | GIBCO، من إنتاج Life Technologies | 10010-023 | |
| كاشف التحلل PharmLyse | BD Biosciences | 555899 | |
| RPMI 1640 | GIBCO، من إنتاج Life Technologies | 11875-093 | |
| حقنة | BD Biosciences | 309602 | |
| طقم Vybrant CFSE | Invitrogen | V12883 |
المراجع
- Blattman, J. N., Wherry, E. J., Ha, S. J., van der Most, R. G., Ahmed, R. Impact of epitope escape on PD-1 expression and CD8 T-cell exhaustion during chronic infection. J Virol. 83 (9), 4386-4394 (2009).
- Jenkins, M. R., Tsun, A., Stinchcombe, J. C., Griffiths, G. M.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
