زرع القنية في صهريج ماجنا في نموذج فأر

الملخص

المصدر: Xavier, A.L.R., وآخرون. زرع قنية في صهريج القوارض. J. Vis. Exp. (2018)

يوضح هذا الفيديو إجراء زرع قنية في صهريج فأر مخدر. تتضمن هذه التقنية توجيه قنية مثبتة على إبرة عبر الجافية إلى الصهريج المثلث المقلوب وتثبيتها للتسليم المستهدف في السائل النخاعي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. الإجراء الجراحي
   ملاحظة: يسمح قنية الصهريج المزمن (CM) للحيوانات بالتعافي من العملية الجراحية. يتم إجراء حقن CM في اليوم التالي لزرع القنية ، والأهم من ذلك ، يمكن إجراؤها إما في المخدرة أو المستيقظة. نظرا لأن هذه عملية استرداد ، يجب تنفيذ الإجراءات في ظل ظروف معقمة.
   1. وزن الفأر (C57BL / 6JRj، كلا الجنسين، 8 أسابيع) وتخديره بمزيج من الكيتامين والزيلازين (100 ملغم/كغ؛ 10 ملغم/كغ، على التوالي) عن طريق الحقن داخل الصفاق (IP). إذا لزم الأمر ، أعد جرعة الفأر بنصف جرعة من الكيتامين (50 مجم / كجم) أثناء العملية الجراحية. بدلا من ذلك ، بالنسبة للقنية المزمنة ، قم بتخدير الفأر عن طريق وضعه في غرفة تحريض الأيزوفلوران عند 2.5 - 3٪ إيزوفلوران ، عند حوالي 1 لتر / دقيقة من الأكسجين (O₂). في هذه الحالة ، استخدم مخروط الأنف للحفاظ على تخدير الأيزوفلوران بنسبة 1.5 - 2٪ طوال الجراحة.
   2. عندما تتوقف ردود أفعال قرصة إصبع القدم ويصبح التنفس بطيئا وثابتا ، ضع في إطار تجسيمي فوق وسادة تدفئة.
   3. ضع مرهم العيون. كرر أثناء الجراحة عند الضرورة.
   4. حلق رأس وعنق الفأر ، وإزالة الفراء ، وتعقيم الجلد المكشوف أولا بمسحة كحولية ثم مرتين باستخدام الكلورهيكسيدين (0.5٪) أو محلول اليود (2٪). كرر التعقيم مرتين أخريين.
      ملاحظة: قم بتغيير الستارة الجراحية لإزالة الحطام والشعر بعد الحلاقة. ثم ثنى لحماية الحقل المعقم.
   5. للقنية المزمنة، يتم تطبيق 0.5 - 1 مل ليدوكائين/بوبيفاكائين (1 ملغ/مل و0.25 ملغ/مل على التوالي) تحت الجلد (SC) في موضع الشق. تطبيق البوبرينورفين (0.05 ملغم/كغ؛ ثانية الساقية) لعلاج التسكين بعد الجراحة.
   6. قم بإصلاح الماوس في الإطار التجسيمي. بعد التأكد من التثبيت ، سواء داخل الأذن أو بواسطة القوس الوجني ، قم بإمالة الرأس قليلا بحيث يشكل زاوية 120 درجة على الجسم (الشكل 1E).
   7. ابحث عن جزء الجمجمة البارز مباشرة فوق عضلات الرقبة - القمة القذالية. ارفع الجلد المغطى باستخدام زوج من الملقط ، وقم بقص قطعة من الجلد على شكل لوز يبلغ طولها حوالي 1 سم على طول خط الوسط. استخدم مسحات قطنية أو رماح العين للسيطرة على أي نزيف ناتج.
   8. باستخدام القمة القذالية كنقطة مرجعية ، افصل النسيج الضام السطحي لكشف عضلات الرقبة أدناه.
   9. افصل العضلات عند خط الوسط عن طريق تشغيل الملقط بعناية أسفل منتصف موقع الشق في المحور الأمامي إلى الخلفي. باستخدام زوج من الملقط المنحني في كل يد ، انضم إلى الأطراف الموجودة في المنتصف بالقرب من أسفل الجمجمة واسحب العضلات جانبا.
      ملاحظة: يجب أن يكشف هذا CM ، الذي يظهر على شكل مثلث مقلوب صغير ، محدد بواسطة المخيخ أعلاه والنخاع أدناه ، خلف الغشاء الجافوي الشفاف (الشكل 1B و 1C).
   10. باستخدام رمح العين الجراحي أو قطعة قطن ، امسح الغشاء الجافوي الذي يغطي CM.
2. إدخال القنية في نمط CM
   1. قم بإزالة القنية من المحقنة المملوءة بالسائل الدماغي النخاعي الاصطناعي (aCSF) ، مع الحفاظ على إبرة 30G متصلة بالطرف الخلفي للأنبوب.
   2. قم بتوصيل إبرة 30G بحقنة مملوءة بالماء المقطر سعة 100 ميكرولتر متصلة بمضخة حقنة.
   3. أدخل فقاعة هواء يبلغ طولها حوالي 1 سم في القنية عن طريق سحب الهواء بمساعدة مضخة حقنة.
   4. باستخدام مضخة حقنة ، اسحب 12 ميكرولتر من متتبع السائل الدماغي النخاعي (CSF) المطلوب إلى القنية.
   5. أمسك القنية ، المملوءة بتتبع السائل الدماغي النخاعي ، بالقرب من الإبرة المغطاة بالأنبوب مع زوج من الملقط المنحني في اليد المهيمنة. ضع الإصبع الأوسط لليد غير المهيمنة على شريط الأذن من الجانب الآخر واحتفظ به ثابتا لاستخدامه لاحقا كراحة للقنية.
   6. أدخل القنية بزاوية 45 درجة بالنسبة لرأس الماوس ، مرورا بمركز CM ، والذي يتم تحديده من خلال جانبها الثلاثي الذي يرى من خلال الجافية. تجنب أي اختراق للمخيخ أو النخاع. تأكد من إدخال الإبرة فقط على عمق 1-2 مم ، مثل النقطة التي يكون فيها الشطبة تحت الجافية بالكامل. حرر الملقط الذي يحمل القنية ، واترك القنية ترتاح على اليد غير المهيمنة.
      ملاحظة: سيتطلب الطرف المشطوف لإبر الأسنان تطبيق بعض القوة لاختراق الغشاء الجافوي الذي يغطي CM.
   7. إذا لزم الأمر ، جفف أي تسرب للسم الدماغي النخاعي عند الاختراق باستخدام رمح العين الجراحي أو مسحات القطن.
   8. ضع 2-3 قطرات من غراء سيانواكريليت على الغشاء الجافوي المحيط بالقنية. أضف قطرة من مسرع الغراء لمعالجة الغراء على الفور. قم بتغطية الجمجمة والإبرة بمزيج من أسمنت الأسنان (حوالي 0.5 مجم) وغراء سيانواكريليت (3-5 قطرات). بعد ذلك مباشرة ، ضع قطرة من مسرع الغراء للعلاج.

النتائج

فئة الشكل = 'الصورة image_resized image-style-align-center' style='display:table;margin-left;auto;margin-right:auto;width:75٪;'>

الشكل 1: حقن أدوات التتبع في صهريج الصهريج. (أ) نظرة عامة تخطيطية على رأس الفأر ودماغه توضح موقع صهريج الغراب (CM) فيما يتعلق بالدماغ وهياكل الجمجمة. (ب) صورة مجهرية ل CM المكشوف بعد تشريح عضلات الرقبة المحيطة بصراحة ودف...

المواد

< فئة الشكل = 'جدول نمط='العرض: 100٪;'> مناديل

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
SOPIRA carpule 30G 0.3 x 12 mm	Kulzer	AA001
Chlorhexidine 0.5٪ (chlorhexidine digluconate)	Meda AS		http://www.meda.dk/behandlingsomrader/desinfektion/desinfektion-af-hud/klorhexidin-sprit-medic-05/
مسحة كحولية 70٪ كحول الأيزوبروبيل 30 × 60 مم	Vitrex Medical A / S	520213
Viskoese Oejendraeber Ophtha	Ophtha	145250
قضيب خشبي ، برعم قطن مزدوج (Ø تقريبا ، 4-5 مم ، الطول تقريبا ، 12 مم)	هاينز	هيرينز 1032018
رماح العين	Medicom	A18005
Kimtech Science مناديل مناديل دقيقة مناديل	Kimberly Clark Professional	5511
Loctite Super Glue Precision 5 g	Loctite		http://www.loctite-consumer.dk/da/produkter/superglue-liquid.html
مسرع Insta-Set CA	Bob Smith Industries	BSI-152
مسحوق أسمنت الأسنان	أنظمة AM	525000
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS ؛ 0.01 م ؛ درجة الحموضة 7.4)	Sigma Aldrich	P3813
Ovalbumin ، Alexa Fluor 647 مترافق	Thermo Fisher Scientific	O34784
DAPI (4 ′ ، 6-diamidino-2-phenylindole) محلول (1 مجم / مل)	ثيرمو فيشر ساینتفيك	62248
ديكستران ، فلورسين ، 3000 ميجاوات ، أنيوني	ثيرمو فيشر ساینتفيك	D3305
كيتامينول بيطري 100 مجم / مل (كيتامين)	إنترفيت إنترناشيونال بي	في 511519
رومبين بيطري 20 مجم / مل (زيلازين)	KVP Pharma + Veterinär Produkte GmbH	148999
زيلوكين 20 مجم / مل (ليدوكاين)	أسترازينيكا	158543
ماركين 2.5 مجم / مل (بوبيفاكين)	أسترا زينيكا	123918
بوباك البيطري 0.3 مجم / مل (بوبرينورفين)	ريختر فارما إيه جي	185159