يوضح هذا الفيديو المعالجة المسبقة للبلاعم باستخدام حويصلات الغشاء الخارجي الفيلقية الرئوية (OMVs) لفحص تأثيرها على تكاثر البكتيريا. من خلال تغيير الإشارات المناعية للمضيف ، تجعل OMVs البلاعم أكثر تساهلا بالعدوى. يشير ارتفاع عدد المستعمرات في الخلايا المعالجة ، مقارنة بالخلايا غير المعالجة ، إلى أن OMVs تعزز تكاثر L. pneumophila داخل الضامة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
فحص تكاثر الفيلقية الرئوية في البلاعم المعالجة مسبقا بحويصلات الغشاء الخارجي
607 مشاهدة
⸱
أغسطس 29, 2025
في هذه المقالة
الملخص
البروتوكول
1. البلاعم المعالجة المسبقة
- قم بإعداد خلايا THP-1 (خلايا طب الأطفال في مستشفى توهوكو -1 ، خط خلايا سرطان الدم أحادي الخلية البشرية).
ملاحظة: THP-1 هو خط خلية أحادي الخلية مشتق من مريض سرطان الدم.- أضف 2 × 105 خلايا THP-1 لكل 24 بئرا وقم بتمييزها عن طريق إضافة 20 نانومتر فوربول 12-ميريستات 13-أسيتات (PMA) في خلايا شبيهة بالبلاعم. احتضان لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية.
- استبدل الوسط ب 500 ميكرولتر من الوسط الطازج واحتضنه لمدة 24 ساعة أخرى ؛ الوسط الأمثل لخلايا THP-1 يشتمل على نسبة عالية من الجلوكوز المتوسط (RPMI) 1640 مع مصل ربلة الساق الجنينية بنسبة 10٪.
- عزل الضام....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
< الرقم class = 'table'>
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 10 cm petridish | Sarstedt AG & Co KG (Nuembrecht ، ألمانيا) | 82.1473 | |
| الفحم المنشط | Carl Roth GmbH & Co KG (كارلسروه ، ألمانيا) | X865.2 | |
| Agar-agar ، Kobe I | Carl Roth GmbH & Co KG (كارلسروه ، ألمانيا) | 5210.2 | |
| كولومبيا أجار مع 5٪ من دم الأغنام | Becton Dickinson GmbH (هايدلبرغ ، ألمانيا) | 254005 | |
| نترات الحديديك nonahydrate | Carl Roth GmbH & Co KG (كارلسروه ، ألمانيا) | 5632.1 | |
| مصل عجل الجنين (FCS) | Life Technologies GmbH (دارمشتات ، ألمانيا) | 10270-106 | |
| Heracell 240i حاضنة ثاني أكسيد الكربون | Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (براونشفايغ ، ألمانيا) | 40830469 | |
| Heraeus Multifuge X3R | Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (براونشفايغ ، ألمانيا) | 75004515 | |
| حلقة التلقيح | Sarstedt AG & Co KG (نومبرشت ، ألمانيا) | 86.1567.010 | |
| L. pneumophila Corby | --- | --- | يرجى تقديم الأستاذ الدكتور أنتجي فليجر (RKI ، برلين ، ألمانيا) |
| L. pneumophila Corby ΔflaA | ------ | يرجى تقديم الأستاذ الدكتور كلاوس هونر (RKI ، برلين ، ألمانيا) | |
| mBMDM | --- | --- | يرجى تقديم البروفيسور الدكتور ماركوس شنار (جامعة فيليبس ماربورغ ، ماربورغ ، ألمانيا) والبروفيسور الدكتور كارستن كيرشنينج (جامعة دويسبورغ إيسن ، إيسن ، ألمانيا) PBS |
| Biochrom GmbH (برلين ، ألمانيا) | L 1825 | ||
| Phorbol 12-myristate 13-acetate | Sigma-Aldrich Chemie GmbH (Taufkirchen ، ألمانيا) | P8139-1MG | |
| شاكر دوار (MaxQ 6000) Thermo | Fisher Scientific Germany BV & Co KG (براونشفايغ ، ألمانيا) | SHKE6000 | |
| RPMI 1640 High Glucose | Life Technologies GmbH (دارمشتات ، ألمانيا) | 11875-093 | |
| Saponin | Carl Roth GmbH & Co KG (كارلسروه ، ألمانيا) | 9622.1 | |
| Ultrospec 10 | Biochrom Ltd (كامبريدج ، إنجلترا) | 80-2116-30 | |
| THP-1 | Sigma-Aldrich Chemie GmbH (Taufkirchen ، ألمانيا) | 88081201-1VL | |
| Sorvall Discovery 100 SE | Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (براونشفايغ ، ألمانيا) | ||
| مستخلص الخميرة | Carl Roth GmbH & Co KG (كارلسروه ، ألمانيا) | 2363.2 |
