نمو البكتيريا وتقنياتها

المصدر: Cian، M. B. et al.، فصل غلاف الخلية للبكتيريا سالبة الجرام إلى كسور غشاء داخلية وخارجية مع تعديلات فنية ل Acinetobacter baumannii. J. Vis. Exp. (2020)يوضح هذا الفيديو فصل أجزاء الغشاء الداخلي والخارجي للبكتيريا سالبة الجرام باستخدام الطرد المركزي الفائق المتدرج للسكروز. يتم تنقية أجزاء الغشاء وتخزينها في درجات حرارة منخفضة للتحليل المستهدف للمكونات الخاصة بالغشاء.

المصدر: Mercier، N.، et al. تنقية MS2-Affinity إلى جانب تسلسل الحمض النووي الريبي في البكتيريا موجبة الجرام. J. Vis. Exp. (2021)يوضح هذا الفيديو إجراء خطوة بخطوة لحصاد الخلايا البكتيرية وتحللها ميكانيكيا لإطلاق محتويات داخل الخلايا.

المصدر: Mercier، N.، وآخرون، تنقية MS2-Affinity إلى جانب تسلسل الحمض النووي الريبي في البكتيريا موجبة الجرام. J. Vis. Exp. (2021)يوضح هذا الفيديو عزل الحمض النووي الريبي التنظيمي الصغير (sRNA) المرتبط بالحمض النووي الريبي البكتيري المستهدف باستخدام تنقية التقارب مع اندماج بروتين معطف المالتوز (MBP) - MS2 الثابت على راتنج الأميلوز.

المصدر: Feltwell، T.، et.al. فصل البكتيريا حسب كمية الكبسولة باستخدام تدرج كثافة متقطع. J. Vis. Exp. (2019)يوضح هذا الفيديو استخدام تدرج كثافة متقطع لفصل السلالات البكتيرية بناء على كمية الكبسولة من خلال الطرد المركزي لمكتبة متحولة من خلال التدرج ، تتمركز البكتيريا ذات الكثافات المختلفة إلى طبقات متميزة. يمكن بعد ذلك جمع الكسور المنفصلة لتحليلها في اتجاه...

المصدر: جوبتا ، س. ، مارسيلا رودريغيز ، ج. عزل وتوصيف الحويصلات خارج الخلية التي تنتجها البكتيريا الفطرية محدودة الحديد. J. Vis. خبرة. (2019)يوضح هذا الفيديو العزل التدريجي للحويصلات خارج الخلية (EVs) من المتفطرة السلية المزروعة في ظل ظروف تحد من الحديد تحاكي البيئة المضيفة. وهو يحدد استخدام الترشيح الفائق ، والطرد المركزي التفاضلي ، وفصل تدرج الكثافة لإثراء وتحديد الكسور المحتوية على EV.

المصدر: واتسون ، دي سي ، et.al. عزل وتنقية الحويصلات خارج الخلية القابلة للتطوير من الإشريكية القولونية والبكتيريا الأخرى. J. Vis. خبرة. (2021)يوضح هذا الفيديو عزل وتركيز الحويصلات خارج الخلية (EVs) المشتقة من الغشاء الخارجي للبكتيريا المعدلة وراثيا. تتضمن العملية زراعة البكتيريا لإطلاق المركبات الكهربائية ، تليها خطوات الطرد المركزي والترشيح المتسلسلة لإزالة الخلايا والحطام. أخيرا ، يتم استخدام الترشيح الفائق لتركيز المركبات الكهربائية لتحليل المصب.

المصدر: واتسون ، دي سي ، وآخرون. عزل وتنقية الحويصلات خارج الخلية القابلة للتطوير من الإشريكية القولونية والبكتيريا الأخرى. J. Vis. خبرة. (2021)يوضح هذا الفيديو استخدام كروماتوغرافيا استبعاد الحجم مع حبات الراتنج المسامية لعزل الحويصلات البكتيرية خارج الخلية (EVs) من مرشح الثقافة البكتيرية. تنفجر المركبات الكهربائية الأكبر حجما مبكرا عن طريق تجاوز مسام الراتنج ، بينما تدخل البروتينات الأصغر إلى المسام وتتسرب لاحقا.

المصدر: فتاحي، ن.، وآخرون. واجهات هيدروجيل قابلة للتحلل ضوئي لفحص البكتيريا واختيارها وعزلها. J. Vis. خبرة. (2021).يوضح هذا الفيديو استخراج المستعمرات البكتيرية من هيدروجيل قابل للتحلل ضوئي باستخدام ضوء الأشعة فوق البنفسجية. يتم اختيار مستعمرة معينة ، وتم تصميم التعرض للضوء المزخرف لبدء تحلل الهيدروجيل الموضعي. بعد ضبط شدة الضوء ومدته ، يتم تطبيق ضوء الأشعة فوق البنفسجية ، وإطلاق المستعمرة. ثم يتم شفط المستعمرة من خلال الأنابيب ونقلها إلى أنبوب لتحليل المصب.

المصدر: Ghadigaonkar، D. and Rath، A. عزل وتحديد البكتيريا المقاومة للمضادات الحيوية المنقولة بالماء والتوصيف الجزيئي لجيناتها المقاومة للمضادات الحيوية. J. Vis. خبرة. (2023)يوضح هذا الفيديو عزل وتحضير البكتيريا المقاومة للمضادات الحيوية من عينة الماء باستخدام وسائط انتقائية. يتم استخراج الحمض النووي من البكتيريا المقاومة للمضادات الحيوية وتضخيمه لتحديد الجينات المقاومة للمضادات الحيوية البكتيرية.

المصدر: Kazi ، M. I. ، وآخرون ، إنشاء مكتبات إدخال الينقولات في البكتيريا سالبة الجرام من أجل تسلسل عالي الإنتاجية. J. Vis. خبرة. (2020)يوضح هذا الفيديو اختيار وقياس وحفظ البكتيريا المتلقية سالبة الجرام التي تحمل إدخالات الينقولات بناء على مقاومة الكاناميسين.

المصدر: فرنانديز كول ، إل وكاشيل ، م. باستخدام الملصقات الإشعاعية لطبق ميكروتيتر لقياسات متعددة في الجسم الحي للإشريكية القولونية (p) ppGpp متبوعة بكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة. J. Vis. خبرة. (2019)يقدم هذا الفيديو بروتوكولا عالي الإنتاجية لقياس مستويات وديناميكيات النيوكليوتيدات البكتيرية للاستجابة للإجهاد ppGpp و pppGpp باستخدام كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة (TLC). توفر الطريقة نهجا قويا وسريعا وفعالا من حيث التكلفة لقياس (p) ppGpp في المزارع البكتيرية في ظل ظروف الإجهاد المختلفة ، مما يتيح...

المصدر: Streather ، B. R. ، et al. الإنتاج الأمثل وتحليل الحويصلات المؤتلفة المليئة بالبروتين من الإشريكية القولونية. J. Vis. خبرة. (2023)يوضح هذا الفيديو إنتاج وعزل البروتينات المؤتلفة الموسومة بالببتيد النووي الحويصلي (VNp) من الحويصلات البكتيرية. يؤدي المحفز إلى إطلاق تعبير البروتين الموسوم ب VNp ، مما يؤدي إلى تكوين الحويصلة وتغليفها ، متبوعا بالطرد المركزي وصوتنة لاستعادة البروتين بكفاءة دون تحلل...

المصدر: Shivaiah, K., et al. عزل قطرات دهون Plastoglobule من أنسجة أوراق النبات والبكتيريا الزرقاء. J. Vis. خبرة. (2022).يوضح هذا الفيديو عزل البكرات البلازمية عن البكتيريا الزرقاء باستخدام الطرد المركزي المتدرج بكثافة السكروز ، مما يسلط الضوء على طبيعتها الغنية بالدهون ومنخفضة الكثافة وضمان الحفاظ عليها الهيكلية لتحليل المصب.

المصدر: Armbruster، K.M.، Meredith، T. C. إثراء البروتينات الدهنية البكتيرية وتحضير الببتيدات الدهنية الطرفية N للتحديد الهيكلي عن طريق قياس الطيف الكتلي. J. Vis. خبرة. (2018)يوضح هذا الفيديو إثراء البروتينات الدهنية البكتيرية باستخدام منظف غير أيوني يخضع لفصل الطور عند الاحترار. من خلال التحولات المتسلسلة في درجات الحرارة وخطوات الطرد المركزي ، يتم تقسيم البروتينات الدهنية بشكل انتقائي إلى مرحلة المنظفات ، بينما تتم إزالة الملوثات غير البروتينية الدهنية. ثم يتم ترسيب البروتينات الدهنية المخصبة...

المصدر: Leuthold, M. M., et al. إنتاج المجالات البارزة لفيروس نوروفيروس البشري في الإشريكية القولونية لعلم البلورات بالأشعة السينية. J. Vis. خبرة. (2016).يوضح هذا الفيديو تنقية مجال نوروفيروس بشري المؤتلف P باستخدام كروماتوغرافيا استبعاد الحجم ، مع تسليط الضوء على فصل البروتين المستهدف عن الشوائب ذات الوزن الجزيئي الأعلى والمنخفض بناء على إمكانية الوصول التفاضلي إلى المسام. تتم مراقبة العملية عن طريق امتصاص الأشعة فوق البنفسجية ويتم تأكيدها من خلال تحليل SDS-PAGE للكسور الممسولة.

المصدر: Kuo, T., et al. تنقية كروماتوجرافية سلبية من خطوة واحدة للبروتين المنشط للعدلات الملوية البوابية المفرط في التعبير عنها في الإشريكية القولونية في وضع الدفعات. J. Vis. خبرة. (2016)يوضح الفيديو تقنية كروماتوغرافيا سلبية لتنقية البروتين المرتبط بالفوعة من محللة بكتيرية. باستخدام راتينج موجب الشحنة في محلول مخزن مؤقت ، يتم الاحتفاظ ببروتينات الخلية المضيفة بشكل انتقائي ، بينما يظل البروتين المستهدف شبه المحايد غير مرتبط ويتم جمعه في التدفق. تسمح هذه الطريقة بالفصل الفعال واستعادة البروتين...

المصدر: Murata، T.، et al. تنقية بروتين عالي الكتلة الجزيئية في Streptococcus mutans. J. Vis. Exp. (2019)يوضح هذا الفيديو إجراء خطوة بخطوة لتنقية بروتين يحمل علامة polyhistidine يفرز من Streptococcus mutans.

المصدر: Venuprasad, K., et al. إعطاء المستدمية النزلية داخل القصبة الهوائية في نماذج الفئران لدراسة التهاب مجرى الهواء. J. Vis. خبرة. (2016)يوضح هذا الفيديو جمع ومعالجة سائل الغسيل القصبي السنخي من فأر تم القتل الرحيم مصاب بالمستدمية النزلية غير القابلة للكتابة لتحليلها النهائي.

المصدر: Ginies، C.، et al. تحديد الأحماض الدهنية في العصيات المخيخية. J. Vis. خبرة. (2016)يوضح هذا الفيديو عملية تحضير استرات ميثيل الأحماض الدهنية (FAMEs) من العينات البكتيرية عن طريق معالجة الكتلة الحيوية بمحلول قلوي ، متبوعا بفصل الطور وتبخر المذيبات لتحليلها النهائي.

المصدر: Shivaiah, K., et al. عزل قطرات دهون Plastoglobule من أنسجة أوراق النبات والبكتيريا الزرقاء. J. Vis. خبرة. (2022)يوضح الفيديو عزل البلوبولات من البكتيريا الزرقاء. يبدأ بثقافة البكتيريا الزرقاء ويستمر من خلال تعطيل الخلايا باستخدام القوة الميكانيكية. يشير إطلاق أصباغ التمثيل الضوئي إلى التحلل الناجح. ثم يتم استخدام تدرج خطوة السكروز لفصل المكونات الخلوية حسب الكثافة ، مما يسمح للكريات البلاستوبلية منخفضة الكثافة بتشكيل نطاق مميز في الأعلى. يتم جمع هذا الكسر وحفظه لمزيد من التحليل.

ابدأ بمزارع أنواع اليرسينيا سالبة الجرام وغير اليرسينيا المعوية.باستخدام لقاحات الإبرة المعقمة ، ضع الثقافات على كل من Cefsulodin-Irgasan-Novobiocin التقليدي أو CIN agar و CIN agar المعدل.احتضان الألواح لتعزيز نمو البكتيريا.يدعم كل من CIN agars التقليدي والمعدل نمو Yersinia و Non-Yersinia Enterobacteriaceae التي تخمر المانيتول لإنتاج منتجات ثانوية حمضية.يقلل إنتاج الحمض من درجة الحموضة ويؤدي إلى تغيير اللون ، مما ينتج عنه مورفولوجيا مستعمرة مميزة تتمحور حول اللون الأحمر.يحتوي CIN agar المعدل...

ابدأ بثقافة تخصيب مشتقة من تربة الأراضي الرطبة تحتوي على مجتمعات بكتيرية.تظهر الثقافة نشاط Feammox ، وأكسدة الأمونيوم إلى جانب تقليل الحديد الحديديك ، مما يشير إلى إثراء بكتيريا قادرة على هذه العملية الأيضية.تمييع الثقافة بشكل متسلسل باستخدام الوسائط.ضع العينات المخففة على ألواح أجار الاختبار المكملة بالحديد الحديديك والأمونيوم.استخدم لوحات التحكم التي تفتقر إلى الحديد الحديديك أو الأمونيوم ، أو تحتوي على حديد الحديديك مع الكربون العضوي بدلا من الأمونيوم ، لاستبعاد تقليل الحديد من خلال مسارات...

المصدر: بيكر، ب.، وآخرون. اختبار تقرير بسيط قائم على الفلورة لتحديد المكونات الخلوية المطلوبة لسلسلة سم الريسين A (RTA) في الخميرة. J. Vis. Exp. (2017).يوضح هذا الفيديو تنقية بروتين مؤتلف مزود بعلامات متعددة الهيستيدين باستخدام كروماتوغرافيا الألفة القائمة على النيكل. يوضح الخطوات الرئيسية، بما في ذلك تحلل البكتيريا عن طريق السونيكشن، وتوضيح وترشيح الليزات، والارتباط الانتقائي والاستبعاد للبروتين المستهدف باستخدام الإيميدازول.

المصدر: وندرلين، ت.، وآخرون. العزل الفيزيائي للأبواغ الداخلية عن العينات البيئية من خلال التحلل المستهدف للخلايا النباتية. J. Vis. Exp. (2016)يوضح هذا الفيديو طريقة لعزل الأبواغ الداخلية من عينة بيئية تحتوي على خلايا نباتية وبكتيريا مختلفة. تتضمن العملية الترشيح، والاضطراب الميكانيكي، والمعالجة الكيميائية الانتقائية لإضعاف وتحليل الخلايا النباتية مع الحفاظ على الأبواغ الداخلية. الخطوة الأخيرة تعزل الأبواغ الداخلية المرنة من خلال ترشيح الغشاء.

المصدر: جولا، س. وآخرون. تحليل متكرر متعدد المواقع متعدد الأرقام المتغيرة لبكتيريا يرسينيا روكيري الممرضة للأسماك بواسطة PCR متعدد القنوات والرحلان الكهربائي الشعري. J. Vis. Exp. (2019).يستخرج هذا البروتوكول الحمض النووي الجينومي من يرسينيا روكيري عن طريق تعليق مستعمرات معزولة في مياه فائقة النقاء وتطبيق الحرارة لتحليل الخلايا. يفصل الطرد المركزي المادة الفائقة التي تحتوي على الحمض النووي عن حطام الخلية، مما ينتج نموذجا للحمض النووي المناسب للنمذجة الجينية المعتمدة على PCR والتحليل الوبائي.

المصدر: جولا، س. وآخرون. تحليل متكرر متعدد المواقع متعدد الأرقام المتغيرة لبكتيريا يرسينيا روكيري الممرضة للأسماك بواسطة PCR متعدد القنوات والرحلان الكهربائي الشعري. J. Vis. Exp. (2019).يستخرج هذا البروتوكول الحمض النووي الجينومي من يرسينيا روكيري عن طريق تعليق مستعمرات معزولة في مياه فائقة النقاء وتطبيق الحرارة لتحليل الخلايا. يفصل الطرد المركزي المادة الفائقة التي تحتوي على الحمض النووي عن حطام الخلية، مما ينتج نموذجا للحمض النووي المناسب للنمذجة الجينية المعتمدة على PCR والتحليل الوبائي.

المصدر: Stones، D.H.، et al. مواد المحاكاة الحيوية لتوصيف تفاعلات البكتيريا والمضيف. J. Vis. Exp. (2015)يوضح هذا الفيديو استخدام حبيبات البكتيريا لتحديد الالتصاق البكتيري لاستضافة الخلايا الظهارية في ظل ظروف تنافسية. يحدد الخطوات المتبعة في معالجة الخلايا ، وتحللها ، والتخفيفات التسلسلية لقياس وحدات تكوين المستعمرات.

المصدر: Jung، A. L. et al.، Legionella pneumophila حويصلات الغشاء الخارجي: عزل وتحليل إمكاناتها المؤيدة للالتهابات على الضامة. J. Vis. Exp. (2017)يوضح هذا الفيديو المعالجة المسبقة للبلاعم باستخدام حويصلات الغشاء الخارجي الفيلقية الرئوية (OMVs) لفحص تأثيرها على تكاثر البكتيريا. من خلال تغيير الإشارات المناعية للمضيف ، تجعل OMVs البلاعم أكثر تساهلا بالعدوى. يشير ارتفاع عدد المستعمرات في الخلايا المعالجة ، مقارنة بالخلايا غير المعالجة ، إلى أن OMVs تعزز تكاثر L. pneumophila داخل الضامة.

المصدر: Jagau, H. et al. عدوى المكورات الرئوية للخلايا البطانية البشرية الأولية في تدفق مستمر. J. Vis. خبرة. (2019)يوضح هذا الفيديو التصور في الوقت الفعلي لارتباط المكورات الرئوية بسلاسل عامل فون ويلبراند (VWF) على الخلايا البطانية في ظل ظروف تدفق الوسائط الثابتة. يحدد خطوات تحفيز إطلاق VWF ، وتسمية السلاسل ، وتحديد الارتباط البكتيري.

المصدر: Morrill, S. R., et al. نماذج من الاستعمار المهبلي الفئران بواسطة البكتيريا المزروعة اللاهوائية. J. Vis. خبرة. (2022)يوضح هذا الفيديو بروتوكولا لنمذجة الاستعمار المهبلي في الفئران باستخدام البكتيريا اللاهوائية المقاومة للمضادات الحيوية. يبدأ بالعلاج الهرموني لزيادة القابلية للإصابة الظهارية ، يليه التلقيح المهبلي والتلقيح المشترك في ظل ظروف لاهوائية. يختتم الإجراء بأخذ عينات ما بعد التلقيح والثقافة لتقييم الاستعمار البكتيري وتكوين الأغشية الحيوية.

المصدر: Li, J. et al. تطوير نموذج عدوى يرقات الزرد ل Clostridioides difficile. J. Vis. خبرة. (2020)يوضح هذا الفيديو التوصيل القائم على الحقن المجهري للمثية العسيرة المسمى بالفلورسنت في تجويف الأمعاء ليرقة سمك الزرد المخدرة. يحدد الخطوات التي ينطوي عليها تحضير اليرقات ، والحقن البكتيري ، والتأكيد المجهري الفلوري القائم على التوطين البكتيري داخل الأمعاء.

المصدر: Cruz-Adalia, A., et al. تلتقط الخلايا التائية البكتيريا عن طريق نقل العدوى من الخلايا الشجرية. J. Vis. خبرة. (2016).يوضح هذا الفيديو العدوى المتحولة للبكتيريا من خلال تفاعلات الخلايا التائية والخلايا المتغصنة الخاصة بالمستضد. يتم تحضين الخلايا المتغصنة المصابة بالبكتيريا التي تقدم ببتيد البيض الألبومين بالخلايا التائية ، إما مباشرة أو مفصولة بغشاء. يسمح الاتصال المباشر بتكوين المشبك المناعي ، مما يتيح نقل البكتيريا ، بينما يمنع الغشاء التفاعل. ثم يتم علاج الجنتاميسين للقضاء على...

المصدر: Balczon, R., et al. طرق الكشف عن الأميلويدات السامة للخلايا بعد إصابة الخلايا البطانية الرئوية بالزائفة الزنجارية. J. Vis. إكسب. (2018)يوضح هذا الفيديو إجراء توليد مادة طافية سامة للخلايا من الخلايا البطانية الرئوية بعد الإصابة بالزائفة الزنجارية. يوضح كيف تعطل البروتينات المستجيبة البكتيرية بنية الخلية المضيفة وتحفز إطلاق قليلة الأميلويد السامة للخلايا في المادة الطافية.

المصدر: Lee، H. et al. ، نظام البروتين الفلوري الأخضر المنفصل لتصور المؤثرات التي يتم توصيلها من البكتيريا أثناء الإصابة. J. Vis. خبرة. (2018)يوضح هذا الفيديو طريقة لمراقبة العدوى البكتيرية وتوصيل البروتين المستجيب في الخلايا النباتية باستخدام مكمل البروتين الفلوري الأخضر المنفصل (sfGFP) جنبا إلى جنب مع الفحص المجهري متحد البؤر. يتيح هذا النهج التصور الدقيق لنقل المستجيب إلى العصارة الخلوية للخلية المضيفة.

المصدر: إسلام ، أ. ، وآخرون ، تقييم ترانجيستوز الخلايا المعوية لعزلات الإشريكية القولونية لحديثي الولادة. J. Vis. خبرة. (2023)يوضح هذا الفيديو إجراء تقييم ترانجيستوز الخلايا للإشريكية القولونية لحديثي الولادة عبر الطبقات الظهارية الأحادية المعوية باستخدام إدخالات البئر ، وقياس المقاومة الكهربائية ، والقياس الكمي البكتيري.

المصدر: أندرسون ، كيو إل ، وآخرون. نظام C. elegans Pathosystem عالي الإنتاجية وعالي المحتوى وقائم على السائل. J. Vis. خبرة. (2018)يوضح الفيديو مقايسا سائلا حيث تتعرض يرقات C. ايليجانس المعدلة وراثيا للبكتيريا المسببة للأمراض في صفيحة دقيقة. السموم البكتيرية التي تفرز في الوسط تحفز إجهاد المضيف والموت. صبغة الفلورسنت تلطخ الديدان الميتة ، مما يسمح بالقياس الكمي للوفيات على أساس التصوير لتقييم القابلية الوراثية أو المقاومة.

المصدر: Yarringto, K. D., et al. التصور الحركي للتفاعلات البكتيرية بين الأنواع أحادية الخلية. J. Vis. خبرة. (2020)يوضح هذا الفيديو تحضير نظام الزراعة المشتركة باستخدام البكتيريا المتحركة وغير المتحركة تحت وسادة الاغاروز لتصوير الخلايا الحية. يوضح كيف تكتشف البكتيريا المتحركة الجاذبات الكيميائية وتغزو المستعمرات غير المتحركة ، وتكشف عن التفاعلات البكتيرية.

المصدر: Sorokulova, I., et al. الوقاية من الآثار السلبية الإجهاد الحراري في الفئران بواسطة سلالة عصيات رقيقة . J. Vis. خبرة. (2016)يوضح هذا الفيديو الفئران المعالجة مسبقا بالبكتيريا المفيدة أو المحلول الملحي المخزن بالفوسفات (PBS) وتعرضت للإجهاد الحراري لتقييم سلامة حاجز الأمعاء. يشير عدد أقل من المستعمرات البكتيرية المشتقة من الأمعاء من كبد الفئران المعالجة ، على عكس العديد من المستعمرات في الفئران الضابطة ، إلى حاجز ظهاري سليم والحد الأدنى من الانتقال البكتيري.

المصدر: Yi, Y., et al. تفاعل النبات والميكروب: الاستجابة النسخية ل Bacillus mycoides لإفرازات جذر البطاطس. J. Vis. خبرة. (2018)يوضح هذا الفيديو تحضير وعلاج مزارع الفطريات Bacillus لدراسة تفاعلات النبات والميكروب. يحدد الخطوات من خطوط ثقافة المخزون واحتضانها في وسط سائل إلى تعريض البكتيريا لإفرازات جذور النبات تحت التحريض. تبلغ العملية ذروتها في حصاد الخلايا البكتيرية وتجميدها السريع لتحليلها اللاحق لتغيرات التعبير الجيني الناتجة عن الإفرازات.

المصدر: Venuprasad, K., et al. إعطاء المستدمية النزلية داخل القصبة الهوائية في نماذج الفئران لدراسة التهاب مجرى الهواء. J. Vis. خبرة. (2016)يوضح هذا الفيديو التوصيل داخل القصبة الهوائية للقاح بكتيري ممرض للرئة إلى فأر مخدر لنمذجة عدوى الجهاز التنفسي السفلي.

المصدر: تايلور ، إم إن ، et.al. استخدام بيانات دودة واحدة لتحديد عدم التجانس في Caenorhabditis elegans التفاعلات البكتيرية. J. Vis. خبرة. (2022)يوضح هذا الفيديو تعرض ديدان Caenorhabditis الخالية من الجراثيم والمطابقة للعمر لسلالة بكتيرية للاستعمار المعوي. وهو يفسر الإزالة الانتقائية للبكتيريا الخارجية وغير الملتصقة ، تاركا فقط البكتيريا القابلة للحياة الملتصقة بظهارة الأمعاء لقياسها.

المصدر: تايلور ، إم إن وآخرون. استخدام بيانات دودة واحدة لتحديد عدم التجانس في Caenorhabditis elegans التفاعلات البكتيرية. J. Vis. خبرة. (2022)يوضح هذا الفيديو التقدير الكمي لتقلب الحمل البكتيري المعوي في التهاب الزنجان الفردي من خلال الاضطراب الميكانيكي. يحدد خطوات تحضير العينة ، والتعطيل الميكانيكي ، والتخفيف التسلسلي ، وعد المستعمرات لتقييم الاختلافات في الحمل البكتيري المعوي بين الديدان الفردية.

تستعمر البكتيريا الداخلية الأنسجة النباتية وتعزز نمو النبات.لدراسة تأثيرها على نمو نبات الطماطم تحت إجهاد الملح ، ابدأ بالشتلات المعقمة التي تظهر الأوراق والجذور النامية.اغمر جذور الشتلات التجريبية في تعليق البكتيريا الداخلية ؛ اترك عنصر التحكم غير ملقح.انقل كلتا المجموعتين إلى تربة معقمة لمنع التداخل الميكروبي الخارجي واحتضان في غرفة النمو.من التربة ، تدخل البكتيريا من خلال فتحات الجذور العابرة ، وتستعمر الأنسجة الداخلية ، وتنتشر إلى أجزاء النبات الأخرى. أعد تطبيق المعلق البكتيري لتعزيز...

خذ مزيجا من اللقاح من البكتيريا القابلة للذوبان في الفوسفات أو PSB والبكتيريا الأرجوانية غير الكبريتية أو PNSB.رش الخليط على التربة الممزوجة بالأسمدة وروث البقر.زرع البذرة وتغطيتها بالتربة.دع النبات ينمو.تتوضع البكتيريا بالقرب من الجذر في منطقة تسمى الجذور.يحول PSB فوسفات التربة غير القابل للذوبان إلى أشكال قابلة للذوبان.وفي الوقت نفسه ، يقوم PNSB بإصلاح النيتروجين عن طريق تحويل غاز النيتروجين في الغلاف الجوي إلى أمونيا.يمتص النبات الفوسفات والأمونيا القابلة للذوبان ، مما يسهل نموه.بالإضافة إلى...

ابدأ بشتلات الأرز التي نبتت مسبقا في ظل ظروف مظلمة ومعقمة لضمان إنبات موحد.انقل هذه الشتلات إلى قارورة تحتوي على وسط غني بالمغذيات وشبه صلب ملقح مسبقا ببكتيريا اختبارية.مع نمو النبات ، تطلق الجذور مركبات كيميائية في الوسط المحيط.تحفز هذه المركبات تكاثر البكتيريا ، مما يؤدي إلى الالتصاق والتكاثر وتكوين المستعمرة على سطح الجذر.مع تطور الجذور ، تدخل البكتيريا النبات من خلال الفتحات الطبيعية والمساحات بين الخلايا.بمجرد الدخول ، تشكل البكتيريا مستعمرات داخلية داخل جذور وبراعم النبات.بمرور الوقت ،...

مصدر:أوشن إي كلارك1 ، رومي أ. دوب1 ، توم هاسيل1 ، جوان إل فوثرجيل1 ، دانيال آر نيل21جامعة ليفربول ، 2 جامعة دندييوضح هذا الفيديو استخدام جهاز مطبوع ثلاثي الأبعاد ومغطى بالسيليكون يحاكي السطح الداخلي للقسطرة البولية لمحاكاة عدوى المسالك البولية المرتبطة بالقسطرة.

المصدر: أرويو، م. س.، وآخرون. تقييم جدوى اتحاد بكتيريا صناعي على واجهة المضيف والميكروب في المختبر . J. Vis. Exp. (2018)يوضح هذا الفيديو تقييم قابلية حياة مجتمع ميكروبي فموي صناعي أثناء الهضم الفموي والمعدة والأمعاء المحاكاة. يتم قياس بقاء البكتيريا بعد كل مرحلة، مما يكشف عن تراجع تدريجي بسبب الإجهاد الهضمي.

المصدر: أوكاموتو، أ.، وآخرون. إعداد كهروكيميائي مستقل لإثراء البكتيريا التي تتنفس الأنود في الموقع. J. Vis. Exp. (2018)يوضح هذا الفيديو استخدام نظام كهروكيميائي في الموقع لإثراء البكتيريا التنفسية بالأنود (ARB) من الخزانات الطبيعية. يتم إنشاء تدرج أكسدة اختزاز بوضع الأنود في مياه عميقة خالية من الأكسجين والكاثود في مياه سطحية غنية بالأكسجين. تشكل ARB الأغشية الحيوية وتنقل الإلكترونات إلى الأنود، الذي يتدفق إلى الكاثود، حيث يتم تقليل الأكسجين مولدا التيار. يتم جمع الأنود تحت ظروف لاهوائية...

المصدر: أحمدي، س. وآخرون. نموذج الزراعة الدفعية في المختبر لتقدير تأثيرات الأنظمة التدخلية على ميكروبيوم البراز البشري. J. Vis. Exp. (2019).يوضح هذا الفيديو طريقة لنمذجة التخمير الميكروبي في الأمعاء عن طريق حضنة عينات البراز بألياف قابلة للتخمير الغذائية تحت ظروف لاهوائية لدراسة إنتاج المستقلبات بواسطة ميكروبيوم الأمعاء.

المصدر: Biller, S. J., et al. عزل وتوصيف الحويصلات خارج الخلية الزرقاء. J. Vis. Exp. (2022)يوضح هذا الفيديو تحضير الحويصلات خارج الخلية للبكتيريا الزرقاء للفحص المجهري الإلكتروني عن طريق التلوين السلبي ، مما يتيح تصورا عالي الدقة لمورفولوجيا الحويصلة وحجمها ونقائها للتحليلات الهيكلية والمقارنة.

المصدر: Zhang، Y.، et al. تطبيق الجسيمات النانوية الفلورية لدراسة إعادة تشكيل النظام التحلي الداخلي بواسطة البكتيريا داخل الخلايا. J. Vis. Exp. (2015)يوضح هذا الفيديو استخدام الجسيمات النانوية الفلورية لتصور إعادة تشكيل الأحزمات الليزوزومية الداخلية في الخلايا الظهارية البشرية المصابة بالبكتيريا داخل الخلايا. بعد الغزو البكتيري ، تتلاعب مسببات الأمراض بالهيكل الخلوي المضيف والنظام الليزوزومي الداخلي ، وتشكل فجوات ذات نتوءات أنبوبية تغير نقل الحويصلة. ثم يتم استخدام الجسيمات النانوية ذات...

المصدر: Valentine, M. E., et al. توليد طفرات الحذف الجيني داخل الإطار في الزائفة الزنجارية واختبار توهين الفوعة في نموذج فأر بسيط للعدوى. J. Vis. خبرة. (2020)يوضح هذا الفيديو استخدام التلألؤ البيولوجي لتصور ومقارنة السلوك في الجسم الحي للسلالات البكتيرية الخبيثة والموهنة في الفئران. يحدد تحضير المعلقات البكتيرية المضيئة بيولوجيا وحقنها داخل الصفاق في الفئران. تظهر السلالة الخبيثة انتشارا جهازيا ، بينما تظل السلالة الموهنة موضعية ويتم إزالتها تدريجيا ، كما يتضح من إشارة التلاشي.

المصدر: Guo, S., et al. قياس حركة احتشاد السطح البكتيري على ألواح التدرج المحرض. J. Vis. خبرة. (2022).يوضح هذا الفيديو استخدام لوحة سرب متدرجة مزدوجة الطبقة لدراسة سلوك الاحتشاد البكتيري تحت تركيزات مثبطات متفاوتة. يتم تلقيح صفيحة بها مثبط تشكيل متدرج في الطبقة السفلية بالبكتيريا وتحضينها. يتم التقاط الصور على فترات منتظمة لتحليل تأثير تركيز المثبطات على حشد البكتيريا.

المصدر: Zhang, X., et al. نموذج جنين سمك الزرد للتصور في الجسم الحي والتحليل داخل الحيوية لعدوى المكورات العنقودية الذهبية المرتبطة بالمواد الحيوية. J. Vis. خبرة. (2019)يوضح هذا الفيديو التصوير الفلوري لأجنة أسماك الزرد المحقونة بالمكورات العنقودية الذهبية ، مما يتيح التقدير الكمي لتطور العدوى وتوزيع البكتيريا لتقييم تأثير الكريات المجهرية للمواد الحيوية على تفاعلات المضيف والعامل الممرض في الجسم الحي.

المصدر: Schlimpert، S. et al. تصوير الفاصل الزمني الفلوري لدورة حياة S. venezuelae الكاملة باستخدام جهاز الموائع الدقيقة. J. Vis. Exp. (2016)يوضح هذا الفيديو التصوير بفاصل زمني مضان لدورة الحياة الكاملة لبكتيريا Streptomyces venezuelae باستخدام جهاز موائع دقيقة لتصور الإنبات ونمو الخيط والأبواغ في الوقت الفعلي.

المصدر: Bru, J., et.al. تصوير بفاصل زمني للأسراب البكتيرية والاستجابة الجماعية للإجهاد. J. Vis. خبرة. (2020)يوضح هذا الفيديو كيفية تصور وقياس سلوك تجنب السرب في Pseudomonas aeruginosa باستخدام مقايسة لوحة أجار المحتشدة. يعرض إعداد التصوير بفاصل زمني في ظل ظروف خاضعة للرقابة ويشرح كيف تعيد إشارات الإجهاد الناجم عن المضادات الحيوية توجيه حركة البكتيريا ، والتي يتم قياسها كميا من خلال تحليل الصور.

مصدر: Heering, J., et al.، تحريض التمايز الخلوي وتصوير الخلية المفردة للخلايا الضمة paraheemolyticus والخلايا السرية. J. Vis. خبرة. (2017).يوضح هذا الفيديو تحضير الخلايا السربية من مستعمرة Vibrio parahaemolyticus للتصوير الفلوري. تم المهندس الوراثي للبكتيريا للتعبير عن بروتين موسوم بالفلوروفور يترجم بشكل أحادي القطب في خلايا السباحين وثنائي القطب في الخلايا السربية الممدودة ، مما يسمح بالتمايز البصري. يتم تحضير وسادة الاغاروز على شريحة مجهرية ، حيث يتم وضع قسم مستعمرة وإزالته لترك الخلايا...

المصدر: بينيت ، ج. أ. وآخرون. التقييم البصري والمجهري للطفرات التنموية Streptomyces . J. Vis. خبرة. (2018)يوضح هذا الفيديو استخدام الفحص المجهري لتباين الطور لفحص الاختلافات المظهرية بين النوع البري والطافور Streptomyces coelicolor. يحدد الخطوات المتبعة في إعداد وتصوير الخيوط الهوائية للكشف عن عيوب النمو في تكوين الأبواغ.

المصدر: Chu و W. و Zhuang ، X. تصور الحركة البكتيرية بناء على تفاعل اللون. J. Vis. خبرة. (2022)يوضح هذا الفيديو مقايسة أجار شبه صلبة قائمة على صبغة الأكسدة والاختزال لتقييم الحركة البكتيرية من خلال التمييز بصريا بين السلالات المتحركة وغير المتحركة بصريا.

المصدر: Pioli، R.، et al.، Patterning of Microorganisms والجسيمات الدقيقة من خلال التجميع المتسلسل بمساعدة الشعيرات الدموية. J. Vis. خبرة. (2021)يوضح هذا الفيديو طريقة التقاط خلايا الإشريكية القولونية المفردة الموسومة بالفلورسنت (E. coli) في مصائد الموائع الدقيقة باستخدام تعليق خال من الكربون وتدفق متحكم فيه ، متبوعا بإضافة المغذيات لتحفيز النمو والتصوير الفلوري للمستعمرات الدقيقة.

المصدر: Wen، J.، Pasman، et al.، تصور الجراثيم والغشاء الداخلي في جراثيم العصيات الرقيقة . J. Vis. خبرة. (2019)يوضح هذا الفيديو استخدام الفحص المجهري للإضاءة المنظمة للحصول على صور مضان ثلاثية الأبعاد تكشف عن تنظيم بروتينات الإنبات داخل الأبواغ البكتيرية.

المصدر: Oms, T., et al. تحليل السكان والخلية المفردة لثبات المضادات الحيوية في الإشريكية القولونية. J. Vis. خبرة. (2023)يقدم هذا الفيديو بروتوكولا لمراقبة الخلايا البكتيرية الفردية التي تعبر عن بروتين مرتبط بالحمض النووي المسمى بالفلورسنت داخل نظام الموائع الدقيقة. يوضح كيف تثبط المضادات الحيوية معظم الخلايا ، بينما تنجو مجموعة فرعية من الخلايا الثابتة من العلاج وتنمو مرة أخرى بعد إزالة المضادات الحيوية.

المصدر: موراتا ، ك. وآخرون ، تصور ضغط الحمض النووي في البكتيريا الزرقاء بواسطة التصوير المقطعي بالإلكترون بالتبريد عالي الجهد. J. Vis. خبرة. (2018)يوضح هذا الفيديو الزراعة المتزامنة للبكتيريا الزرقاء في ظل دورات الضوء والظلام لدراسة ضغط الحمض النووي الذي ينظمه الساعة البيولوجية. يكشف الفحص المجهري الفلوري عن الحمض النووي المكثف في نقاط زمنية محددة ، مما يؤكد محاذاة دورة الخلية عبر السكان.

المصدر: Chetrit, D., et al. تطبيق تصوير الخلايا الحية والتصوير المقطعي الإلكتروني بالتبريد لحل السمات الزمانية المكانية لنظام إفراز Legionella pneumophila dot / icm. J. Vis. خبرة. (2020)يوضح هذا الفيديو استخدام التصوير الفلوري للخلايا الحية لتحديد قطبية وديناميكيات مكونات نظام الإفراز في الفيلقية الرئوية ، مما يتيح تحليل التجنيد المكاني وإعادة توزيع العصارة الخلوية أمر بالغ الأهمية لفهم التسبب في...

المصدر: Chetrit, D., et al. تطبيق تصوير الخلايا الحية والتصوير المقطعي الإلكتروني بالتبريد لحل السمات الزمانية المكانية لنظام إفراز Legionella pneumophila dot / icm. J. Vis. خبرة. (2020)يصف الفيديو كيفية تحضير عينات الفيلقية الرئوية للتصوير المقطعي بالتبريد الإلكتروني من خلال الجمع بين الاستزراع البكتيري وعلامات الجسيمات النانوية الذهبية وتقنيات التزجيج. تحافظ العملية على الهياكل الخلوية الأصلية وتمكن من التصوير عالي الدقة لمكونات نظام الإفراز المرتبط بالغشاء.

المصدر: ويبر ، ن. ، وآخرون ، التحول الطبيعي ، وتعبير البروتين ، والحفاظ على التبريد للبكتيريا الزرقاء الخيطية Phormidium lacuna. J. Vis. خبرة. (2022)يوضح هذا الفيديو إجراء تقييم حركة الانزلاق في ثغرة Phormidium عن طريق تجانس مزارع الفتيل لإنشاء تعليق موحد ، وإعداد إعداد فحص لوحة بتري على شريحة مجهر ، وتصور حركة الفتيل.

المصدر: سوروكولوفا، إ.، وآخرون. الوقاية من الآثار السلبية لإجهاد الحرارة في الفئران بواسطة سلالة البكتيريا الجزئية. J. Vis. Exp. (2016)يقدم هذا الفيديو تحليلات نسيجية ومجهرية للدم تستخدم لتقييم التأثيرات الوقائية لعصية العصيا السوبتيليس في الفئران المعرضة للإجهاد الحراري.

المصدر: تشايموفيتز، إ. أ.، وآخرون. القياس المستمر للضوضاء البيولوجية في الإشريكية القولونية باستخدام المجهر المؤقت السري. J. Vis. Exp. (2021)يوضح هذا الفيديو التصوير الفوري للضوضاء البيولوجية في الإشريكية القولونية من خلال تتبع تقلبات فلورة GFP أثناء نمو وانقسام البكتيريا باستخدام المجهر الزمني الفاصل.

المصدر: Fattahi, N., et al. واجهات هيدروجيل قابلة للتحلل الضوئي لفحص البكتيريا واختيارها وعزلها. J. Vis. Exp. (2021)يوضح هذا الفيديو استخدام الهلاميات المائية القابلة للتحلل الضوئي لعزل المستعمرات البكتيرية داخل مصفوفات السيليكون ميكروويل. يتم تحميل الخلايا البكتيرية أولا في الآبار الصغيرة ، وتغليفها في هيدروجيل متشابك ، ويتم زراعتها في مستعمرات متميزة. عند التعرض للأشعة فوق البنفسجية ، يتيح التحلل المستهدف للهيدروجيل الاستخراج الانتقائي للمستعمرات الفردية.

المصدر: Feltwell، T.، et.al. فصل البكتيريا حسب كمية الكبسولة باستخدام تدرج كثافة متقطع. J. Vis. Exp. (2019)يوضح هذا الفيديو تحضير وتوصيف السلالات البكتيرية ذات إنتاج الكبسولات المتفاوت. يتم استزراع السلالات المسببة للأمراض التي تحمل طفرات مختلفة في الجينات المرتبطة بالكبسولة ، وزراعتها في وسط سائل ، وتخضع للطرد المركزي لتمييز الأنماط الظاهرية للكبسولة بناء على كثافة الحبيبات. يستخدم العلاج العازل لغسل الخلايا وتثبيتها مع الحفاظ على هياكل الكبسولات الخاصة بها.

المصدر: Le Nagard، L.، et al. تزايد البكتيريا المغناطيسية من جنس Magnetospirillum: سلالات MSR-1 و AMB-1 و MS-1. J. Vis. Exp. (2018).يوضح هذا الفيديو كيفية استزراع بكتيريا Magnetospirillum في ظل الظروف الهوائية الدقيقة باستخدام كل من الوسائط السائلة وشبه الصلبة. يسلط الضوء على تكوين شريط بكتيري مرئي عند واجهة نقص الأكسجين وهجرته الصاعدة مع استنفاد الأكسجين. يوضح الفيديو أيضا كيفية تقييم السلوك المغناطيسي من خلال مراقبة السباحة الاتجاهية استجابة للمجال المغناطيسي.

المصدر: Valentine, M. E., et al. توليد طفرات الحذف الجيني داخل الإطار في الزائفة الزنجارية واختبار توهين الفوعة في نموذج فأر بسيط للعدوى. J. Vis. خبرة. (2020).يوضح هذا الفيديو توليد المؤتلفات المزدوجة المتقاطعة في Pseudomonas aeruginosa باستخدام استراتيجية حذف الجينات القائمة على البلازميد. تتضمن العملية اختيار البكتيريا التي تحتوي على بلازميد غير متكرر مدمج في الجينوم عبر تقاطع واحد ثم إحداث حدث إعادة تركيب ثان تحت اختيار السكروز لاستئصال البلازميد. يتم تأكيد إعادة التركيب المزدوج الناجح من...

المصدر: Schlimpert, S., et al. تصوير الفاصل الزمني الفلوري لدورة حياة S. venezuelae الكاملة باستخدام جهاز موائع دقيقة. J. Vis. خبرة. (2016)يوضح هذا الفيديو زراعة وعزل الجراثيم من Streptomyces venezuelae. يتم إنتاج الجراثيم ، وهي خلايا نائمة تساعد البكتيريا على البقاء على قيد الحياة من الإجهاد ، أثناء الحد من المغذيات وتجمعها من خلال الطرد المركزي. تضمن الطريقة تعليق بوغ نقي ومخزن على البارد للتطبيقات النهائية.

المصدر: Heering, J., et al. تحريض التمايز الخلوي وتصوير الخلية المفردة للضمة paraheemolyticus السباح والخلايا السرية. J. Vis. خبرة. (2017)يوضح هذا الفيديو تحريض تمايز الخلايا السربية في Vibrio parahaemoemoticus باستخدام وسط أجار معد خصيصا. من خلال التلاعب بالإشارات البيئية مثل استنفاد الحديد ، ومكملات الكالسيوم ، والتلامس السطحي ، يتم تحفيز البكتيريا على الانتقال من شكل السباح إلى خلايا سرب ممدودة مع سوط جانبي. تنتشر هذه الخلايا المتمايزة عبر السطح الصلب ، وتشكل توهجات سرب مميزة تدل على التغيير...

المصدر: Li، J.، et al.، تطوير نموذج لعدوى الزرد اليرقات ل Clostridioides العسيرة. J. Vis. خبرة. (2020)يوضح هذا الفيديو عزل وزراعة بكتيريا المطثية العسيرة من أمعاء يرقات الزرد. يتم تشريح الأمعاء المصابة وتجانسها واحتضانها في وسط لاهوائي انتقائي يحتوي على مضادات حيوية. هذه الظروف قمع الميكروبات المتنافسة وتعزز نمو الخلايا القابلة للحياة.

المصدر: Ayivi ، R. et al. ، زراعة ونمو وقابلية بكتيريا حمض اللاكتيك للحياة: منظور مراقبة الجودة. J. Vis. خبرة. (2022)يوضح هذا الفيديو طريقة استعادة بكتيريا حمض اللاكتيك المجهدة على البارد من مخزون الجلسرين المجمد ، واستعادة قابلية البكتيريا للبقاء من خلال الحضانة اللاهوائية ، وعزل المستعمرات النشطة لتوسيع الثقافة.

المصدر: Kuo, C., et al. الكشف عن استعمار الإشريكية القولونية النزفية المعوية في مضيف الفئران عن طريق نظام التلألؤ البيولوجي غير الغازي في الجسم الحي . J. Vis. خبرة. (2018)يوضح هذا الفيديو تحضير معلق الإشريكية القولونية النزفي المعوي العابر عن لوسيفيراز من المخزون المجمد لاستخدامه كلقاح فموي في النماذج الحيوانية. يتيح ذلك تتبع الاستعمار المعوي في الوقت الفعلي أثناء دراسات العدوى في الجسم الحي.

المصدر: Nathoo, N., et al. نظام زراعة مائية مشتركة للتحليل المتزامن والمنهجي للتفاعلات الجزيئية بين النبات والميكروب والإشارات. J. Vis. خبرة. (2017).يوضح هذا الفيديو نظام الزراعة المشتركة المائية لدراسة تفاعلات النبات والبكتيريا في ظل ظروف معقمة. يتم نقل شتلات النباتات إلى وسط نمو معقم وحمضي ، وتحضينها ، وفحصها بحثا عن التلوث قبل التلقيح ب Agrobacterium. البكتيريا المنشطة تعلق على جذور النباتات, نقل T-DNA إلى الخلايا النباتية, وتعزيز التغيرات الجزيئية التي تعزز الاستعمار البكتيري.

المصدر: فيغيروا ، دي إم ، وآخرون. إنتاج وتصور البلاستيدات الكروية البكتيرية والبروتوبلاستات لتوصيف توطين الببتيدات المضادة للميكروبات. J. Vis. خبرة. (2018)يوضح هذا الفيديو إجراء خطوة بخطوة لتوليد البروتوبلاستات من البكتيريا موجبة الجرام Bacillus megaterium.

المصدر: Eggers، C.H. التلاعب الجيني بوساطة العاثية لمرض لايم Spirochete Borrelia burgdorferi. J. Vis. خبرة. (2022)يوضح هذا الفيديو تحضير مزرعة بوريليا بورجدورفيري المعدلة وراثيا المصممة باستخدام الحمض النووي للعاثيات الخاملة التي تحمل جينا مقاوما للمضادات الحيوية. بعد اختيار المضادات الحيوية وحضانها ، يؤدي المحفز الكيميائي إلى تلف الحمض النووي ، مما يؤدي إلى استئصال وتكرار وتجميع فيريونات جديدة تحتوي على جين المقاومة. بعد الطرد المركزي الثاني وإعادة التعليق ، تكون الخلايا البكتيرية التي تحتوي...

المصدر: موراليس سوتو ، ن. وآخرون ، التحضير والتصوير والقياس الكمي لمقايسات حركة السطح البكتيري. J. Vis. خبرة. (2015)يوضح هذا الفيديو مقايسة حشد باستخدام البكتيريا التي تعبر عن البروتين الفلوري الأخضر لمراقبة حركة السطح على الأجار الناعم. يلتقط التصوير بفاصل زمني التمدد المنسق وتكوين المحلاق ، مما يسلط الضوء على حركة السطح البكتيري.

المصدر: أنور ، ز. ، وآخرون. تخصيب وكشف أنماط السموم من المطثية في عينات الأغذية بالتجزئة. J. Vis. خبرة. (2019).في هذا الفيديو ، يتم استزراع البكتيريا المخفضة للكبريتات في وسط أجار يحتوي على الكبريتات ، حيث تنمو بشكل لاهوائي وتقلل الكبريتيت إلى كبريتيد الهيدروجين ، وتشكل رواسب سوداء مع أيونات الحديد. يتم عزل المستعمرات السوداء من عمق أجار باستخدام تقنيات معقمة ونقلها إلى وسط جديد لاستمرار الحضانة اللاهوائية.

المصدر: Morita, M., et al. زراعة الخلايا البكتيرية على مستوى الخلية المفردة داخل الحويصلات العملاقة. J. Vis. خبرة. (2019).يوضح هذا الفيديو طريقة لزراعة ومراقبة الخلايا البكتيرية الفردية المغلفة داخل حويصلات عملاقة مثبتة على طبقة ثنائية دهنية مدعومة. يتيح النظام تصويرا مستقرا وطويل الأمد لديناميكيات نمو الخلية المفردة في بيئة مكروية محصورة ذات صلة من الناحية الفسيولوجية.

المصدر: Tomás, J. M., et al. توليد طفرات فارغة لتوضيح دور الجليكوزيل ترانسفيراز البكتيري في الحركة البكتيرية. J. Vis. خبرة. (2022).يوضح هذا الفيديو التضخيم المعتمد على البادئ للبلازميد الانتحاري في الإشريكية القولونية. يتكاثر البلازميد ، الذي يحمل جينا لمقاومة المضادات الحيوية ، فقط في وجود بروتين بادئ مشفر بواسطة المضيف. بعد التثقيب الكهربائي والحضانة في وسط الاسترداد ، يتم طلاء الخليط على أجار يحتوي على مضادات حيوية. تبقى البكتيريا التي تحتوي على البلازميد على قيد الحياة ، حيث يسمح البروتين...

المصدر: Cafini, F., et.al. منهجية دراسة نقل الجينات الأفقي في المكورات العنقودية الذهبية. J. Vis. خبرة. (2017)يوضح هذا الفيديو امتصاص الحمض النووي الناجم عن الكفاءة في المكورات العنقودية الذهبية من خلال التحول الطبيعي. يتم استزراع سلالة حساسة للكلورامفينيكول مصممة للتعبير عن عامل سيجما بشكل أساسي في ظل ظروف تحد من المغذيات لتعزيز الكفاءة ، ثم يتم احتضانها بالحمض النووي للمتبرع الذي يحمل جين مقاومة. يتم تأكيد نقل الجينات الناجح من خلال النمو الانتقائي للمحولات المقاومة للكلورامفينيكولات.

المصدر: أندرسون ، كيو إل ، وآخرون ، نظام C. elegans المرضي عالي الإنتاجية ، عالي المحتوى ، قائم على السائل. J. Vis. خبرة. (2018)يوضح هذا الفيديو تحضير بكتيريا تداخل الحمض النووي الريبي (RNAi) التي تحمل البلازميدات لتثبيط التعبير الجيني المستهدف. يحدد خطوات اختيار بكتيريا RNAi ونموها وتحريضها لإنتاج ألواح تعبير dsRNA للمقايسات النهائية.

المصدر: Brodl, E., et al. في الموقع قياس وارتباط كثافة الخلايا وانبعاث الضوء للبكتيريا المضيئة بيولوجيا. J. Vis. خبرة. 1 (2018)يوضح هذا الفيديو زراعة البكتيريا البحرية المضيئة بيولوجيا لمراقبة تنشيط الاكتتاب بوساطة استشعار النصاب لمشغل اللمعان ، مما يتيح المراقبة في الوقت الفعلي للتعبير الجيني وانبعاث الضوء للدراسات في الاتصالات الميكروبية وتنظيم الجينات.

المصدر: جيلمور ، إس إف ، وآخرون. إنتاج مدرج خال من الخلايا وإضافة مساعدة إلى بروتين الغشاء الخارجي الرئيسي المؤتلف من الكلاميديا موريداروم لتطوير اللقاح. J. Vis. خبرة. (2022)يوضح هذا الفيديو التخليق الخالي من الخلايا لمستضدات البروتين الغشائي المستقرة بالقرص النانوي باستخدام نظام مزدوج الحجرة. يحافظ الجهاز على الظروف المثلى لتخليق البروتين الفعال والطي المناسب والتكامل المستقر في الأقراص النانوية.

المصدر: Bru، J.، et al.، تصوير الفاصل الزمني للأسراب البكتيرية والاستجابة الجماعية للإجهاد. J. Vis. خبرة. (2020)يوضح هذا الفيديو إجراء تحليل سلوك الاحتشاد ل Pseudomonas aeruginosa من خلال مراقبة نمو البكتيريا من ثقافة مركزية نحو بقع الأقمار الصناعية التي تحتوي على نفس المزرعة الممزوجة بمضاد حيوي ، باستخدام إعداد لوحة أجار وتصوير الفاصل الزمني.

المصدر: ليو ، بي سي ، وآخرون. تصميم واستخدام الممرض الآلي منخفض التكلفة للتطور التكيفي للبكتيريا تحت اختيار دواء المضادات الحيوية. J. Vis. خبرة. (2016)يوضح هذا الفيديو استخدام شريحة الموائع الدقيقة لتصور ومقارنة نمو ومورفولوجيا سلالات الإشريكية القولونية من النوع البري والمقاومة لتريميثوبريم تحت إجهاد المضادات الحيوية تريميثوبريم.

المصدر: Bhaduri، S.، et al.، ترسيب الكالسيت المستحث ميكروبيولوجيا بوساطة Sporosarcina pasteurii. J. Vis. Exp. (2016)يوضح هذا الفيديو طريقة إثراء Sporosarcina pasteurii باليوريا وكلوريد الكالسيوم لتحفيز نشاط اليورياز ، مما يؤدي إلى تكوين بلورات الكالسيت المرئية من خلال ترسيب الكالسيت الناجم عن الميكروبيولوجيا ، أو MICP.

المصدر: فيغيروا ، دي إم ، et.al. إنتاج وتصور البلاستيدات الكروية البكتيرية والبروتوبلاستات لتوصيف توطين الببتيدات المضادة للميكروبات. J. Vis. خبرة. (2018)يوضح هذا الفيديو إنتاج البلاستيدات الكروية الإشريكية القولونية عن طريق تثبيط انقسام الخلايا أولا للحث على الفتيل ، متبوعا بالهضم الأنزيمي لجدار الخلية. تتضمن العملية إضافة خاضعة للرقابة لعامل مخلب ، DNase ، ومثبت تناضحي لضمان تكوين البلاستيدات الكروية المناسبة واستقرارها للمراقبة المجهرية.

المصدر: كولينز ، إيه جيه ، وآخرون ، إنشاء ثقافات ثنائية مستقرة للبكتيريا السكرية التكافلية من تجويف الفم. J . Vis. خبرة. (2021)يوضح هذا الفيديو إنشاء وصيانة مزرعة ثنائية للبكتيريا السكرية والبكتيريا المضيفة لها عن طريق احتضانها بشكل تسلسلي في وسط نمو خاص بالمضيف.

المصدر: أردوغان ، ف. ، وآخرون ، فحوصات التزاوج المقترنة للتحليل الخاص بالتسلسل لبروتينات النقل المشاركة في الاقتران البكتيري. J. Vis. خبرة. (2017)يوضح هذا الفيديو إجراء نقل البلازميد F من المتبرع إلى المتلقي E. خلايا قولونية باستخدام بلازميد الإنقاذ واختيار المترافق من خلال مقاومة مزدوجة للمضادات الحيوية. تتضمن العملية خلط المزارع البكتيرية ، والحضانة دون اهتزاز ، وتعطيل أزواج التزاوج ، والطلاء على وسائط انتقائية لتأكيد نقل البلازميد بنجاح.

المصدر: تشنغ ، سي ، وآخرون. تعطيل مسببات الأمراض عن طريق التحلل الضوئي للضوء المرئي للريبوفلافين -5′-الفوسفات. J. Vis. خبرة. (2022)يوضح هذا الفيديو طريقة لتقييم التأثيرات السامة ضوئيا لأحادي النوكليوتيدات الفلافين (FMN) على البكتيريا المسببة للأمراض. تتعرض المزارع البكتيرية لتركيزات متزايدة من FMN وتضيء بالضوء المرئي لتوليد أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) التي تلحق الضرر بالمكونات الخلوية. ثم يتم قياس البكتيريا الباقية لتقييم الانخفاض المعتمد على الجرعة في الجدوى.

المصدر: Gupta, S., et al. عزل وتوصيف الحويصلات خارج الخلية التي تنتجها البكتيريا الفطرية محدودة الحديد. J. Vis. خبرة. (2019)يوضح هذا الفيديو إجراء زراعة المتفطرة السلية في ظل ظروف محدودة الحديد للحث على إجهاد الحديد وتعزيز إفراز السيدروفورات التي تدعم بقاء البكتيريا.

المصدر: Niu، L.، et al.، تصور موت الخلايا المحللة للبلاعم أثناء العدوى بالفطريات في أجنة الزرد عبر الفحص المجهري داخل الحيوية. J. Vis. خبرة. (2019)يوضح هذا الفيديو تحضير معلق أحادي الخلية المتفطرة من مزرعة المرحلة المتأخرة للاستخدام المتسق في فحوصات العدوى والتطبيقات النهائية.

المصدر: Paschke, P., et al. الهندسة الوراثية لخلايا Dictyostelium discoideum على أساس الانتقاء والنمو على البكتيريا. J. فيس. إكسب. (2019).يوضح هذا الفيديو إجراء إدخال البلازميد الذي يحمل جينا مستهدفا في خلايا الأميبا عن طريق التثقيب الكهربائي ، متبوعا بالتعافي في مكمل بكتيري لتمكين توصيل الجينات بكفاءة في الأميبا من النوع البري.

المصدر: Gutiérrez، S.، et al.، عزل البلعمات المحتوية على السالمونيلا التيفيموريوم من البلاعم. J. Vis. خبرة. (2017)يوضح هذا الفيديو زراعة وتحضير السالمونيلا التيفيموريوم للحصول على معلق بكتيري نظيف ونشط أيضيا ومناسب للاستخدام التجريبي.

المصدر: Lin, P., et al. توليف كبسولات تونجستات الصوديوم وموليبدات الصوديوم الدقيقة عن طريق إفراز المعادن البكتيرية. J. Vis. خبرة. (2018).يوضح هذا الفيديو تحضير مزرعة بكتيرية وحيدة النسيلة لإنتاج المعادن من خلال التخفيف التسلسلي وعزل المستعمرة على صفيحة أجار. عن طريق هز اللوحة بالخرز الزجاجي ، يتم فصل الخلايا الفردية مكانيا لتشكيل مستعمرات موحدة وراثيا ، والتي يتم نقلها بعد ذلك إلى وسائط سائلة للنمو. يتم اختيار المزرعة ذات التعكر الأعلى ، مما يشير إلى كثافة السكان أحادية النسيلة وأكبر إمكانات...

المصدر: Lin, P., et al. توليف كبسولات تونجستات الصوديوم وموليبدات الصوديوم الدقيقة عن طريق إفراز المعادن البكتيرية. J. Vis. إكسب. (2018).يوضح هذا الفيديو إجراء تصنيع كبسولات أكسيد المعادن الصلبة عن طريق زراعة البكتيريا المختزلة للمعادن مع أيونات المعادن ، متبوعا بالتنقية المتسلسل من خلال الصوتنة والطرد المركزي وغسل الإيثانول.

المصدر: فوكس ، إف إم ، وآخرون. التحقيق في الآثار الضارة لتعقيم البلازما منخفض الضغط على بقاء جراثيم العصيات الرقيقة باستخدام المجهر الخلوي الحية. J. Vis. خبرة. (2017)يوضح هذا الفيديو الإنتاج والتنقية والترسيب القائم على الهباء الجوي لجراثيم Bacillus subtilis لإنشاء طبقة أحادية موحدة ، مما يتيح التطبيقات النهائية مثل التحليل القائم على الفحص المجهري لإنبات الأبواغ أو الجدوى أو الاستجابة للإجهاد.

المصدر: Vieira, J., et al. تصميم وتطوير نموذج لدراسة تأثير الأكسجين الإضافي على ميكروبيوم مجرى الهواء التليف الكيسي. J. Vis. خبرة. (2021).يوضح هذا الفيديو تحضير وسط بلغم اصطناعي يحاكي اللزوجة وتكوين المغذيات ودرجة الحموضة في بلغم الرئة التليف الكيسي. يوفر الوسيط الناتج منصة ذات صلة من الناحية الفسيولوجية للدراسات خارج الجسم الحي.

المصدر: Maurakis، S.، and Cornelissen، C.N. النمو المحدود للمعادن من Neisseria gonorrhoeae لتوصيف الجينات المستجيبة للمعادن والحصول على المعادن من الروابط المضيفة. J. Vis. خبرة. (2020)يوضح هذا الفيديو إجراء زراعة النيسرية البنية في ظل ظروف محدودة المعادن باستخدام وسط محدد مستنفد للمعادن.

المصدر: ناجي ، أ. ، وآخرون. دراسة الإجهاد التأكسدي الناجم عن مجموعة التهاب القامة المكورات العقدية في Caenorhabditis elegans. J. Vis. خبرة. (2019).يوضح هذا الفيديو طريقة زراعة التهاب العقدية في ظل ظروف محبة للهواء الدقيق باستخدام مستخلص خميرة تود هيويت ، أو وسط أجار THY ، لإعداد الثقافات البكتيرية لدراسات تفاعل المضيف والمسببات الممرضة.

المصدر: Venuprasad، K. et al. ، الإدارة داخل القصبة الهوائية للمستدمية النزلية في نماذج الفئران لدراسة التهاب مجرى الهواء. J. Vis. خبرة. (2016)يوضح هذا الفيديو زراعة المستدمية النزلية غير القابلة للكتابة وإعداد لقاح موحد بالجرعة لدراسات الاستعمار أو العدوى.

المصدر: ستيفان ، أ. ، وآخرون ، الفوائد متعددة الأوجه للتعبير المشترك عن البروتين في الإشريكية القولونية. J. Vis. خبرة. (2015)يوضح هذا الفيديو إجراء تحويل الإشريكية القولونية باستخدام بلازميد يحمل جين مقاومة للمضادات الحيوية ، بما في ذلك تحضير الخلايا ، والتثقيب الكهربائي ، والتعافي ، واختيار المحولات.

المصدر: جيانغ ، إتش ، هو ، م. عزل وتوصيف الفيكوبيليسوم السليم في البكتيريا الزرقاء. J. فيس. إكسب. (2021).يوضح هذا الفيديو إجراء زراعة البكتيريا الزرقاء للحصول على الكتلة الحيوية عن طريق زراعة الخلايا تحت إضاءة مستمرة مع إمداد ثاني أكسيد الكربون والظروف الغنية بالمغذيات ، متبوعا بالحصاد عن طريق الطرد المركزي.

المصدر: Wiegand ، D.J. ، Lee ، et al. ، تعبير البروتين الخالي من الخلايا باستخدام بكتيريا الضمة الطبيعية سريعة النمو. J. Vis. Exp. (2019)يوضح هذا الفيديو زراعة وحصاد Vibrio natriegens ، وهي بكتيريا سريعة النمو ، في ظل ظروف تهوية لتحضير الكريات البكتيرية لتوليد المستخلصات الخام.

المصدر: Wiegand, D. J., et al. تعبير البروتين الخالي من الخلايا باستخدام بكتيريا الضمة الطبيعية سريعة النمو. J. Vis. Exp. (2019).يوضح هذا الفيديو تحضير مستخلص خلوي من Vibrio natriegens ، وهي بكتيريا سريعة النمو معروفة بمعدل تخليق البروتين العالي. يتم غسل الحبيبات البكتيرية وتعليقها في عازلة التحلل قبل الصوتنة على الجليد لمنع التدهور الخلوي. يتم طرد المحلل لفصل بقايا الخلايا غير القابلة للذوبان ، ويتم جمع مستخلص الخلية وتجميدها وتخزينها لاستخدامها في المستقبل.

المصدر: Wiegand, D. J., et al. تعبير البروتين الخالي من الخلايا باستخدام بكتيريا الضمة الطبيعية سريعة النمو. J. Vis. Exp. (2019).يوضح هذا الفيديو استخدام نظام تعبير البروتين الخالي من الخلايا البكتيرية يعتمد على محللة البروتين الخام Vibrio natriegens لأداء النسخ والترجمة المقترنة في المختبر. يسلط الضوء على تحضير مزيج رئيسي بالمكونات الأساسية والتوليف خطوة بخطوة للبروتينات الوظيفية من قالب الحمض النووي.

المصدر: جيان ، إكس ، وآخرون ، الزراعة الميكروبية الآلية والتطور التكيفي باستخدام نظام زراعة القطرات الدقيقة الميكروبية (MMC). J. Vis. خبرة. (2022).يوضح هذا الفيديو استخدام نظام زراعة القطرات الدقيقة الميكروبية لدفع التطور التكيفي للبكتيريا نحو تحمل الميثانول. من خلال خلط المزارع البكتيرية المصممة هندسيا مع وسط إجهاد الميثانول العالي وتقسيمها إلى قطرات دقيقة ، يختار النظام الطفرات التي تظهر نموا محسنا تحت إجهاد الميثانول. من خلال دورات التخصيب التكراري وعزل المستعمرة ، يتم استزراع السلالات...

المصدر: ويبر ، ن. ، وآخرون ، التحول الطبيعي ، وتعبير البروتين ، والحفاظ على التبريد للبكتيريا الزرقاء الخيطية Phormidium lacuna. J. Vis. خبرة. (2022)يصف هذا الفيديو إجراء لإجراء التحول الطبيعي في البكتيريا الزرقاء الخيطية باستخدام الحمض النووي البلازميد لتحقيق تعبير GFP مستقر ومقاومة للمضادات الحيوية من خلال إعادة التركيب المتجانس.

المصدر: Wagner ، A. O. ، وآخرون ، التحضير المتوسط لزراعة الكائنات الحية الدقيقة في ظل ظروف لاهوائية / خالية من الأكسجين بشكل صارم. J . Vis. Exp. (2019)يوضح هذا الفيديو تحضير وتطعيم المزارع اللاهوائية باستخدام الحمأة الخالية من الأكسجين في ظل ظروف خاضعة للرقابة الصارمة وغير مؤكسجة.

المصدر: ليا سميث ، دي جيه ، وآخرون. توليد طفرات ملحوظة وبدون علامات في الأنواع الزرقاء النموذجية. J. Vis. خبرة. (2016)يوضح الفيديو طريقة لتوليد طفرات تحمل علامة المضادات الحيوية في البكتيريا الزرقاء. يبدأ البروتوكول بزراعة البكتيريا الزرقاء ، تليها خطوات الطرد المركزي والغسيل التي تحافظ على السطح. ثم يتم إدخال بلازميد يحمل جين مقاومة للمضادات الحيوية محاط بتسلسلات متجانسة. أثناء الحضانة ، يتم استيعاب البلازميد عبر بيلي واستبدال الجين المستهدف من خلال إعادة التركيب المتماثل. يتم استخدام اختيار...

ابدأ بهضم لاهوائي ، وهو مفاعل محكم الغلق وخالي من الأكسجين مزروع بحمأة اصطناعية تحاكي المواد الصلبة المستقرة من مياه الصرف الصحي.تحتوي الحمأة على ميكروبات لاهوائية محبة للميزوفيل ، وهي مجتمع ميكروبي مختلط.تزدهر هذه الميكروبات في درجات حرارة معتدلة وتدفع هضم المواد العضوية للحمأة.امزج الحمأة باستمرار للحفاظ على النشاط البكتيري وتعزيز الهضم.في وقت لاحق ، أضف البلاستيك الحيوي ، وهو بوليمرات قابلة للتحلل ، إلى الحمأة.أثناء الحضانة ، تلتصق البكتيريا المحللة للماء بالبلاستيك الحيوي وتحولها إلى مركبات...

ابدأ ب turbidostat ، وهو جهاز يحافظ على كثافة خلايا ثابتة في الثقافة.يحتوي الجهاز على وعاء به مزرعة بكتيرية ، يتم تهويته باستمرار عن طريق التحريك والحفاظ عليه عند درجة حرارة ثابتة.يصدر الصمام الثنائي الليزر شعاعا ضوئيا ينقسم إلى مسارين.يتم توجيه أحد المسارات إلى مستشعر مرجعي لمراقبة تقلبات شدة الليزر ، بينما يمر الآخر عبر الثقافة.تنتشر الخلايا البكتيرية وتمتص الضوء ، مما يقلل من شدة النقل ، والتي يتم اكتشافها بواسطة جهاز استشعار ثان.يعكس هذا الانخفاض في الشدة تركيز البكتيريا ويتم قياسه على أنه...

ابدأ بسلالة من بكتيريا Pseudomonas aeruginosa ، المعزولة من التربة الملوثة بالزيت ، في وسط يحتوي على مصدر نيتروجين وفائض من زيت الطعام كمصدر للكربون.تقوم هذه السلالة بتجميع بولي هيدروكسي ألكانوات (PHA) ، وهو بوليمر طويل السلسلة مفيد في إنتاج البلاستيك الحيوي.احتضان تحت التحريض لتسهيل التهوية وتعزيز نمو البكتيريا.في البداية ، يوفر الوسيط مصادر الكربون والنيتروجين لدعم تكاثر البكتيريا وتوليد كتلة حيوية عالية.بعد النمو الكبير ، يؤدي استنفاد النيتروجين في الوسط إلى إيقاف المزيد من انقسام الخلايا...

ابدأ بثقافة Alishewanella ، وهي بكتيريا سالبة الجرام وتتحمل الملح.بعد ذلك ، قم بربط المزرعة على ألواح أجار تحتوي على تركيزات متزايدة من كلوريد الصوديوم لمحاكاة مستويات متفاوتة من الإجهاد الملحي.قم بتراكب كل لوحة بطبقة من الوسط غير المتصلب لمنع انتشار الأكسجين والحفاظ على المزرعة في بيئة محدودة الأكسجين.أغلق الألواح واحتضنها في درجة حرارة مثالية لدعم نمو البكتيريا.أثناء الحضانة ، تظهر البكتيريا معدلات نمو متفاوتة عبر الصفائح بتركيزات مختلفة من كلوريد الصوديوم.تطور البكتيريا تحملا للمحلول الملحي...

المصدر: أرياس، إس. إل. وآخرون. تصنيع نانوسيللوز بكتيري مغناطيسي وظيفي باستخدام جسيمات أكسيد الحديد النانوي. J. Vis. Exp. (2016).يوضح هذا الفيديو إنتاج النانوسيلولوز عن طريق زراعة البكتيريا المنتجة للسليلوز في وسط مغذي يحتوي على المانيتول. تقوم البكتيريا باستقلاب المانيتول إلى جلوكوز، ثم يبلمر ويبثق كسلاسل غلوكان تتبلور إلى صفائح سليلوز، مكونة مصفوفة ثلاثية الأبعاد عند واجهة الهواء والسائل. يتم جمع الحبيبات الهلامية الناتجة، وتنقيتها بغسل قلوي ومائي، وتعقيم عن طريق التعقيم لتطبيقات لاحقة.

المصدر: برومفيلد، ك. د. وآخرون، تقنيات المختبر المستخدمة للحفاظ على وتمييز الأنماط الحيوية للعزلات السريرية والبيئية لمرض فيبريو كوليرا . J. Vis. Exp. (2017)يوضح هذا الفيديو نمو الثقافات البكتيرية في وسط سائل. الاهتزاز يعزز التهوية ويوزع العناصر الغذائية بشكل متساو، مما يدعم النمو الأسي وينتج عنه تعليق منتظم ونشط أيضيا مناسب للتطبيقات في المراحل اللاحقة.

المصدر: شوماخر، د.، وآخرون. تصوير الخلايا الحية الفلورية لدورة الخلايا الخضرية الكاملة للبكتيريا الاجتماعية بطيئة النمو Myxococcus xanthus. J. Vis. Exp. (2018)يوضح هذا الفيديو تحضير وتصوير Myxococcus xanthus، وهي بكتيريا تربة بطيئة النمو. تزرع الثقافة في وسط، وتطبق على غطاء مع ميكروكرات فلورية، وتغطيها طبقة أغاروز مدفأة مسبقا لدعم الترطيب وإمداد العناصر الغذائية. يتيح هذا الإعداد التصوير الحي طويل الأمد بالفاصل الزمني للعمليات الخلوية أثناء انقسام الخلايا البكتيري.

المصدر: يانغ، ز.، وآخرون. منصة عالية التدفق لفحص أنواع السالمونيلا /شيجيلا J. Vis. Exp. (2018)يوضح هذا الفيديو التخصيب الانتقائي والتعرف على السالمونيلا باستخدام زيلوز ليسين دي أوكسيكولات (XLD) والأجار الكروموجينيك. مرق السيلينيت يعزز نمو السالمونيلا ، بينما يكشف أجار XLD عن مستعمرات مركزة في السواد من خلال إنتاج كبريتيد الهيدروجين. يؤكد الأجار الكروموجيني الهوية من خلال تكوين الصبغة التي يرسلها الإنزيم، مما يمكن من التعرف على مستوى الأنواع.

المصدر: جونغ، ه.، وآخرون. إجراء التطور التكيفي للكائنات الدقيقة في المختبرات باستخدام الكيموستات. J. Vis. Exp. (2016).يوضح هذا الفيديو العزل الانتقائي ونمو البكتيريا المتكيفة مع الإجهاد من مزرعة تعرضت لظروف إجهاد طويلة الأمد. يتم طلاء الزراعة على أجار يحتوي على الإجهاد، ويتم اختيار مستعمرة واحدة لتطعيم وسط سائل بالمجهد. يتم قياس الامتصاص على فترات منتظمة لمراقبة النمو وتأكيد العزل الناجح للبكتيريا المتكيفة مع الإجهاد.

المصدر: فيليلا، ه. د. م. وآخرون. البحث عن السلالات الميكروبية للمعالجة الحيوية وتطوير البروبيوتيك لأبحاث وحفظ الكائنات الميتا. J. Vis. Exp. (2019).يوضح هذا الفيديو عزل البكتيريا البحرية التي تحلل الملوثات من خلال التخفيف المتسلسل، واختيار المستعمرات، والنمو في وسط يحتوي على EE2. باستخدام EE2 كمصدر كربون وحيد، يحدد البروتوكول السلالات البكتيرية القادرة على استقلاب هذا الملوث البيئي.

المصدر: فيليلا، ه. د. م. وآخرون. البحث عن السلالات الميكروبية للمعالجة الحيوية وتطوير البروبيوتيك لأبحاث وحفظ الكائنات الميتا. J. Vis. Exp. (2019)يوضح هذا الفيديو العزل الانتقائي للبكتيريا البحرية المتحللة للنفط من خلال تخصيب عينات مياه البحر على وسائط قائمة على النفط، مما يمكن من استعادة السلالات النقية التي يمكن استخدامها في معالجة النفط الخام البيولوجية وتنظيف البيئة.

المصدر: بيرينز، سي. وآخرون. تطبيق نظام تعبير محفز لدراسة تداخل عوامل الضراوة البكتيرية مع الإشارات داخل الخلية. J. Vis. Exp. (2015)يوضح هذا الفيديو استخدام نظام تعبير محفز لتحديد المكان الذي يتسبب فيه بروتين المؤثر البكتيري CaeB في تسريع الموتمة المضيفة. يوضح الخطوات اللازمة لتحويل الخلايا المعبرة عن CaeB بنظام يستجيب للتتراسيكلين لتحفيز التعبير الجيني المؤيد للأبوبوتوز بهدف تحديد نقطة الاضطراب داخل السلسلة.

المصدر: وي، د.، وآخرون، إنتاج المواد الكيميائية بواسطة كليبسييلا الرئة باستخدام هيدروليزات الخيزران كمادة خامة. J. Vis. Exp. (2017)يوضح هذا الفيديو التحول الميكروبي للسكريات المشتقة من الخيزران إلى 2,3-بيوتانيديول عن طريق زراعة كلبسييلا الرئة في وسط قائم على التحلل تحت ظروف ميكروهوائية وحمضية خفيفة.

المصدر: هيمريش، ج. وآخرون. بروتوكول تحسين إنتاج البروتينات غير المتجانسة باستخدام تقنية المفاعلات الحيوية الدقيقة الآلية. J. Vis. Exp. (2017).يوضح هذا الفيديو استخدام مفاعل ميكروبيولوجي آلي لمراقبة نمو البكتيريا وإفراز البروتينات الفلورية استجابة لتركيبات وسائط مختلفة. يتم زراعة بكتيريا معدلة وراثيا تعبر عن بروتين فلوري إفرازي تحت الانتقاء المضادي الحيوي وتلقيح في آبار متنوعة من العناصر الغذائية. تمكن القياسات البصرية اللحظية لكثافة الخلايا والفلورة من التحليل المقارن لإنتاج البروتين عبر ظروف...

المصدر: ليا-سميث، دي. جي.، وآخرون. توليد الطفرات الموسومة وبدون علامات في الأنواع الزرقاء النموذجية. J. Vis. Exp. (2016)يوضح هذا الفيديو حفظ السلالات الزرقاء بالتجميد من خلال دمج معلقات الخلايا المركزة مع الجلسرول أو DMSO وتخزينها في درجات حرارة منخفضة، مما يمكن من الحفاظ طويل الأمد على الزراعة الصالحة للتمثيل الضوئي والدراسات الجينية.

المصدر: أرياس، إس. إل. وآخرون. تصنيع نانوسيللوز بكتيري مغناطيسي وظيفي باستخدام جسيمات أكسيد الحديد النانوي. J. Vis. Exp. (2016)يوضح هذا الفيديو تخليق جسيمات المغنيتيت النانوية في الموقع داخل بيليكول نانوسيلوز بكتيري ينتج عن بكتيريا البكتيل الزيلينوس. يشرح كيف يتم توليد النانوسيلولوز البكتيري المغناطيسي من خلال حقن أيونات الحديد، والترسيبات القلوية، والتنقية.

المصدر: روفيان، ج. س. وآخرون، تحليل خلية واحدة لتعبير جينات Pseudomonas syringae داخل نسيج النبات. J. Vis. Exp. (2022)يوضح هذا الفيديو طريقة ضغط تعتمد على الحقنة لاستخراج البكتيريا البلوبلاستية، التي تتكاثر وتشكل مستعمرات دقيقة داخل الأبوبلاست، وهو الفضاء بين الخلايا بين خلايا النبات. تنتج الطريقة عينات بكتيرية خالية من الحطام مناسبة لتحليل الخلايا الأحادية في المراحل النهائية.

المصدر: بيكر، ب.، وآخرون. اختبار تقرير بسيط قائم على الفلورة لتحديد المكونات الخلوية المطلوبة لسلسلة سم الريسين A (RTA) في الخميرة. J. Vis. Exp. (2017)يوضح هذا الفيديو التعبير القابل للتحفيز لسم الريسين الموسوم بسلسلة A (RTA) في الإشريكية القولونية. يوضح الخطوات المتضمنة في الزراعة الانتقائية للبكتيريا المحولة باستخدام بلازميد تعبير مؤتلف، وتحفيز تعبير RTA الموسوم بعلامة His، وتحضير البكتيريا لمزيد من التحليل.

المصدر: Pokhrel، A.، et al. فحص البولي فوسفات غير العضوي في البكتيريا. J. Vis. Exp. (2019).يوضح هذا الفيديو مقايسة لونية لقياس البولي فوسفات غير العضوي (polyP) في العينات البكتيرية. يتضمن الإجراء تحويل polyP إنزيميا إلى فوسفات حر ، والذي يتفاعل بعد ذلك مع الموليبدات وحمض الأسكوربيك لإنتاج مركب أزرق اللون. من خلال مقارنة امتصاص هذا المركب بمنحنى قياسي لتركيزات الفوسفات المعروفة ، يمكن قياس محتوى polyP في العينات البكتيرية بدقة.

المصدر: Choi, H. J., et al. الرحلان المشفي الموائع الدقيقة لفصل البكتيريا سالبة الجرام باستخدام حبات تقارب أبتامر. J. Vis. Exp. (2022)يوضح هذا الفيديو طريقة الفصل الانتقائي للبكتيريا سالبة الجرام عن عينة بكتيرية مختلطة باستخدام الميكروبيدات المطلية ب aptamer والقوى الصوتية داخل شريحة ميكروفيليد.

المصدر: Brodl, E., et al. القياس في الموقع وارتباط كثافة الخلايا وانبعاث الضوء للبكتيريا المضيئة بيولوجيا. J. Vis. Exp. (2018).يوضح هذا الفيديو قياس وارتباط التلألؤ البيولوجي بكثافة الخلايا في البكتيريا المحولة. يتم استخدام مستعمرة بكتيرية واحدة لبدء ثقافة سائلة. يتم وضع المزرعة في بئر بتركيز الخلية المطلوب. يضاف مضاد حيوي ومحفز للتعبير عن الجين المطلوب للتلألؤ البيولوجي البكتيري. تؤخذ قراءات الامتصاص والتلألؤ البيولوجي على فترات منتظمة باستخدام قارئ الألواح.

المصدر: Koeth، L. M.، et al.، طريقة التخفيف الدقيق للمرق المرجعي لاختبار الحساسية في المختبر للبكتيريا التي تنمو هوائيا. J. Vis. Exp. (2015).يوضح هذا الفيديو طريقة التخفيف الدقيق للمرق لتحديد الحد الأدنى للتركيز المثبط (MIC) لمضاد حيوي ليبوغليكوببتيد ضد البكتيريا موجبة الجرام. وهو يغطي عزل المستعمرة البكتيرية ، والتخفيف ، وتلقيح آبار الصفيحة الدقيقة بتركيزات متفاوتة من المضادات الحيوية ، والتحقق من نقاء الثقافة وعدد الخلايا. يشرح الفيديو أيضا كيف يعطل ارتباط المضادات الحيوية تخليق جدار الخلية...

المصدر: Zhang، X. et al. ، نموذج جنين الزرد للتصور في الجسم الحي والتحليل الحيوي لعدوى المكورات العنقودية الذهبية المرتبطة بالمواد الحيوية. J. Vis. خبرة. (2019)يوضح هذا الفيديو نموذج جنين الزرد لدراسة الالتهابات المرتبطة بالمواد الحيوية المزروعة. يعزز حقن المكورات العنقودية الذهبية بالكريات المجهرية من البوليسترين بقاء البكتيريا ، مما يؤكد دور المواد المزروعة في تعزيز العدوى.

المصدر: Yeung، M.، et al. تطوير وسط أجار كروموجيني أكثر حساسية وتحديدا للكشف عن الضمة parahaemolyticus وأنواع الضمة الأخرى. J. Vis. خبرة. (2016)يوضح هذا الفيديو طريقة قائمة على الثقافة لتحديد أنواع الضمة ، مع تسليط الضوء على أجار الكروموجين كبديل أكثر دقة للثيوسلفات - سيترات - الأملاح الصفراوية - السكروز أو أجار TCBS. يوفر الأجار الكروموجينيك تمايزا فائقا لسلالات الضمة من خلال اكتشاف الأنشطة الأنزيمية الخاصة بالأنواع.

المصدر: الأحمر ، ر. ، وآخرون. ثقافة متغير مستعمرة صغيرة من Pseudomonas aeruginosa وكمية الجينات. J. Vis. خبرة. (2020)يوضح هذا الفيديو مقايسة لونية لقياس كمية الألجينات التي تنتجها Pseudomonas aeruginosa ، باستخدام الكاربازول للكشف عن أحماض اليورونيك بعد التحلل المائي للحمض. تتيح هذه الطريقة التحليل المقارن لإنتاج الجينات الطبيعي إلى الكتلة الحيوية البكتيرية في البحوث والدراسات السريرية.

المصدر: الأحمر ، ر. ، وآخرون. ثقافة متغير مستعمرة صغيرة من Pseudomonas aeruginosa وكمية الجينات. J. Vis. خبرة. (2020)يوضح هذا الفيديو مقايسة مناعية لونية لقياس كمية الألجينات ، وهو عديدات السكاريد الخارجية الواقية التي تنتجها Pseudomonas aeruginosa. يتضمن الإجراء طلاء صفيحة دقيقة بالعينة ، وتطبيق أجسام مضادة محددة ، واستخدام تفاعل إنزيم الركيزة لتوليد تغيير لون قابل للقياس. ثم يتم استخدام منحنى قياسي لتحديد تركيز الألجينات بناء على كثافة لون العينة.

المصدر: حسن ، ج. أ. ، وآخرون. تحديد عالي الإنتاجية لمقاومة Pseudomonas syringae الكهروضوئية. طماطم في الطماطم باستخدام فحص فيضان الشتلات. J. Vis. خبرة. (2020).يوضح هذا الفيديو طريقة للكشف عن المقاومة البكتيرية في سلالات الطماطم المختلفة باستخدام شتلات عمرها عشرة أيام ملقحة بمعلق بكتيري. يشرح كيف تغزو البكتيريا من خلال الثغور ، وتقدم بروتينات مستجيبة لقمع مناعة النبات ، وكيف تختلف استجابات النبات بين السلالات الحساسة والمقاومة. يتم تقييم النتيجة من خلال ملاحظة اختلافات النمو المرئية ، حيث تظل...

المصدر: أندرسون ، كيو إل وآخرون. نظام C. elegans Pathosystem عالي الإنتاجية وعالي المحتوى وقائم على السائل. J. Vis. خبرة. (2018)يوضح هذا الفيديو طريقة فحص عالية الإنتاجية باستخدام Caenorhabditis elegans لدراسة ضربات قاضية للجينات أثناء تفاعلات المضيف والعامل الممرض. يحدد إجراء تحضير الديدان القاضية ونقلها إلى ألواح الفحص لتقييم آثار قتل الديدان التي يسببها مسببات الأمراض.

المصدر: Cayron ، J. ، و Lesterlin ، C. تحليل متعدد النطاقات لنمو البكتيريا تحت علاجات الإجهاد. J. Vis. خبرة. (2019)يوضح هذا الفيديو إجراء تقييم الإشريكية القولونية خيوط وتكرار الحمض النووي تحت العلاج بالمضادات الحيوية المثبطة للانقسام الخلوي باستخدام الطلاء لقياس الجدوى وقياس التدفق الخلوي لتحليل حجم الخلية ومحتوى الحمض النووي.

المصدر: تشنغ ، سي ، وآخرون. تعطيل مسببات الأمراض عن طريق التحلل الضوئي للضوء المرئي للريبوفلافين -5′-الفوسفات. J. Vis. Exp. (2022).في هذا الفيديو ، يتم تشعيع خليط تفاعل مخزن مؤقت يحتوي على L-methionine و nitro blue tetrazolium (NBT) و flavin mononucleotide (FMN) بالضوء البنفسجي للحث على إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS). هذا يؤدي إلى تعطيل البكتيريا وتشكيل فورمازان يمكن اكتشافه طيفيا.

المصدر: ويبر ، ن. وآخرون ، التحول الطبيعي ، وتعبير البروتين ، والحفاظ على التبريد للبكتيريا الزرقاء الخيطية Phormidium Lacuna. J. Vis. خبرة. (2022)يوضح هذا الفيديو مقايسة مركزة قائمة على LED لدراسة المحور الضوئي في البكتيريا الزرقاء الخيطية. تهاجر البكتيريا نحو مصدر الضوء ، وتشكل تراكما كثيفا في المركز المضيء ، والذي يتم تصوره وقياسه كميا من خلال تحليل شدة البكسل للصورة...

المصدر: Balczon, R., et al. طرق الكشف عن الأميلويدات السامة للخلايا بعد إصابة الخلايا البطانية الرئوية بالزائفة الزنجارية. J. Vis. خبرة. (2018)يوضح هذا الفيديو بروتوكول تحديد كمية الأميلويدات في المواد الطافية المزرعة من الخلايا البطانية الرئوية المصابة بالبكتيريا الخبيثة ، باستخدام ثيوفلافين تي ، وهي صبغة فلورية ترتبط بهياكل صفيحة بيتا الأميلويد. تشير الزيادة في التألق مقارنة بخط الأساس إلى وجود الأميلويدات في الطافق المزرعة.

المصدر: Speare, L., et al. مقايسة حضانة العملة لقياس التفاعلات التنافسية بين عزلات Vibrio fischeri . J. Vis. خبرة. (2019)يوضح هذا الفيديو مقايسة الحضانة المشتركة المستخدمة لدراسة كيفية تنافس السلالات البكتيرية في بيئة مشتركة. يتم تطبيقه على نطاق واسع في علم الأحياء الدقيقة لتحديد الآليات ، مثل القتل المعتمد على الاتصال أو القتل المستقل عن الاتصال ، التي تدفع هذه التفاعلات.

المصدر: Venkateswaran, S., et al. تحديد عالي الإنتاجية للبوليمرات الطاردة للبكتيريا للأجهزة الطبية. J. Vis. خبرة. (2016)يوضح هذا الفيديو طريقة عالية الإنتاجية لتحديد البوليمرات الطاردة للبكتيريا باستخدام شريحة microarray المعرضة للثقافات البكتيرية المختلطة. يتم تقييم الارتباط البكتيري عن طريق مضان DAPI ، حيث تشير الإشارة المختزلة إلى البوليمرات ذات الحد الأدنى من الارتباط السطحي.

المصدر: Barber, A. E., et al. إعداد وتطبيق جهاز استشعار حيوي بكتيري جديد للكشف المفترض عن بقايا الطلقات النارية. J. Vis. خبرة. (2019).يوضح هذا الفيديو اكتشاف تحليلات معينة باستخدام جهاز استشعار حيوي بكتيري. يتم أخذ مزرعة بكتيرية تحمل بلازميدا بجين بروتين فلوري أحمر (RFP) تحت محفز حساس للتحليل. بعد مسح سطح الاختبار جيدا ، يتم غمر جزء صغير من المناديل في الثقافة واحتضانه. ينشط تفاعل التحليل مع المروج تعبير RFP ، مما يؤكد وجود التحليل المستهدف.

المصدر: Augimeri، R. V. et al. ، باستخدام المركب المطلق للإيثيلين ، 2-حمض كلورو إيثيل فوسفونيك ، كأداة لدراسة استجابة الإيثيلين في البكتيريا. J. Vis. خبرة. (2016)يوضح هذا الفيديو تأثير الإيثيلين الناتج عن حمض 2-كلورو إيثيل فوسفونيك (CEPA) على نمو البكتيريا وإنتاج السليلوز. ينشط الإيثيلين مسارات الإشارات التي تحفز تخليق السليلوز ، مما يؤدي إلى تعزيز تكوين الحبيبات. تسلط هذه النتائج الضوء على الاستجابة البكتيرية للإيثيلين.

المصدر: Cayron ، J. ، et al. تحليل متعدد النطاقات لنمو البكتيريا تحت علاجات الإجهاد. J. Vis. خبرة. (2019).يوضح هذا الفيديو كيفية تحضير واستخدام لوحة الموائع الدقيقة لتصوير الخلايا البكتيرية في ظل ظروف الإجهاد. يحدد عملية إدخال مزرعة بكتيرية ووسط مضاد حيوي محفز للإجهاد ، يليه تحميل الخلايا والإعداد المجهري. ثم يتم استخدام التصوير بفاصل زمني في وضع تباين الطور لمراقبة تطور الخلايا الخيطية الممدودة ذات المحتوى المتزايد من الحمض النووي بسبب انقسام الخلايا المثبط.

المصدر: Sekar، A.، et al. ، طريقة جديدة لتحديد النشاط الطولي المضاد للبكتيريا للمواد المملوءة بالأدوية. J. Vis. خبرة. (2023)يوضح هذا الفيديو مقايسا قائما على اللمعان لتقييم الفعالية المضادة للبكتيريا لشريط بوليمري محمل بالمضادات الحيوية عن طريق تحديد التلميع الذي يحركه ATP ، والذي ينخفض في المزارع البكتيرية المعرضة للمضاد الحيوي.

المصدر: Zhu ، W. ، & Chu ، W. الطريقة البصرية الحساسة للكشف عن البكتيريا المنتجة لكبريتيد الهيدروجين. J. Vis. خبرة. (2022)يوضح هذا الفيديو طريقة بصرية حساسة للكشف السريع عن البكتيريا المنتجة لكبريتيد الهيدروجين. يشير تغير اللون من الأصفر إلى الأسود إلى النشاط البكتيري من خلال تكوين كبريتيد البزموت.

مصدر: بينيت ، ج. أ. ، وآخرون. التقييم البصري والمجهري للطفرات التنموية Streptomyces. J. Vis. خبرة. (2018)يوضح هذا الفيديو الزراعة والمقارنة المظهرية لسلالات Streptomyces coelicolor من النوع البري والطافرة. يحدد إجراءات لتقليل الطفرات التلقائية ، ومنع التلوث المتبادل ، وتعزيز نمو البكتيريا من خلال تقنيات الطلاء المناسبة. أخيرا ، يسلط الفيديو الضوء على الاختلافات المرئية في مورفولوجيا المستعمرة لتوضيح التأثيرات التنموية للطفرات في السلالات البكتيرية.

المصدر: فرانسيس ، إم بي ، وآخرون. الكشف عن شظايا القشرة أثناء إنبات الأبواغ البكتيرية. J. Vis. خبرة. (2016).يوضح هذا الفيديو طريقة قياس الألوان للكشف عن تدهور القشرة أثناء إنبات الأبواغ البكتيرية عن طريق قياس إطلاق السكريات المختزلة بمرور الوقت. باستخدام معايير N-acetylglucosamine وعينات النقطة الزمنية ، يحدد الفحص تركيز السكر من خلال تفاعل كروموجينيك أرجواني ، مما يشير إلى مدى التحلل المائي للقشرة.

المصدر: Stenzler، B. R. et al.، اختبار المستشعر الحيوي اللاهوائي للكشف عن الزئبق والكادميوم. J. Vis. خبرة. (2018)يوضح هذا الفيديو استخدام أجهزة الاستشعار الحيوية البكتيرية المعدلة وراثيا لقياس الجزء المتوفر بيولوجيا من أيونات الزئبق بدقة في ظل الظروف اللاهوائية. من خلال تغيير تركيز كبريتات المغنيسيوم ، يضمن الفحص أن المستشعر الحيوي يستجيب بشكل انتقائي لأيونات الزئبق الحرة ، كما يتضح من التغيرات في شدة التألق.

المصدر: Vidilaseris, K., et al. فحص مثبطات البيروفوسفاتيز المرتبطة بالغشاء Thermotoga maritima . J. Vis. خبرة. (2019)يوضح هذا الفيديو مقايسة لونية لفحص مثبطات البيروفوسفاتيز المرتبط بالغشاء البكتيري (mPPase) عن طريق تحديد إطلاق أورثوفوسفات. تتيح هذه الطريقة تحديد المركبات التي تثبط mPPase من Thermotoga maritima ، وهو هدف محتمل لمضادات الميكروبات.

المصدر: Sarathy، J. P. et al. مقايسة ربط الجبال في المختبر التي تتنبأ باختراق الدواء في آفات السل. J. Vis. خبرة. (2017)يوضح هذا الفيديو مقايسة في المختبر لقياس ارتباط الدواء بالجبن من آفات السل باستخدام غسيل الكلى السريع بالتوازن السريع. يحدد خطوات تحضير معلقات الجبن ، وإجراء غسيل الكلى ، وحساب جزء الدواء غير المرتبط للتنبؤ بتغلغل الدواء في الجبن.

المصدر: Rugjee، K. N. et al. ، إنشاء إعداد عالي الإنتاجية لفحص الجزيئات الصغيرة التي تعدل إشارات c-di-GMP في الزائفة الزنجارية. J. Vis. خبرة. (2016)يوضح هذا الفيديو توليد سلالة مراسل دورية مستجيبة ل di-GMP في Pseudomonas aeruginosa باستخدام التثقيب الكهربائي. يتم تأكيد التحول الناجح من خلال اختيار المضادات الحيوية والتحليل القائم على...

المصدر: Rugjee, K. N., et al. إنشاء إعداد عالي الإنتاجية لفحص الجزيئات الصغيرة التي تعدل إشارات c-di-GMP في Pseudomonas aeruginosa. J. Vis. خبرة. (2016).يوضح هذا الفيديو فحص معدلات di-GMP الدورية باستخدام البكتيريا المعدلة وراثيا التي تعبر عن بروتين الفلورسنت الأخضر (GFP) تحت سيطرة محفز حساس ل c-di-GMP. يتم قياس التألق في صفيحة متعددة الآبار تحتوي على مركبات اختبار مختلفة. المركبات التي تمنع إنتاج c-di-GMP تؤدي إلى انخفاض التألق. ثم يتم تحليل البيانات لتحديد المعدلات المحتملة لإشارات c-di-GMP...

المصدر: تشابمان ، آي جيه ، وآخرون ، تحسين المسبار الجزيئي لتحديد وفيات الخلايا في كائن حي التمثيل الضوئي (Microcystis aeruginosa) باستخدام قياس التدفق الخلوي. J. Vis. خبرة. (2016)يوضح هذا الفيديو طريقة التمييز بين خلايا Microcystis aeruginosa الحية والميتة من خلال الجمع بين وضع العلامات على مسبار الفلورسنت وتحليل قياس التدفق الخلوي للمضان الذاتي للفيكوسيانين وإشارة المسبار.

المصدر: نيكلينج ، جي إتش ، et.al. الببتيدات المضادة للميكروبات التي يتم إنتاجها عن طريق دمج الضغط الانتقائي للأحماض الأمينية غير القانونية. J. Vis. خبرة. (2018)يوضح هذا الفيديو مقايسة انتشار بئر أجار المستخدمة لتقييم النشاط المضاد للميكروبات لمتغيرات النينسين. يوضح كيف أن Lactococcus lactis التي تعبر عن الببتيداز المرتبط بالغشاء NisP تنشط سلائف النيسين المنتجة في الإشريكية القولونية ، مما يؤدي إلى هالات تثبيط النمو. يعكس حجم هذه الهالات النشاط الحيوي لكل متغير من أنواع النسين.

المصدر: Tokunou، Y.، et al، الكشف الكهروكيميائي عن تأثير نظائر الديوتيريوم الحركية على نقل الإلكترون خارج الخلية في Shewanella oneidensis MR-1. J. Vis. خبرة. (2018)يوضح هذا الفيديو طريقة كهروكيميائية للخلية الكاملة لتقييم كيفية تأثير نقل البروتون على نقل الإلكترون خارج الخلية (EET) في البكتيريا النشطة كهربائيا. من خلال استبدال البروتونات بالديوتيرونات باستخدام أكسيد الديوتيريوم ، تقيس الطريقة التغيرات في التيار للكشف عن تأثير النظائر الحركية ، مما يسلط الضوء على دور حركة البروتون في تنظيم تدفق...

المصدر: دودج ، ر. ، وآخرون. عد وحدة تشكيل مستعمرة سريعة في شكل لوحة 96 بئرا مطبقة على ذبابة الفاكهة الميكروبيومية. J. Vis. خبرة. (2023)يوضح هذا الفيديو التقدير الكمي لوحدات تكوين المستعمرة (CFUs) للبكتيريا المرتبطة بالأمعاء في ذبابة الفاكهة باستخدام نهج التخفيف والطلاء التسلسلي. يتم تخفيف عينات الذباب المتجانسة التي تحتوي على بكتيريا الأمعاء بشكل متسلسل ، ومطلية بالأجار ، واحتضانها للسماح بنمو المستعمرة. ثم يتم تحليل صور اللوحات باستخدام برنامج لمحاذاة المستعمرات وتقسيمها وعدها في كل بقعة ، مما...

المصدر: موراكيس، س.، وآخرون. النمو المحدود للمعادن من النيسرية البنية لتوصيف الجينات المستجيبة للمعادن والحصول على المعادن من الروابط المضيفة. J. Vis. خبرة. (2020).يوضح هذا الفيديو مقايسة نمو البكتيريا المحدودة للمعادن لدراسة دور الجينات المستجيبة للمعادن. يتم تحضين البكتيريا من النوع البري والطافرة المزروعة في وسط مستنفد للمعادن باستخدام الترابط المعدني ، ويتم مراقبة نموها باستخدام قارئ لوحات. في ظل الظروف المستنفدة للمعادن ، تعبر البكتيريا البرية عن مستقبلات سطحية تمكن من امتصاص المعادن ونمها...

المصدر: Maurakis، S.، and Cornelissen، C.N. النمو المحدود للمعادن من Neisseria gonorrhoeae لتوصيف الجينات المستجيبة للمعادن والحصول على المعادن من الروابط المضيفة. J. Vis. خبرة. (2020)يوضح هذا الفيديو إجراء الكشف عن ناقلات المعادن السطحية في النيسرية البنية المزروعة في ظل ظروف محدودة المعدن باستخدام مقايسة لطخة نقطية ، بما في ذلك ربط الترابط ، واكتشاف الأجسام المضادة ، والتصور اللوني.

المصدر: Chen، Y.، et al.، قياس معدلات الترجمة الخاطئة للبكتيريا الفطرية المحددة باستخدام أنظمة المراسل لكسب الوظيفة. J. Vis. خبرة. (2019)يوضح هذا الفيديو طريقة لقياس الترجمة الخاطئة في المتفطرة smegmatis باستخدام نظام GFP المحثي ونظام مراسل لوسيفيراز المتحور المفرز. يوضح كيف يتم قياس التلألؤ الناتج عن الترجمة الخاطئة ومقارنته بمضان GFP لتقييم تأثير جزيء الاختبار على الدقة الانتقالية.

المصدر: جيلمور ، إس إف وآخرون. إنتاج مدرج خال من الخلايا وإضافة مساعدة إلى بروتين الغشاء الخارجي الرئيسي المؤتلف من الكلاميديا موريداروم لتطوير اللقاح. J. Vis. خبرة. (2022)يوضح هذا الفيديو استخدام النشاف الغربي لتقييم السلامة الهيكلية لبروتين الغشاء الخارجي الرئيسي (MOMP) داخل مجمعات اللقاحات القائمة على الجسيمات النانوية. يحدد الخطوات الرئيسية المتضمنة في نقل البروتين ، ووضع العلامات على الأجسام المضادة ، والتصوير الفلوري.

المصدر: ستيفان ، أ. ، وآخرون. الفوائد متعددة الأوجه للتعبير المشترك عن البروتين في الإشريكية القولونية. J. Vis. خبرة. (96) ، (2015).يوضح هذا الفيديو تقييم تكرار الطفرات في البكتيريا باستخدام مقايسة بيتا جلوكوزيديز. يتم جمع الثقافات البكتيرية التي تعبر عن بوليميراز الحمض النووي الذي يعاني من نقص التدقيق اللغوي على مدى أجيال متعاقبة. قد تؤدي أخطاء النسخ المتماثل الناتجة عن انخفاض التدقيق اللغوي إلى تنشيط جين بيتا جلوكوزيداز المكبوت. بعد الطرد المركزي والنفاذية ، تتم إضافة ركيزة ، ويتم قياس نشاط...

المصدر: Jian، X. وآخرون، الزراعة الميكروبية الآلية والتطور التكيفي باستخدام نظام زراعة القطرات الدقيقة الميكروبية (MMC). J. Vis. خبرة. (2022)يوضح هذا الفيديو استخدام منصة قائمة على قطرات الموائع الدقيقة لمراقبة نمو البكتيريا في الوقت الفعلي. من خلال توليد قطرات موحدة تحتوي على معلقات بكتيرية وتوجيهها عبر مسار الكشف ، يتيح النظام القياس البصري المستمر لكثافة الخلية لبناء منحنى النمو.

خذ مزرعة من Corynebacterium glutamicum ، المحولة باستخدام بلازميد يحمل جين مراسل الفلورسنت في اتجاه مجرى النهر من الحمض النووي الريبي المضاد للإنهاء أو تسلسل RAT ، في صفيحة متعددة الآبار.أثناء النسخ ، يشكل RAT-RNA بنية حلقة جذعية تمنع بوليميراز الحمض النووي الريبي ، مما يوقف التعبير الجيني للمراسل.يعبر البلازميد أيضا بشكل أساسي عن LicV ، وهو بروتين اندماج يشتمل على بروتين ربط RAT-RNA ، LicT ، ومجال VVD الحساس للضوء الأزرق.في الظلام ، يظل LicV أحادي اللون ولا يرتبط بالحلقة الجذعية RAT-RNA ،...

ابدأ بملاط يحتوي على خلايا بكتيرية معالجة بجزيئات نانوية فضية معلقة في مصفوفة عديد السكاريد الخارجي.أضف حاجزا من الفوسفات إلى الملاط للحفاظ على درجة حموضة ثابتة.بعد ذلك ، أدخل محلولا يحتوي على الجلوكوز ومؤشر أكسدة الاختزال القابل للذوبان ، ثم احتضن الخليط. يعمل مؤشر الأكسدة والاختزال كمتقبل للإلكترون.أثناء الحضانة ، يدخل الجلوكوز ومؤشر الأكسدة والاختزال إلى الخلايا البكتيرية النشطة أيضيا.تستخدم الخلايا الجلوكوز أثناء التنفس ، وتولد الإلكترونات.تقلل هذه الإلكترونات من مؤشر الأكسدة والاختزال إلى...

خذ التخفيفات التسلسلية للثقافة البكتيرية وأضف الكميات المنخفضة إلى قوارير السعرات الحرارية التي تحتوي على وسط النمو.قم بتحميل القوارير المختومة في لوحة متعددة الآبار لمقياس السعرات الدقيقة متساوي الحرارة لقياس إنتاج الحرارة الأيضية.يتم الاحتفاظ بالجهاز عند درجة حرارة ثابتة لضمان أن الحرارة المكتشفة تنشأ فقط من التمثيل الغذائي البكتيري.عندما تقوم البكتيريا باستقلاب العناصر الغذائية وتتكاثر ، فإنها تطلق الحرارة التي تكتشفها المستشعرات في الوقت الفعلي.في موازاة ذلك ، احتضان قوارير متطابقة في حاضنة.

المصدر: علي، إ.، وآخرون. فحص عالي الإنتاجية للعزلات الميكروبية مع تأثير على صحة التهاب الجينورهابيديتس الدماغي . J. Vis. Exp. (2022)يوضح هذا الفيديو اختبارا فلورية عالي الإنتاجية لتقييم كيفية تأثير بكتيريا الأمعاء على مرونة التوتر في التهاب الكاينورهابديتس الأمريكي. من خلال تتبع الفلورة الزرقاء الناتجة عن حبيبات الأمعاء الممزقة، يكشف الاختبار عن إشارات موت مبكرة في الديدان المعرضة لبكتيريا الاختبار.

المصدر: سوتليف، أ. ل.، وآخرون. تحليل الخلايا الحية لإجهاد القص على Pseudomonas aeruginosa باستخدام نظام ميكروفلويديك آلي عالي الإنتاجية. J. Vis. Exp. (2019).يوضح هذا الفيديو تحضير صفيحة ميكروفلويدية لدراسات إجهاد القص في المزارع البكتيرية. بعد تمهيد القنوات بالوسط، تدخل الخلايا البكتيرية إلى القناة التجريبية وتحضنها للثبيت. تزال الوسائط المتبقية والثقافة لتحضير النظام لتجارب إجهاد القص اللاحقة.

المصدر: برومفيلد، ك. د. وآخرون. تقنيات مختبرية تستخدم للحفاظ على وتمييز الأنماط الحيوية للفيبريو كوليرا بين العزلات السريرية والبيئية. J. Vis. Exp. (2017)يظهر هذا الفيديو اختبارا ناعما باستخدام كلوريد ثلاثي فينيل تيترازوليوم لتقييم ومقارنة حركة سلالات فيبريو كوليرا من خلال تصوير النشاط الأيضي من خلال تكوين المنطقة الحمراء حول الخلايا المهاجرة بنشاط.

المصدر: برومفيلد، ك. د. وآخرون، تقنيات المختبر المستخدمة للحفاظ على وتمييز الأنواع الحيوية للعزلات السريرية والبيئية لمرض فيبريو كوليرا . J. Vis. Exp. (2017).يوضح هذا الفيديو اختبار فوجيس-بروسكوير (VP) للتمييز بين ثلاثة أنواع حيوية من الكوليرا الفيبريو: الكلاسيكي، النوع البري من إل تور، ونوع إل تور. يتم تلقيح كل مزرعة في وسط يحتوي على الجلوكوز، ويتم حضنها، ومعالجتها ب α-نفثول وهيدروكسيد البوتاسيوم للكشف عن وجود الأسيتوين. يلاحظ لون وردي-أحمر، يشير إلى تفاعل إيجابي في VP، فقط في النوع الحيوي...

المصدر: ميتريك، ك. أ.، لورانس، وآخرون، تحفيز انسداد تكرار محدد الموقع في الإشريكية القولونية باستخدام نظام مشغل كبح فلوري. J. Vis. Exp. (2016)يظهر هذا الفيديو انسداد شوكة النسخ الخاصة بالموقع في الإشريكية القولونية باستخدام التعبير الناتج عن الأرابينوز لمادة TetR الفلورية الأصفر الموسومة التي ترتبط بمصفوفات التيتو الكروموسوماتية.

المصدر: دومسل، ك. ج. وآخرون. تضخيم إيزوثيرمالي بالحلقات لفحص السالمونيلا في الغذاء الحيواني وتأكيد السالمونيلا من العزل الزرعي. J. Vis. Exp. (2020).يوضح هذا الفيديو تقنية التضخيم المتساوي الحراري الوسيطة بالحلقة (LAMP) لاكتشاف جين بكتيريا مستهدفا عن طريق تضخيم الحمض النووي عند درجة حرارة ثابتة. يتم تحضير خليط التفاعل بإضافة خليط رئيسي متساوي الحرارة، وبادئات محددة للجين المستهدف، وعينات تحتوي على قوالب DNA. يبدأ التضخيم باستخدام جهاز LAM، ويتم مراقبة الفلورة في الوقت الحقيقي لتأكيد وجود الجين...

المصدر: أيغرين، إل. وآخرون. الاستيعاب والمراقبة للجزيئات الحيوية الفلورية في الكائنات الدقيقة الحية عبر الحفر الكهربائي. J. Vis. Exp. (2015)يوضح الفيديو كيفية توصيل الجزيئات الحيوية الفلورية إلى خلايا ميكروبية كهروفية باستخدام الحفر الكهربائي. تبدأ العملية بإدخال حمض نووي أو بروتينات موسومة بالفلوروفور إلى نظام تعليق الخلايا المبرد. ثم يتم تطبيق نبضة عالية الجهد لإنشاء مسام غشائية مؤقتة، مما يمكن دخول الجزيئات الحيوية إلى السيتوبلازم. بعد الاستعادة، تخضع الخلايا للغسل والترشيح لإزالة الجزيئات...

المصدر: كوروكاوا، م.، وآخرون. تحليل دقيق وعالي الإنتاجية لنمو البكتيريا. J. Vis. Exp. (2017)يوضح هذا الفيديو القياس العالي لنمو البكتيريا باستخدام قارئ الميكروبلايت. يوضح الخطوات المتعلقة بتحضير الزرعة، وقياس الكثافة البصرية، وتحليل ديناميكيات النمو.

المصدر: دال، ج. وآخرون. اكتشاف النشاط المعتمد على الرقم الهيدروجيني لمادة الإشريكية القولونية Chaperone HdeB في المختبر وفي الجسم الحي. J. Vis. Exp. (2016)يعرض هذا الفيديو اختبارا يعتمد على مطياف الفلورة لتقييم نشاط الشابرون على بروتين الركيزة تحت إجهاد الحمض والحرارة. يوضح الخطوات لمراقبة تطور الركيزة وتجمعها من خلال تشتت الضوء، ويقارن الظروف مع وبدون المرافق المراقب.

المصدر: دال، ج. وآخرون. اكتشاف النشاط المعتمد على الرقم الهيدروجيني لمادة الإشريكية القولونية Chaperone HdeB في المختبر وفي الجسم الحي. J. Vis. Exp. (2016)يوضح هذا الفيديو استخدام مزارع الإشريكية القولونية المؤتلفة لتقييم التأثير الوقائي لشابرون المنشط بالحمض أثناء الإجهاد الحمضي. تكشف مراقبة نمو البكتيريا عن بقاء أفضل في المزارع التي تعبر عن الشابرونات مقارنة بالمجموعة الضابطة، مما يبرز دور الشابرونات في استقرار البروتين تحت ظروف الإجهاد.

المصدر: ستينوم، ت. س. وآخرون. قياس كمية ومستويات الشحن للحمض النووي الريبي الناقل في الإشريكية القولونية. J. Vis. Exp. (2017)يوضح هذا الفيديو استخدام الرحلان الكهربائي الهلامي وإزالة الطلاء الشمالي للكشف ومقارنة مستويات شحن الحمض النووي الريبي الناقل في الإشريكية القولونية عن طريق فصل الأشكال الأمينية والخالية من العصفورات.

المصدر: جولا، س. وآخرون. تحليل متكرر متعدد المواقع متعدد الأرقام المتغيرة لبكتيريا يرسينيا روكيري الممرضة للأسماك بواسطة PCR متعدد القنوات والرحلان الكهربائي الشعري. J. Vis. Exp. (2019).يوضح هذا الفيديو إجراء فصل الأمبليكونات التكرارية المتتالية ذات الرقم المتغير (VNTR) الموسومة بالفلورية، المشتقة من بكتيريا ممرضة للأسماك، باستخدام الرحلان الكهربائي الشعري لإنشاء ملفات إلكترونية محددة بالحجم لتحديد البكتيريا.

المصدر: هوكيت، ك. ل.، وبالتروس، د. أ. استخدام تقنية تراكب الأجار الناعم لفحص المركبات المثبطة الناتجة عن البكتيريا. J. Vis. Exp. (2017)يوضح هذا الفيديو إجراء اكتشاف القتل الناتج عن البكتيريوسين عن طريق رصد الفائض من سلالة متبرع ناتجة عن مضاد حيوي على طبقة أجار ناعمة تحتوي على سلالة اختبارية. المناطق الشفافة التي تتكون بعد الحضانة تشير إلى تثبيط البكتيريا.

المصدر: كابين، م. ت. وآخرون. تحليل الميكروفلويد أحادي الخلية لباسيلوس سبتيليس. J. Vis. Exp. (2018)يوضح الفيديو استخدام جهاز ميكروفلويديك لمراقبة نمو البكتيريا على مستوى الخلية الواحدة. يعرض كيف يتم تغذية الخلايا البكتيرية غير المتحركة، المحصورة داخل خنادق على نطاق دقيق، بشكل مستمر وتصويرها تحت مجهر فلوري. يتيح هذا الإعداد التصور الفوري لتتبع انقسام الخلايا وتتبع النسب عبر أجيال متعددة.

المصدر: شيدويلر، د.، وآخرون. دمج الأجهزة السائلة مع المجهر وقياس التدفق الخلوي لدراسة نقل الميكروبات في الأوساط المسامية عبر المستويات المكانية. J. Vis. Exp. (2020).يوضح هذا الفيديو استخدام جهاز ميكروفلويديك لقياس حركة البكتيريا من خلال مصفوفة مسامية مكونة من أعمدة مرتبة عشوائيا. يتم إدخال بكتيريا معلمة بالفلورية إلى الجهاز، ويتم تصويرها عبر المجهر أثناء تحركها عبر المصفوفة المسامية إلى قناة المراقبة، ويتم تحليلها لتوليد منحنى اختراق (BTC).

المصدر: كيم، ه. وآخرون، الفحص متعدد الإنزيمات باستخدام نظام فحص إنزيمات جينية عالي الإنتاجية. J. Vis. Exp. (2016)يوضح هذا الفيديو طريقة فحص جيني للكشف عن تعبير الإنزيمات باستخدام مكتبات فوسميدات ميتاجينومية وركائز كروموجينية. يحدد التدفق الخلوي ويعزل الخلايا المفردة المنتجة منتجات ملونة، مما يتيح اختيار عالي الإنتاجية للخلايا النشطة المعبرة عن الإنزيمات.

المصدر: سامويلز، د. ج. وآخرون. نهج قائم على الكروماتوغرافيا السائلة المزدوجة – مطياف الكتلة لتحليل المستقلبات للمكيرات العنقودية الذهبية. J. Vis. Exp. (2017)يوضح هذا الفيديو استخدام الكروماتوغرافيا السائلة-مطيافية الكتلة لتحديد وقياس المستقلبات داخل الخلايا من S. aureus. يوضح الخطوات المتضمنة في استخراج المستقلبات، وتطبيع الببتيدات، والكروماتوغرافيا السائلة، والتحليل الطيفي الكتلي.