عزل الحمض النووي الريبي البكتيري المستهدف المرتبط بالحمض النووي الريبي التنظيمي الصغير باستخدام تنقية التقارب

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Mercier، N.، وآخرون، تنقية MS2-Affinity إلى جانب تسلسل الحمض النووي الريبي في البكتيريا موجبة الجرام. J. Vis. Exp. (2021)

يوضح هذا الفيديو عزل الحمض النووي الريبي التنظيمي الصغير (sRNA) المرتبط بالحمض النووي الريبي البكتيري المستهدف باستخدام تنقية التقارب مع اندماج بروتين معطف المالتوز (MBP) - MS2 الثابت على راتنج الأميلوز.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المخازن المؤقتة والوسائط

لتجارب MAPS ، قم بإعداد المخازن المؤقتة والوسائط التالية: - Buffer A (150 ملي KCl ، 20 ملي Tris-HCl pH 8 ، 1 ملي ملي MgCl₂ و 1 ملي DTT) - العازلة E (250 ملي KCl ، 20 ملي Tris-HCl درجة الحموضة 8 ، 12 ملي مالتوز ، 0.1٪ تريتون ، 1 ملي مللي كلوريد₂ و 1 ملي مولار DTT)

تحضير

العمود

تنبيه: احرص على عدم ترك راتنج الأميليوز يجف. إذا لزم الأمر ، أغلق العمود بغطاء نهاي. تحضير جميع المحاليل قبل البدء في تنقية التقارب.

ضع عمود كروماتوغرافيا في رف أعمدة.
قم بإزالة طرف العمود واغسل العمود بالماء فائق النقاء.
أضف 300 ميكرولتر من راتنج الأميلوز.
اغسل العمو....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فئة الشكل = 'الصورة image_resized image-style-align-center' style='display:table;margin-left:auto;margin-right:auto;width:75٪;'> figure-results-1

الشكل 1. رسم تخطيطي لبروتوكول MAPS تم تكييفه مع المكورات العنقودية الذهبية. من بناء البلازميد إلى تحليل البيانات.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

<فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-resize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 1.5 مل أنبوب الطرد المركزيالدقيق Sarstedt72.690.001 15 مل أنابيب الطرد المركزيFalcon352070 2 مل أنبوب الطرد المركزيالدقيق Starstedt72.691 قارورة ثقافة 250 ملدومينيك دوتشر2515074الثقافات البكتيرية50 مل أنابيب الطرد المركزيفالكون352051الثقافة الطرد المركزيراتنج الأميلوزنيو إنجلاند BioLabsE8021SMS2-تقارب تنقيةpMBP-MS2Addgene65104MS2-MBP إنتاجعمود كروماتوغرافيا Poly-PrepBioRad7311550تنقية MS2

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

عزل الحمض النووي الريبي البكتيري المستهدف المرتبط بالحمض النووي الريبي التنظيمي الصغير باستخدام تنقية التقارب

في هذه المقالة

الملخص

البروتوكول

النتائج

المواد

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

مقالات ذات صلة