فصل البكتيريا حسب كمية الكبسولة باستخدام تدرج الكثافة المتقطع

الملخص

المصدر: Feltwell، T.، et.al. فصل البكتيريا حسب كمية الكبسولة باستخدام تدرج كثافة متقطع. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو استخدام تدرج كثافة متقطع لفصل السلالات البكتيرية بناء على كمية الكبسولة من خلال الطرد المركزي لمكتبة متحولة من خلال التدرج ، تتمركز البكتيريا ذات الكثافات المختلفة إلى طبقات متميزة. يمكن بعد ذلك جمع الكسور المنفصلة لتحليلها في اتجاه مصب

البروتوكول

1. إضافة الخلايا المحضرة إلى التدرجات والفصل عن طريق الطرد المركزي

1. أضف 600 ميكرولتر من الخلايا المحضرة إلى الجزء العلوي من التدرج في الأنبوب ببطء شديد ودون خلط الواجهة.
2. ضع الأنابيب في محولات الأنبوب وقم بوزن المحولات والأنابيب المدمجة للتأكد من توازنها.
   1. ضع محولات الأنبوب في دوار بزاوية ثابتة داخل جهاز طرد مركزي أعلى مقاعد البدلاء. جهاز طرد مركزي لمدة 30 دقيقة عند 3,000 × جم.
   2. بعد الطرد المركزي ، قم بإزالة الأنابيب بعناية ، وضعها في رف مناسب ، وتصوير النتائج كسجل.
3. استعادة الكسور البكتيرية لقياس كمية حمض اليورونيك أو استخراج الحمض النووي.
   1. إذا لم تكن التطبيقات النهائية مطلوبة، فتخلص من العينات/التدرجات عبر مسار النفايات البيولوجية السائلة المناسب في المختبر.
      ملاحظة: من المهم التحقق من صحة الفصل لأنواع / سلالات جديدة من البكتيريا. يجب فحص الكسور الفردية من التدرج عن طريق الفحص المجهري أو عن طريق فحص حمض اليورونيك أو أي اختبار كمي آخر مناسب لتأكيد النمط الظاهري للكبسولة لكل جزء. إذا كان الهدف هو الفصل بناء على التجميع أو حجم الخلية ، فيجب استخدام فحوصات مناسبة مستقلة.

المواد

<فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-resize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات PercollGE Healthcare17-0891-01 الطرد المركزي 5810R مع دوار A-4-81 ودلاء 500 ملEppendorf5810 718.007 محولات لأنابيب 15 ملEppendorf5810 722.004دوار بزاوية ثابتة F-34-6-38Eppendorf5804 727.002 2.6 - 7 مل محول أنبوبEppendorf5804 739.000 جهاز طرد مركزي 5424 بما في ذلك الدوار FA-45-24-11Eppendorf5424 000.460 5 مل من مادة البولي بروبيلين أنبوب القاع المستديرFalcon352063