Method Article

فصل البكتيريا حسب كمية الكبسولة باستخدام تدرج الكثافة المتقطع

August 29th, 2025

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Feltwell، T.، et.al. فصل البكتيريا حسب كمية الكبسولة باستخدام تدرج كثافة متقطع. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو استخدام تدرج كثافة متقطع لفصل السلالات البكتيرية بناء على كمية الكبسولة من خلال الطرد المركزي لمكتبة متحولة من خلال التدرج ، تتمركز البكتيريا ذات الكثافات المختلفة إلى طبقات متميزة. يمكن بعد ذلك جمع الكسور المنفصلة لتحليلها في اتجاه مصب

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. إضافة الخلايا المحضرة إلى التدرجات والفصل عن طريق الطرد المركزي

  1. أضف 600 ميكرولتر من الخلايا المحضرة إلى الجزء العلوي من التدرج في الأنبوب ببطء شديد ودون خلط الواجهة.
  2. ضع الأنابيب في محولات الأنبوب وقم بوزن المحولات والأنابيب المدمجة للتأكد من توازنها.
    1. ضع محولات الأنبوب في دوار بزاوية ثابتة داخل جهاز طرد مركزي أعلى مقاعد البدلاء. جهاز طرد مركزي لمدة 30 دقيقة عند 3,000 × جم.
    2. بعد الطرد المركزي ، قم بإزالة الأنابيب بعناية ، وضعها في رف مناسب ، وتصوير النتائج كسجل.
  3. استعادة الكسور البكتيرية لقياس كمية حمض اليورونيك أو استخراج الحمض النووي.
    1. إذا لم تكن التطبيقات النهائية مطلوبة، فتخلص من العينات/التدرجات عبر مسار النفايات البيولوجية السائلة المناسب في المختبر.
      ملاحظة: من المهم التحقق من صحة الفصل لأنواع / سلالات جديدة من البكتيريا. يجب فحص الكسور الفردية من التدرج عن طريق الفحص المجهري أو عن طريق فحص حمض اليورونيك أو أي اختبار كمي آخر مناسب لتأكيد النمط الظاهري للكبسولة لكل جزء. إذا كان الهدف هو الفصل بناء على التجميع أو حجم الخلية ، فيجب استخدام فحوصات مناسبة مستقلة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

<فئة الشكل = 'الجدول'><فئة الجدول = 'ck-table-resize'>List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments PercollGE Healthcare17-0891-01 الطرد المركزي 5810R مع دوار A-4-81 ودلاء 500 ملEppendorf5810 718.007 محولات لأنابيب 15 ملEppendorf5810 722.004دوار بزاوية ثابتة F-34-6-38Eppendorf5804 727.002 2.6 - 7 مل محول أنبوبEppendorf5804 739.000 جهاز طرد مركزي 5424 بما في ذلك الدوار FA-45-24-11Eppendorf5424 000.460 5 مل من مادة البولي بروبيلين أنبوب القاع المستديرFalcon352063

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Discontinuous Density GradientBacterial Capsule SeparationDensity Gradient CentrifugationCapsule Amount AnalysisTransposon Mutant LibraryBacterial Strain IsolationColloidal Silica GradientFixed Angle RotorBench top CentrifugeDownstream Analysis

Related Articles