$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. السلالات البكتيرية
ملاحظه: في هذه التجربة ، تم استخدام تسع سلالات قياسية ، بما في ذلك السالمونيلا نظيرة التيفي أ ، والسالمونيلا نظيرة التيفية ب ، ونواة فوزوباكتيريا ، والمكورات المعوية البرازية ، والمكورات العنقودية الذهبية ، والزائفة الزنجارية PAO1 ، و Aeromonas hydrophila YJ-1 ، و Proteus vuigaris ، و Klebsiella pneumoniae. السالمونيلا نظيرة التيفي يمكن أن تنتج A و Fusobacterium nucleatum و Pseudomonas aeruginosa و Proteus vuigaris H2S.
- تحضير الثقافة البكتيرية
- انقل مستعمرة بكتيرية واحدة من السالمونيلا نظيرة التيفية أ ، والسالمونيلا نظيرة التيفية ب ، والمكورات المعوية البرازية ، والمكورات العنقودية الذهبية ، والزائفة الزنجارية PAO1 ، و Aeromonas hydrophila YJ-1 ، و Klebsiella pneumoniae من صفيحة أجار Luria-Bertani (LB) إلى 100 مل من وسط LB والثقافة عند 37 درجة مئوية لمدة 12-16 ساعة حتى يصبح تركيز البكتيريا حوالي 1 × 109 خلايا / مل (كما هو موضح في OD600 = 1).
- انقل مستعمرة بكتيرية واحدة من Fusobacterium nucleatum و Proteus vuigaris من ألواح أجار مرق الصويا (TSB) إلى 100 مل من وسط TSB والثقافة عند 37 درجة مئوية لاهوائية لمدة 24 ساعة حتى يصبح تركيز البكتيريا حوالي 1 × 109 خلايا / مل (كما هو موضح في OD600 = 1).
2. اختبار الكشف H2S
- اختبار إنتاج كبريتيد الهيدروجين
- امزج 100 ميكرولتر من الثقافة البكتيرية مع 100 ميكرولتر من محلول البزموت المحضر حديثا (الرقم الهيدروجيني 8.0 ؛ 10 ملي مولار كلوريد البزموت (III) ، 0.4 مللي ثري إيثانول أمين - حمض الهيدروكلورايد ، 20 ملي مولار بيريدوكسال 5-فوسفات مونوهيدرات ، 20 ملي مولار EDTA (حمض الإيثيلين ديامين رباعي الخليك) ، و 40 ملي مولار ل-سيستين) في ألواح ميكروتيتر 96 بئرا ومزرعة لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية. لكل سلالة بكتيرية ، قم بإجراء التحليل ثلاث نسخ.
- بعد 20 دقيقة ، تحقق من تغيير اللون. إذا تغير لون المحلول من الأصفر الفاتح إلى الأسود ، فهذا يشير إلى أن البكتيريا قادرة على إنتاج H2S. كرر هذا القياس 3x.
- حساسية الطريقة
- تحديد حساسية الطريقة باستخدام تركيزات مختلفة من هيدروكبريتيد الصوديوم (NaHS): 2 ملي مولار ، 1 ملي مولار ، 0.8 ملي مولار ، 0.6 ملي مولار ، 0.4 ملي مولار ، 0.2 ملي مولار ، 0.1 ملي مولار ، و 0 ملي مولار ، ممزوجة بمحلول BS (كبريتيد الزموت ).
- تحديد وجود HS−/S2− من خلال ملاحظة تكوين راسب BS أسود. سجل لون الآبار باستخدام مقياس مرئي من عدم إنتاج الألوان (-) إلى إنتاج الألوان السوداء الداكنة (++++++).