طريقة بصرية حساسة للكشف عن البكتيريا المنتجة لكبريتيد الهيدروجين

الملخص

المصدر: Zhu ، W. ، & Chu ، W. الطريقة البصرية الحساسة للكشف عن البكتيريا المنتجة لكبريتيد الهيدروجين. J. Vis. خبرة. (2022)

يوضح هذا الفيديو طريقة بصرية حساسة للكشف السريع عن البكتيريا المنتجة لكبريتيد الهيدروجين. يشير تغير اللون من الأصفر إلى الأسود إلى النشاط البكتيري من خلال تكوين كبريتيد البزموت.

البروتوكول

1. السلالات البكتيرية

ملاحظه: في هذه التجربة ، تم استخدام تسع سلالات قياسية ، بما في ذلك السالمونيلا نظيرة التيفي أ ، والسالمونيلا نظيرة التيفية ب ، ونواة فوزوباكتيريا ، والمكورات المعوية البرازية ، والمكورات العنقودية الذهبية ، والزائفة الزنجارية PAO1 ، و Aeromonas hydrophila YJ-1 ، و Proteus vuigaris ، و Klebsiella pneumoniae. السالمونيلا نظيرة التيفي يمكن أن تنتج A و Fusobacterium nucleatum و Pseudomonas aeruginosa و Proteus vuigaris H₂S.

1. تحضير الثقافة البكتيرية
   1. انقل مستعمرة بكتيرية واحدة من السالمونيلا نظيرة التيفية أ ، والسالمونيلا نظيرة التيفية ب ، والمكورات المعوية البرازية ، والمكورات العنقودية الذهبية ، والزائفة الزنجارية PAO1 ، و Aeromonas hydrophila YJ-1 ، و Klebsiella pneumoniae من صفيحة أجار Luria-Bertani (LB) إلى 100 مل من وسط LB والثقافة عند 37 درجة مئوية لمدة 12-16 ساعة حتى يصبح تركيز البكتيريا حوالي 1 × 10⁹ خلايا / مل (كما هو موضح في OD₆₀₀ = 1).
   2. انقل مستعمرة بكتيرية واحدة من Fusobacterium nucleatum و Proteus vuigaris من ألواح أجار مرق الصويا (TSB) إلى 100 مل من وسط TSB والثقافة عند 37 درجة مئوية لاهوائية لمدة 24 ساعة حتى يصبح تركيز البكتيريا حوالي 1 × 10⁹ خلايا / مل (كما هو موضح في OD₆₀₀ = 1).

2. اختبار الكشف H₂S

1. اختبار إنتاج كبريتيد الهيدروجين
   1. امزج 100 ميكرولتر من الثقافة البكتيرية مع 100 ميكرولتر من محلول البزموت المحضر حديثا (الرقم الهيدروجيني 8.0 ؛ 10 ملي مولار كلوريد البزموت (III) ، 0.4 مللي ثري إيثانول أمين - حمض الهيدروكلورايد ، 20 ملي مولار بيريدوكسال 5-فوسفات مونوهيدرات ، 20 ملي مولار EDTA (حمض الإيثيلين ديامين رباعي الخليك) ، و 40 ملي مولار ل-سيستين) في ألواح ميكروتيتر 96 بئرا ومزرعة لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية. لكل سلالة بكتيرية ، قم بإجراء التحليل ثلاث نسخ.
   2. بعد 20 دقيقة ، تحقق من تغيير اللون. إذا تغير لون المحلول من الأصفر الفاتح إلى الأسود ، فهذا يشير إلى أن البكتيريا قادرة على إنتاج H₂S. كرر هذا القياس 3x.
2. حساسية الطريقة
   1. تحديد حساسية الطريقة باستخدام تركيزات مختلفة من هيدروكبريتيد الصوديوم (NaHS): 2 ملي مولار ، 1 ملي مولار ، 0.8 ملي مولار ، 0.6 ملي مولار ، 0.4 ملي مولار ، 0.2 ملي مولار ، 0.1 ملي مولار ، و 0 ملي مولار ، ممزوجة بمحلول BS (كبريتيد الزموت ).
   2. تحديد وجود ^HS−/S²⁻ من خلال ملاحظة تكوين راسب BS أسود. سجل لون الآبار باستخدام مقياس مرئي من عدم إنتاج الألوان (-) إلى إنتاج الألوان السوداء الداكنة (++++++).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
كلوريد البزموت (III)	شنغهاي ماكلين الكيمياء الحيوية المحدودة	7787-60-2
إيدتا	نانجينغ الكاشف الكيميائي المحدودة	60-00-4
Fusobacterium nucleatum	ATCC	25586
لسيستين	أمريسكو	52-90-4
ثلاثي إيثانول أمين-حمض الهيدروكلوريك	شنغهاي علاء الدين التكنولوجيا الكيميائية الحيوية المحدودة	637-39-8
هيدروكبريتيد الصوديوم
ماصه