مقالة منهجية

تصوير وقياس استجابات تجنب السرب لإجهاد المضادات الحيوية في الزائفة الزنجارية

سبتمبر 26, 2025

في هذه المقالة

الملخص

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Bru, J., et.al. تصوير بفاصل زمني للأسراب البكتيرية والاستجابة الجماعية للإجهاد. J. Vis. خبرة. (2020)

يوضح هذا الفيديو كيفية تصور وقياس سلوك تجنب السرب في Pseudomonas aeruginosa باستخدام مقايسة لوحة أجار المحتشدة. يعرض إعداد التصوير بفاصل زمني في ظل ظروف خاضعة للرقابة ويشرح كيف تعيد إشارات الإجهاد الناجم عن المضادات الحيوية توجيه حركة البكتيريا ، والتي يتم قياسها كميا من خلال تحليل الصور.

البروتوكول

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. الحصول على الصور باستخدام الماسح الضوئي

  1. قلل من الإضاءة المحيطة لأطباق بتري عن طريق إرفاق قماش أسود غير لامع بحامل 40-60 سم فوق الماسحة الضوئية للمستندات المسطحة. قم بتثبيته باستخدام أربطة مضغوطة (الشكل 1 ب).
  2. سيتم التحكم في الماسح الضوئي باستخدام برنامج المسح الضوئي وبرنامج البرمجة النصية التلقائي.
    1. في برنامج المسح الضوئي، حدد Home Mode (الشكل 2A). التقط الصور بالألوان عن طريق تحديد اللون ضمن نوع الصورة. لضبط جودة الصورة ، حدد Other ضمن Destination واضبط الدقة على 300 نقطة في البوصة. احتفظ بالحجم القياسي للصور عن طريق تحديد الأصل للحجم المستهدف. اترك جميع الخيارات ضمن تعديلات الصورة دون تحديد لجودة الصورة القياسية. ملاحظه: يتم تعيين الحجم المستهدف إلى الأصل افتراضيا. لتحديد خيارات أخرى للحجم المستهدف ، انقر فوق معاينة أولا.
  3. قم بتعيين مسار حفظ الصور بالنقر فوق رمز المجلد على يمين المسح لفتح إعدادات حفظ الملفات (الشكل 2 أ).
    1. حدد وجهة المجلد لحفظ الصور عن طريق تحديد أخرى ضمن الموقع وانقر فوق استعراض. اختر مجلدا لحفظ الصور.
    2. قم بتسمية الصور في مربع نص البادئة. قم بتعيين رقم البدء 001 لبدء تسلسل التسمية للصور. اضبط تنسيق الملف على JPEG عن طريق اختيار JPEG (* .jpg) للكتابة ضمن تنسيق الصورة وانقر فوق خيارات لضبط التفاصيل. اضبط جودة تنسيق الصورة عن طريق ضبط مستوى الضغط على 16 ، والترميز إلى قياسي ، والتحقق من تضمين ملف تعريف ICC. انقر فوق موافق لإغلاق النافذة (الشكل 2 ب).
    3. اترك الخيار الأول دون تحديد ("الكتابة فوق أي ملفات تحمل نفس الاسم") وحدد الخيارات الثلاثة التالية ("إظهار مربع الحوار هذا قبل الفحص التالي" ، "فتح مجلد الصورة بعد المسح" ، و "إظهار مربع حوار إضافة صفحة بعد المسح"). انقر فوق موافق لإغلاق النافذة
    4. تحقق من جودة الصورة بالنقر فوق معاينة. تظهر نافذة المعاينة، وتصبح أيقونة المسح وظيفيا (الشكل 2 ج).
  4. استخدم برنامج البرمجة النصية لأتمتة الحصول على الصور. ينقر البرنامج النصي المقدم على المسح الضوئي في نافذة المسح الضوئي وموافق في نافذة إعدادات حفظ الملفات على فترات زمنية مدتها 30 دقيقة.
    1. قم باستيراد البرنامج النصي بالنقر فوق مهمة | قم باستيراد وتحديد كل من Single_scan.tsk و Idle_scanning.tsk. انظر الشكل 2 د. ملاحظة: ينقر Single_scan.tsk على الزر Scan (مسح ضوئي) في نافذة Scan (مسح ضوئي) و"موافق" في نافذة File Save Settings (إعدادات حفظ الملفات). Idle_scanning.tsk ينشط Single_scan.tsk كل 30 دقيقة. يمكن للمرء تغيير تردد المسح عن طريق تغيير تنشيط Idle_scanning.tsk.
    2. قم بتمكين المسح التلقائي على فترات زمنية مدتها 30 دقيقة عن طريق تحديد كل من المسح الخامل (المستورد) والمسح الضوئي الفردي (المستورد) ، والنقر بزر الماوس الأيمن على المسح الخامل (مستورد) ، والنقر بزر الماوس الأيسر على ممكن (الشكل 2 د).

ملاحظه: يتم تشغيل الفحص التلقائي حتى يقوم المستخدم بإيقاف البرنامج النصي يدويا. لإيقاف البرنامج النصي ، حدد المسح الخامل (مستورد) ، وانقر بزر الماوس الأيمن فوق المسح الخامل (مستورد) ، وانقر بزر الماوس الأيسر فوق ممكن. ستتم إزالة علامة الاختيار.

2. تجميع صور الفاصل الزمني وقياس تنافر السرب

  1. قم بإجراء تحرير الأفلام وتحليل الصور باستخدام ImageJ.
  2. قم باستيراد جميع الصور الممسوحة ضوئيا إلى ImageJ بالنقر فوق ملف | استيراد | تسلسل الصور وحدد الصور. في نافذة خيارات التسلسل ، حدد تحويل إلى RGB للاحتفاظ بالألوان للصور. يشير عدد الصور إلى عدد الصور المحددة.
  3. استمر في بدء الصورة عند 1 للبدء من الصورة الأولى في المجلد وتغيير حجم الصور بنسبة 100٪ للحفاظ على الحجم الأصلي للصور. اترك استخدام المكدس الظاهري دون تحديد. انقر فوق موافق وانتظر حتى يتم تحميل الصور (الشكل 3 أ).
  4. اضبط مستوى ضغط الفيديو على 100 بالنقر فوق تحرير | خيارات | الإدخال/الإخراج... واضبط جودة JPEG على 100.
  5. احفظ الملف ك.avi بالنقر فوق ملف | حفظ باسم | أفي. اضبط الضغط على JPEG ومعدل الإطارات إلى 5 إطارات في الثانية (الشكل 3B). احفظ .avi الفاصل الزمني في المجلد المطلوب.
  6. لقياس مسافات تنافر السرب، افتح صورة بالقرب من نهاية فترة الحشد في ImageJ. انقر فوق ملف | افتح الصورة وحددها. اضبط المقياس بالنقر فوق تحليل | اضبط المقياس وضبط المسافة بالبكسل على 118 ، والمسافة المعروفة على 1 ، ونسبة العرض إلى الارتفاع للبكسل على 1.0 ، ووحدة الطول على سم (الشكل 3 ج). اترك Global دون رادع. انقر فوق موافق لإغلاق النافذة.
  7. انقر فوق أيقونة Straight وقم بالقياس من مركز المستعمرة في موضع القمر الصناعي إلى حافة السكان. حدد تحليل | قم بالقياس لإظهار نافذة جديدة مع القياسات (الطول) (الشكل 3D). ملاحظه: استخدم "+" للتكبير عن كثب و "-" للتصغير.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
figure-results-1

الشكل 1: إعداد الماسح الضوئي داخل الحاضنة. (أ) أغطية أطباق بتري سوداء. تستخدم هذه الأغطية أثناء المسح الضوئي لتقليل انعكاسات الضوء واستبدال أغطية أطباق بتري الشفافة. (ب) يتم وضع الماسح الضوئي للمستندات المسطحة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الكواشف   
باكتو أجار ، مجففبي دي ديفكو214010للوحة LB-agar ولوحة أجار الاحتشاد
أحماض الكامينوبي دي ديفكو223050لوسائل الإعلام الجماعية
د الجلوكوزفيشر للكيماوياتد16500سكر العنب. لوسائل الإعلام الجماعية
كبريتات المغنيسيوم سباعي الهيدراتسيجما ألدريتش230391لوسائل الإعلام الجماعية
فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدةسيجما ألدريتشص 0662لوسائط 5X M8
كلوريد الصوديومسيجما ألدريتشس 9888لوسائط 5X M8
فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدة سباعي الهيدراتفيشر للكيماوياتس373لوسائط 5X M8
سلالات   
الزائفة الزنجاريةمختبر سيريابورنرفقة 27E.118سلالة PA14
مؤن   
طلاء بخاخ أسودكريلون5592 أسود غير لامعللأغطية السوداء
8 بوصة ربطات بسحابغاردنر بندرE173770لربط القماش الأسود غير اللامع
أطباق بتري (100 مم × 15 مم)صيادFB0875712ألواح البوليسترين 100 × 15 مم
معدات   
إيمج جيالمؤسسهالإصدار 1.52 أبرنامج لتحليل الصور
حاضنهVWR89032-092لنمو البكتيريا عند 37 درجة مئوية
ماسح ضوئيإبسونإبسون الكمال V370 صورماسح ضوئي للوحات التصوير
برنامج أتمتة الماسح الضوئيRoboTask لايتالإصدار 7.0.1.932للتصوير الداخلي لمدة 30 دقيقة
برنامج الحصول على صور الماسحة الضوئيةإبسونالإصدار 9.9.2.5الولايات المتحدةبرنامج للوحات التصوير

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

ImageJ AVI

مقالات ذات صلة