تحريض تمايز ضمة الانحلال الباراهيموليكي إلى خلايا سرب

الملخص

المصدر: Heering, J., et al. تحريض التمايز الخلوي وتصوير الخلية المفردة للضمة paraheemolyticus السباح والخلايا السرية. J. Vis. خبرة. (2017)

يوضح هذا الفيديو تحريض تمايز الخلايا السربية في Vibrio parahaemoemoticus باستخدام وسط أجار معد خصيصا. من خلال التلاعب بالإشارات البيئية مثل استنفاد الحديد ، ومكملات الكالسيوم ، والتلامس السطحي ، يتم تحفيز البكتيريا على الانتقال من شكل السباح إلى خلايا سرب ممدودة مع سوط جانبي. تنتشر هذه الخلايا المتمايزة عبر السطح الصلب ، وتشكل توهجات سرب مميزة تدل على التغيير المورفولوجي الناجح.

البروتوكول

1. تحريض تمايز الخلايا السريب

ملاحظه: توضح الخطوات التالية كيفية إحداث تمايز V. parahaemolyticus في دورة حياة الخلية السريب وكيفية تحفيز التكاثر على الأسطح الصلبة.

1. 4 جم من ضخ القلب (HI) أجار في 100 مل ddH₂O لتحضير ألواح السرب.

2. اغلي محلول HI agar بحذر في الميكروويف ورجي الزجاجة من وقت لآخر حتى يذوب المسحوق. الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.

3. بعد التعقيم ، قم بتبريد أجار HI إلى 60-65 درجة مئوية. أضف 2،2'-Bipyridyl إلى تركيز نهائي يبلغ 50 ميكرومتر (محلول مخزون 50 ملي مولار في 100٪ إيثانول). أضف C....

النتائج

الشكل 1: تحريض تمايز السرب وإعداد الخلايا للتصوير المجهري. تصور مبسط لسير العمل لإنتاج خلايا V. parahaemolyticus وإعداد شرائح مجهرية لتحليل المجهري لخلايا السرب المفردة. (أ) بقعة 1 ميكرولتر من OD₆₀₀ = 0.8 ث.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
مكونات الوسائط
LB متوسط	روث	عدد X968.3
ديفكو أجار ، حبيبات	دينار بحريني	214510	لتحضير أجار LB مع وسط LB
ديفكو هارت إنفيوجن أجار	دينار بحريني	244400	لتحضير لوحات حشد HI agar
Agarose NEEO ، جودة فائقة	روث	2267.3	لتحضير وسادات الاغاروز المجهرية
المضافات
2،2'-بيبيريديل	سيجما ألدريتش	D216305-25 جرام	لتحضير لوحات حشد HI agar
كلوريد الكالسيوم ثنائي الهيدرات	روث	5239.1	لتحضير لوحات حشد HI agar
الاجهزه
طبق بتري 150 مم × 20 مم مع كاميرات	سارستيدت	82.1184.500	لتحضير لوحات حشد HI agar
كلفيترون تي (ب 6420)	هيريوس	-	تستخدم لتجفيف ألواح احتشاد HI agar