وسيط كروموجيني جديد للكشف السريع عن أنواع الضمة

الملخص

المصدر: Yeung، M.، et al. تطوير وسط أجار كروموجيني أكثر حساسية وتحديدا للكشف عن الضمة parahaemolyticus وأنواع الضمة الأخرى. J. Vis. خبرة. (2016)

يوضح هذا الفيديو طريقة قائمة على الثقافة لتحديد أنواع الضمة ، مع تسليط الضوء على أجار الكروموجين كبديل أكثر دقة للثيوسلفات - سيترات - الأملاح الصفراوية - السكروز أو أجار TCBS. يوفر الأجار الكروموجينيك تمايزا فائقا لسلالات الضمة من خلال اكتشاف الأنشطة الأنزيمية الخاصة بالأنواع.

البروتوكول

النمو في الوسائط الانتقائية والتفاضلية

1. قبل يومين إلى أربعة أيام من التجربة ، قم بوضع جميع السلالات الميكروبية على وسط غير انتقائي (TSAS أو BHI أو أجار الشوكولاتة) لعزل المستعمرة. احتضان الألواح عند 35-37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة. تحقق من نقاء الثقافات من خلال مراقبة مورفولوجيا المستعمرة بعد الحضانة. يجب أن تنتج الثقافات النقية مستعمرات تظهر مورفولوجيا مستعمرة مماثلة.
2. انقل بعض المستعمرات المعزولة إلى 5 مل من المرق. احتضان الأنابيب عند 35-37 درجة مئوية لمدة 16-24 ساعة.

ملاحظه: استخدم المستعمرات الصغيرة ، التي يقل عمرها عن أربعة أيام ، لإعداد الثقافات الليلية في جميع التجارب.

3. قم بتشكيل حلقة من الثقافات بين عشية وضحاها على وسائط انتقائية وتفاضلية (TCBS وأجار كروموجينيك) لعزل المستعمرة. احتضان الألواح عند 35-37 درجة مئوية لمدة تصل إلى 96 ساعة.
4. سجل النمو الكلي لجميع السلالات من خلال فحص كل من كثافة الاستزراع على الصفيحة وحجم المستعمرات المعزولة. سجل لون المستعمرات تحت الضوء المحيط و / أو الأشعة فوق البنفسجية. لاحظ الخصائص الأخرى للمستعمرة المعزولة ، مثل الارتفاع والهامش والشكل.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
كاشف/معدات
اجار	فيشر العلمية	DF0140-15-4	قد تستخدم ماركات أخرى
مسحوق BHI	فيشر العلمية	DF0418-17-7	قد تستخدم ماركات أخرى
مولد غاز CampyGen	هاردي دياگنوستيكس	CN035A	لتوفير جو محب للميكروهول. قد تستخدم ماركات أخرى
أطباق أجار الشوكولاتة	هاردي دياگنوستيكس	[إ14]	قد تستخدم ماركات أخرى
أنابيب الاستزراع	فيشر العلمية	س50712	قد تستخدم ماركات أخرى
لوحات أجار HardyChrom Vibrio	هاردي دياگنوستيكس	جي 319	تقيم هذه الدراسة هذه الوسيلة
حاضنه	أي
حلقات التلقيح	فيشر العلمية	22-363-606	تم استخدام 10 ميكرولتر بحجم في هذه الدراسة
طبق بتري	فيشر العلمية	FB0875713	قد تستخدم ماركات أخرى
ماصة ونصائح	أي نصائح معقمة
مسحوق TCBS	هاردي دياگنوستيكس	265020	تقيم هذه الدراسة هذه الوسيلة
مسحوق TSB	فيشر العلمية	DF0370-07-5	قد تستخدم ماركات أخرى
خزانة عرض الأشعة فوق البنفسجية	أي		تنبعث منها ضوء الأشعة فوق البنفسجية طويل الموجة
حمام مائي	أي
الأنواع والسلالات البكتيرية
Aeromonas hydrophila	ATCC
المبيضات البيضاء	ATCC
العطيفة الصائمية	ATCC
الإشريكية القولونية	ATCC
بروتيوس ميرابيليس	ATCC
الزائفة الزنجارية	ATCC
المكورات العنقودية الذهبية	ATCC
السالمونيلا الكوليراسويس	ATCC
شيغيلا بويدي	ATCC
شيغيلا فليكسنيري	ATCC
شيغيلا سوني	ATCC
ضمة الجينوليتيكوس	ATCC
V. cholerae (تشمل الأنماط المصلية O139 ، O1 ، غير O1 ، El Tor biovars)	إدارة الغذاء والدواء ، ATCC
ف. دامسيلا	العقاقير
V. fisheri	وسط
V. fluvialis	مراكز مكافحة الأمراض والوقاية منها (CDC)
V. furnissii	مراكز مكافحة الأمراض والوقاية منها (CDC)
ف. هوليسا	العقاقير
ف. ميتشنيكوفي	ATCC
V. التقليد	العقاقير
V. paraheemolyticus (تشمل الأنماط المصلية O3: K6 و O1: K56 و O4: K8 و O5: K15 و O8 وما إلى ذلك)	ATCC ، إدارة الغذاء والدواء ، CDC ، البيئة
V. proteolyticus	العقاقير
V. vulnificus	العقاقير