فحص فيضان الشتلات لفحص المقاومة البكتيرية في الطماطم

الملخص

المصدر: حسن ، ج. أ. ، وآخرون. تحديد عالي الإنتاجية لمقاومة Pseudomonas syringae الكهروضوئية. طماطم في الطماطم باستخدام فحص فيضان الشتلات. J. Vis. خبرة. (2020).

يوضح هذا الفيديو طريقة للكشف عن المقاومة البكتيرية في سلالات الطماطم المختلفة باستخدام شتلات عمرها عشرة أيام ملقحة بمعلق بكتيري. يشرح كيف تغزو البكتيريا من خلال الثغور ، وتقدم بروتينات مستجيبة لقمع مناعة النبات ، وكيف تختلف استجابات النبات بين السلالات الحساسة والمقاومة. يتم تقييم النتيجة من خلال ملاحظة اختلافات النمو المرئية ، حيث تظل النباتات المقاومة صحية وحساسة تظهر تلف الأنسجة.

البروتوكول

1. طريقة فيضان شتلات الطماطم

1. أخرج الألواح التي تحتوي على الشتلات البالغة من العمر 10 أيام من غرفة النمو وضعها في خزانة السلامة الحيوية لتحضير الألواح للفيضانات.
2. قم بإزالة الشريط الجراحي من لوحين
3. اضبط مؤقتا لمدة 3 دقائق. قم بقياس 6 مل من اللقاح النهائي ل P. syringae الكهروضوئي. الطماطم (Pst) (Pst19 OD₆₀₀ = 0.0075 أو PstDC3000 OD₆₀₀ = 0.005) ونقل 6 مل من اللقاح إلى كل طبق مع الشتلات البالغة من العمر 10 أيام.
4. ادفع الشتلات برفق لأسفل إلى اللقاح بطرف ماصة معقم. ابدأ المؤقت.
5. امسك طبقا واحدا في كل يد. قم بإمالة الجزء الأمامي من اللوحة لأسفل لتجميع اللقاح وغمر الفلقات وأوراق الشتلات بشكل أساسي.
6. حرك من جانب إلى آخر من 5 إلى 7 مرات ثم اقلب الألواح للخلف لتغطية الجذور والطبق بأكمله.
7. قم بإمالة الألواح لأسفل مرة أخرى لغمر الفلقات والأوراق ، وكرر ذلك لمدة 3 دقائق.
8. اسكب اللقاح من الألواح ، ضع الألواح على سطح مستو ، ثم اسكب أي لقاح متبقي مرة ثانية.
9. أعد لف الألواح بشريط جراحي وكرر الخطوات 1.2-1.8 لأي ألواح متبقية.
10. أعد احتضان الألواح في غرفة النمو بعد غمر جميع الألواح.

النمط الظاهري بعد 7-10 أيام ل PstDC3000 أو 10-14 يوما ل Pst19.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
خزانة السلامة الحيوية ، الفئة الثانية من النوع A2
كوفيت بلاستيك يمكن التخلص منه من العلامة التجارية ، بوليسترين	VWR الدولية	47744-642
الشنيل كرافت المسواك الخشب المسطح	VWR الدولية	500029-808
زجاج الكحول الموقد الفتيل	فيشر العلمية	S41898A / لا. دبليو 125
مواقد الكحول الزجاجية	فيشر العلمية	S41898 / رقم ب 125
كاشف الجلسرين ACS	VWR الدولية	EMGX0185-5
Kimberly-Clark™ Kimtech Science™ Kimwipes™ مساحات المهام الحساسة	فيشر العلمية	06-666-أ
كلوريد المغنيسيوم ، درجة ACS	VWR الدولية	97061-356
كبريتات المغنيسيوم سباعي الهيدرات ، درجة ACS	VWR الدولية	97062-130
أنابيب الطرد المركزي الدقيقة، 1.5 مل
أنابيب الطرد المركزي الدقيقة، 2.2 مل
Murashige & Skoog ، الأملاح القاعدية	مختبرات كايسون ، إنك	MSP01-50LT
ماصة بيبت لايت XLS LTS 8-CH 20-200 وحدة	مطرين	L8-200XLS
ماصة ماصة بيبت لايت XLS LTS 8-CH 2-20uL	مطرين	L8-20XLS
طبق بتري معقم من البوليسترين 100 مم × 25 مم	VWR الدولية	89107-632
طبق بتري معقم من البوليسترين 150 مم × 15 مم	فيشر العلمية	FB08-757-14
بوليسترين 150x15mm طبق بتري معقم	فيشر العلمية	08-757-148
نصائح LTS 20 ميكرولتر 960/10 GPS-L10	مطرين	17005091
نصائح LTS 250 ميكرولتر 960/10 GPS-L250	مطرين	17005093